斑馬缺硒病的血液細(xì)胞和血液生化指標(biāo)測(cè)定

徐磊， 吳登虎， 陳飛蘭， 張鄧華， 周俊， 王曉佳， 潘永全， 畢小云

(1. 重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，重慶400016； 2. 重慶動(dòng)物園，重慶400050；3. 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶400016)

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斑馬缺硒病的血液細(xì)胞和血液生化指標(biāo)測(cè)定

徐磊1， 吳登虎2， 陳飛蘭1， 張鄧華2， 周俊2， 王曉佳2， 潘永全1， 畢小云3*

(1. 重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，重慶400016； 2. 重慶動(dòng)物園，重慶400050；3. 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶400016)

以某動(dòng)物園中經(jīng)臨床觀(guān)察、病理學(xué)檢查、血液細(xì)胞和血液生化分析方面診斷為缺硒的4只斑馬為研究對(duì)象，3只健康斑馬作為對(duì)照,分析缺硒斑馬血液細(xì)胞和血液生化檢測(cè)值的變化，探討斑馬缺硒病的診斷方法。結(jié)果表明：缺硒病斑馬的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白量下降，中性粒細(xì)胞百分比上升而淋巴細(xì)胞百分比下降，血液生化指標(biāo)分析顯示乳酸脫氫酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和肌酸激酶活性升高，尿酸含量和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力顯著下降。這一結(jié)果在斑馬缺硒病的診斷中具有重要意義。

斑馬；硒缺乏；血液學(xué)指標(biāo)

斑馬是一類(lèi)常見(jiàn)于非洲的動(dòng)物，屬奇蹄目Perissodactyla馬科Equidae，包括普通斑馬Equusquagga、狹紋斑馬E.grevyi和山斑馬E.zebra(孫忻，2014)。斑馬在國(guó)內(nèi)動(dòng)物園具有很高的展出和觀(guān)賞價(jià)值，因此各動(dòng)物園都十分重視斑馬的飼養(yǎng)、繁殖和疾病防治。目前關(guān)于斑馬的研究主要集中在生活習(xí)性、寄生蟲(chóng)和細(xì)菌微生物引起的傳染性疾病(陳永林等，2000；王喜軍等，2014)，以及一些馬屬動(dòng)物的常見(jiàn)病，如便秘結(jié)癥、脹氣、腹瀉及關(guān)節(jié)扭傷等外傷。

某動(dòng)物園飼養(yǎng)斑馬已有多年歷史。近年來(lái)，該園發(fā)生4只斑馬同期發(fā)病的情況，以運(yùn)動(dòng)障礙、呼吸困難為主要病征，經(jīng)臨床觀(guān)察、尸體解剖、病理學(xué)檢查、血液細(xì)胞和血液生化指標(biāo)分析，最后確診為斑馬缺硒病。

硒是生物體必需的微量元素，同時(shí)硒蛋白作為哺乳動(dòng)物酶系統(tǒng)的基本成分，可以分解正常代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有毒過(guò)氧化物，進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞中重要的膜結(jié)構(gòu)不受損害(趙春霞，楊煥民，2004；汪開(kāi)毓等，2009)。當(dāng)動(dòng)物體內(nèi)缺硒或者供給不足時(shí)，就會(huì)造成動(dòng)物機(jī)體在生理生化、營(yíng)養(yǎng)代謝過(guò)程中發(fā)生紊亂，引起機(jī)體細(xì)胞變性壞死，出現(xiàn)一系列疾病，如常見(jiàn)于羔羊、仔豬、犢牛幼畜的營(yíng)養(yǎng)性肌病或白肌病、雞滲出性素質(zhì)病、仔豬肝營(yíng)養(yǎng)不良和桑葚心等(董勇等，2011；丁元霞，2013)。

本文主要從血液生理生化指標(biāo)分析、指標(biāo)測(cè)定探討斑馬缺硒病的診斷方法，為斑馬缺硒病診斷學(xué)方面提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物來(lái)源與血樣制備

采集4只患病斑馬和3只健康斑馬頸靜脈血各2份，1份作全血的血液細(xì)胞學(xué)分析，1份作血液生化指標(biāo)分析(Calamarietal.，2010)。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 生化儀(RL7600-110)，血球計(jì)數(shù)儀Sysmex xe-2100，721分光光度計(jì)，試劑盒，顯微鏡。

1.2.2 測(cè)定項(xiàng)目與測(cè)定方法 采用血球計(jì)數(shù)儀Sysmex xe-2100測(cè)定紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、紅細(xì)胞比容(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、血紅蛋白(HGB)、平均血紅蛋白含量(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)、血小板壓積(PCT)；在顯微鏡下做白細(xì)胞數(shù)(WBC)測(cè)定；同時(shí)采用瑞氏染色法(瑞氏染色劑若干)，在油鏡下對(duì)白細(xì)胞作分類(lèi)計(jì)數(shù)，即淋巴細(xì)胞(LYM)、中性粒細(xì)胞(GRA)等進(jìn)行測(cè)定。采用全自動(dòng)生化儀測(cè)定總蛋白(TP，雙縮脲法，批號(hào)1014021)、白蛋白(ALB，BCG法，批號(hào)69976501)、肌酐(Cr，肌氨酸氧化酶法，批號(hào)0814191)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT，速率法，批號(hào)60157301)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST，速率法，批號(hào)60208901)、尿酸(UA，酶法，批號(hào)0814071)；堿性磷酸酶(ALP，速率法，批號(hào)1214081)；尿素(Urea，酶法，批號(hào)0814081)；γ-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶(GGT,速率法，批號(hào)0714051，四川邁克生物科技股份有限公司)；總膽紅素、直接膽紅素(TBIL、DBIL，釩酸鹽法，批號(hào)KG972，KH672，日本和光公司)；鉀K、鈉Na、氯Cl(間接ISE法，日立試劑，日立公司)；鈣Ca(比色法，批號(hào)697473，Roche試劑)、乳酸脫氫酶(LDH，速率L-P法，批號(hào)60657601，Roche試劑)、碳酸氫根(終點(diǎn)比色法，批號(hào)60583501，Roche試劑)、肌酸激酶(CK，速率法，批號(hào)604193，Roche試劑)，以及膽堿酯酶(CHE,速率法，批號(hào)60446601，Roche試劑)均為羅氏公司測(cè)定；應(yīng)用試劑盒采用UV方法對(duì)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力進(jìn)行測(cè)定(Montgomeryetal.，2012)。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

所有數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)分析。

2 測(cè)定結(jié)果

2.1 血液細(xì)胞指標(biāo)分析

血液細(xì)胞指標(biāo)分析結(jié)果顯示，缺硒斑馬的白細(xì)胞數(shù)量升高，紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白數(shù)量下降，紅細(xì)胞比容下降，紅細(xì)胞分布寬度升高，淋巴細(xì)胞百分比下降，中性粒細(xì)胞百分比升高，而缺硒對(duì)平均紅細(xì)胞體積、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度、血小板數(shù)、血小板分布寬度、血小板壓積、血小板平均體積的影響較小(表1)。

2.2 血液生化指標(biāo)分析

血液生化指標(biāo)分析結(jié)果表明，缺硒斑馬的ALT、AST、LDH、ALP和CK活性升高，UA含量和GSH-Px活力下降，而缺硒對(duì)Ca、K、Na、Cl、碳酸氫根，以及總蛋白、白蛋白等指標(biāo)的影響較小(表2)。

表1 斑馬血液細(xì)胞分析結(jié)果

表2 斑馬血液生化指標(biāo)結(jié)果

3 討論

本文選取4只缺硒斑馬為研究對(duì)象，經(jīng)血液生化檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其肝功能及心肌酶譜異常，其與白唇鹿Cervusalbirostris缺硒病相似，主要表現(xiàn)在ALT、AST、LDH、CK活性升高(鄧濟(jì)蘇等，2007)。

本文中患病斑馬中性粒細(xì)胞百分比上升而淋巴細(xì)胞百分比下降，且白細(xì)胞總數(shù)升高，與王俊廷和楊淑清(1988)指出成年馬缺硒的嗜中性粒細(xì)胞增多，楊志強(qiáng)(1990)在成年馬屬動(dòng)物缺硒病機(jī)理研究與防治中分析患畜白細(xì)胞總數(shù)和嗜中性白細(xì)胞數(shù)增加、淋巴細(xì)胞減少等相關(guān)研究報(bào)道吻合。紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白的含量下降，這是因?yàn)槿蔽鴷?huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸受到體內(nèi)自由基的攻擊，使得脂質(zhì)過(guò)氧化，膜損傷，進(jìn)而細(xì)胞破裂、溶解，使得紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白的含量降低。

血液生物化學(xué)指標(biāo)分析能夠反映機(jī)體的功能狀況，是疾病診斷及監(jiān)測(cè)的主要內(nèi)容之一。ALP活性升高提示患病斑馬可能有膽汁淤積，這與尸體檢查時(shí)部分個(gè)體全身組織器官黃染相一致；當(dāng)出現(xiàn)肌營(yíng)養(yǎng)不良、肝壞死時(shí)，ALT活性會(huì)升高，這是肝細(xì)胞漿膜損傷的標(biāo)志；AST活性可以反映肝臟損傷程度；當(dāng)腎臟、心肌和骨骼肌等受損時(shí)，血清中LDH活性會(huì)增強(qiáng)。患病死亡斑馬的生化指標(biāo)結(jié)果顯示缺硒導(dǎo)致肝細(xì)胞受損，細(xì)胞膜通透性增加，ALT、AST和LDH的活性顯著升高，這與董勇等(2011)指出缺硒仔豬的LDH活性顯著升高，汪開(kāi)毓等(2009)研究指出缺硒鯉魚(yú)血液中LDH、AST、ALT活性升高等相吻合。本文中病斑馬體內(nèi)CK活性增強(qiáng)在一定程度上反映了病斑馬由于缺硒癥引起了腎臟、心肌和骨骼肌的損害，尿酸含量顯著降低提示硒缺乏可能引起患病斑馬腎臟損傷。而硒是GSH-Px的組成成分，因此，GSH-Px活性的測(cè)定能夠監(jiān)測(cè)動(dòng)物體內(nèi)硒的狀態(tài)并及時(shí)發(fā)現(xiàn)缺硒病(孔祥瑞，1982；劉來(lái)利等，2014)，可以作為診斷斑馬缺硒病的特征性指標(biāo)，為臨床診斷提供重要的參考依據(jù)。

陳永林, 胥哲, 張成林， 等. 2000. 斑馬鏈球菌病的病原診斷[J]. 中國(guó)獸藥雜志, 34(5): 33-34.

鄧濟(jì)蘇, 楊曉黎, 吳登虎, 等. 2007. 重慶地區(qū)圈養(yǎng)白唇鹿血液細(xì)胞和血液化學(xué)指標(biāo)測(cè)定[J]. 四川動(dòng)物, 26(4): 936-937.

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廣西蛇類(lèi)新紀(jì)錄——角原矛頭蝮

2015年4月14日于廣西金秀大瑤山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)發(fā)現(xiàn)1號(hào)亞成體活體蛇類(lèi)標(biāo)本，經(jīng)查閱文獻(xiàn)和鑒定確認(rèn)為角原矛頭蝮Protobothropscornutus，為廣西蛇類(lèi)的新紀(jì)錄。該地點(diǎn)是我國(guó)發(fā)現(xiàn)角原矛頭蝮的第6個(gè)分布點(diǎn)(梁?jiǎn)觯?003；趙爾宓，2006；龔世平等，2010；王聿凡等，2015)。

本次采集的角原矛頭蝮標(biāo)本全長(zhǎng)431.0 mm，頭長(zhǎng)18.3 mm，頭寬13.2 mm，體長(zhǎng)338.7 mm，尾長(zhǎng)74.0 mm，尾長(zhǎng)與全長(zhǎng)之比0.172。頭呈三角形，頭頸部區(qū)分明顯，上頜1對(duì)管牙，鼻眼間有頰窩，頰窩由3片大鱗圍成，其中1枚為第2上唇鱗。上唇鱗10枚，鼻鱗與第1上唇鱗分離。下唇鱗14枚。舌前段為黑色，上眼瞼有角狀凸起，此凸起被有鱗片。頭部被粒鱗，有明顯的“X”狀花紋；兩眼間相連有黑色“V”狀花紋。背部有深色不規(guī)則方形花紋相連，體側(cè)顏色較淺，腹部為淺褐色。背鱗為21-21-17行，腹鱗183枚，尾下鱗78對(duì)，肛鱗單枚，尾尖有1枚尖鱗，背鱗有棱脊。通過(guò)與廣東天井山林區(qū)及浙江省臺(tái)州市仙居縣的角原矛頭蝮標(biāo)本比較，形態(tài)特征基本一致，無(wú)較大差異(龔世平等，2010；王聿凡等，2015)。

廣西大瑤山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)主體位于北回歸線(xiàn)以北的廣西金秀瑤族自治縣境內(nèi)，部分位于廣西荔浦縣和蒙山縣，面積為25 594.7 hm2，地理位置109°50′～110°27′E，23°40′～24°28′N(xiāo)。地質(zhì)構(gòu)造古老，以中山地貌為主。氣候?qū)倌蟻啛釒蛑衼啛釒н^(guò)渡的季風(fēng)區(qū)的顯著山區(qū)類(lèi)型，冬暖夏涼，日照較少，濕度大，雨量充沛，氣候的垂直變化和水平變化明顯，年均氣溫17 ℃。保護(hù)區(qū)內(nèi)植被類(lèi)型眾多，森林覆蓋率達(dá)96.1%，特殊的自然環(huán)境使保護(hù)區(qū)成為廣西物種最豐富、種類(lèi)最復(fù)雜的地區(qū)之一。此次角原矛頭蝮標(biāo)本采集地位于保護(hù)區(qū)的長(zhǎng)灘河片區(qū)內(nèi)，海拔約1200 m，植被為常綠闊葉林，該生境內(nèi)還種植有少量人工杉木林。發(fā)現(xiàn)地點(diǎn)在巡山道附近，距離村莊較近，人為活動(dòng)較為頻繁。根據(jù)對(duì)附近村民的訪(fǎng)問(wèn)后得知，該地區(qū)有一定數(shù)量的角原矛頭蝮種群。

角原矛頭蝮隸屬于蝰科Viperidae原矛頭蝮屬Protobothrops，模式標(biāo)本采自越南，曾被認(rèn)為是越南的特有種(Nguyên，2005；David，2008)。此后，在我國(guó)的廣東省(乳源縣五指山林區(qū)、英德石門(mén)臺(tái)保護(hù)區(qū)和乳源縣天井山林區(qū))、貴州省(荔波茂蘭保護(hù)區(qū))以及浙江省(仙居縣)相繼發(fā)現(xiàn)了該種的分布(梁?jiǎn)觯?003；龔世平等，2010；王聿凡等，2015)。此次在廣西大瑤山地區(qū)發(fā)現(xiàn)的角原矛頭蝮論證了David(2008)等的推測(cè)，他認(rèn)為角原矛頭蝮越南種群和中國(guó)種群之間可能未必真的存在很大的地理隔離，而是缺乏在廣東和廣西高海拔地區(qū)的調(diào)查。同時(shí)，廣西大瑤山地區(qū)發(fā)現(xiàn)角原矛頭蝮印證了越南北部的蛇類(lèi)區(qū)系同中國(guó)廣東和廣西的蛇類(lèi)區(qū)系非常相似的動(dòng)物地理關(guān)系(David，2008；龔世平等，2010)；為進(jìn)一步開(kāi)展角原矛頭蝮的親緣地理學(xué)研究以及地理分布格局演化規(guī)律的探索提供了基礎(chǔ)資料，對(duì)角原矛頭蝮的保護(hù)和分布研究有重要意義。

圖1 角原矛頭蝮Protobothropscornutus(A)及其腹部(B)和頭部(C)

覃琨1*, 廖曉雯2, 譚海明1, 楊雪萌1, 莫運(yùn)明2, 陳偉才2

(1. 廣西大瑤山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局，廣西來(lái)賓545700； 2. 廣西自然博物館，南寧530012)

*通訊作者， E-mail: qinkun2000cn@163.com

西藏札達(dá)發(fā)現(xiàn)印度壽帶

在開(kāi)展西藏第二次陸生野生動(dòng)物資源調(diào)查工作過(guò)程中，于2015年6月18、19日在西藏自治區(qū)札達(dá)縣底雅鄉(xiāng)什布奇村(78°44′45.6″E，31°48′33.8″N，3110 m)、6月19日在底雅鄉(xiāng)底雅村(78°52′5.1″E，31°46′55.5″N，2977 m)觀(guān)察并拍攝到雌性印度壽帶各1只。經(jīng)鑒定，為印度壽帶印巴亞種Terpsiphoneparadisileucogaster(圖1)。

圖1 印度壽帶印巴亞種

形態(tài)特征：該鳥(niǎo)額、頭頂、枕部及耳羽灰褐色，冠羽閃藍(lán)黑色金屬光澤，眼圈鈷藍(lán)色；肩、背、腰、尾上覆羽及尾羽呈一致的赤褐色，中央尾羽稍長(zhǎng)于外側(cè)尾羽；飛羽外翈赤褐色，內(nèi)翈灰色；頦、喉部灰白色；胸部污白色，腹部及尾下覆羽白色。虹膜黑褐色；嘴鈷藍(lán)色，端部黑色；腳鉛色。該亞種與指名亞種T.p.paradisi的區(qū)別在于：該亞種整體體色較淡，喉部灰白色，而后者喉部灰褐色。

生境與生態(tài)：什布奇村及底雅村均位于喜馬拉雅山北麓的象泉河畔，村里有成片的柳樹(shù)Salixsp.、杏樹(shù)Armeniacasp.等闊葉林，當(dāng)?shù)卮迕襁€栽種有青稞Hordeumvulgare等作物(圖2)。印度壽帶單獨(dú)在闊葉林的中下層活動(dòng)，于飛行中捕食蝴蝶、蜻蜓等昆蟲(chóng)。

分類(lèi)及分布：最近的研究表明，壽帶應(yīng)分為印度壽帶T.paradisi，東方壽帶T.affinis和阿穆?tīng)枆蹘.incei3個(gè)獨(dú)立的種(Fabreetal.，2012；Dickinson & Christidis，2014；Andersenetal.，2015；Clementsetal.，2015；Gill & Donsker，2015)。其中，印度壽帶分布于中亞及南亞等地，可分為4個(gè)亞種,其中，leucogaster亞種繁殖于天山西部、阿富汗、巴基斯坦、印度中北部及尼泊爾西部一帶，非繁殖鳥(niǎo)還見(jiàn)于巴基斯坦東部及印度半島等地，saturatior亞種繁殖于尼泊爾東部經(jīng)印度東北部、緬甸北部到我國(guó)云南西部等地，非繁殖鳥(niǎo)見(jiàn)于馬來(lái)半島一帶，paradisi亞種繁殖于印度中部及南部、孟加拉國(guó)、緬甸的西南部，非繁殖鳥(niǎo)見(jiàn)于斯里蘭卡，ceylonensis亞種分布于斯里蘭卡(Gill & Donsker，2015)。

印度壽帶在西藏藏南地區(qū)曾有過(guò)記錄(Aiyadurai，2012；Mizeetal.，2014)，但其在西藏其他地區(qū)并無(wú)分布記載(趙正階，2001；鄭作新等，2010；鄭光美，2011；劉迺發(fā)等，2013)。這一記錄雖未明確為哪一亞種，但從分布區(qū)來(lái)看，與saturatior亞種的已知分布區(qū)一致。leucogaster亞種在札達(dá)應(yīng)為夏候鳥(niǎo)。本次在西藏札達(dá)發(fā)現(xiàn)印度壽帶，有利于了解該物種在我國(guó)的分布。

圖2 生境(郭克疾 攝)

米小其1, 郭克疾2*, 熊嘉武2, 丹丁3, 吳建普3, 鄧學(xué)建4

(1.銅仁學(xué)院生物與農(nóng)林工程學(xué)院，貴州銅仁554300；

2.國(guó)家林業(yè)局中南林業(yè)調(diào)查規(guī)劃設(shè)計(jì)院，長(zhǎng)沙410014；

3.西藏自治區(qū)林業(yè)調(diào)查規(guī)劃研究院，拉薩850000；

4.湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，長(zhǎng)沙410081)

基金項(xiàng)目：貴州省教育廳自然科學(xué)研究青年項(xiàng)目

(黔教合KY字[2012]083號(hào))

*通信作者， E-mail:guokeji@126.com

致謝：西藏自治區(qū)林業(yè)調(diào)查規(guī)劃研究院劉務(wù)林和李炳章為本次調(diào)查提供幫助，中國(guó)科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所馬鳴研究員提供咨詢(xún)意見(jiàn)，湖南師范大學(xué)叢義艷博士協(xié)助鑒定植物種類(lèi)，特此致謝！

Measurement of Blood Cell and Blood Biochemical in Selenium-deficiency Zebras

XU Lei1, WU Denghu2, CHEN Feilan1, ZHANG Denghua2, ZHOU Jun2,WANG Xiaojia2, PAN Yongquan1, BI Xiaoyun3*

(1. Laboratory Animal Center, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China; 2. Chongqing Zoo, Chongqing 400050,China; 3. Department of Test, the First Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400016， China)

Four zebras were diagnosed as selenium-deficiency according to clinical features, pathology examination, blood cell and blood biochemical analysis, and three normal zebras were the control. This study investigated the changes of blood cell numbers and blood biochemical indices of these zebras, to provide a diagnosing way for selenium-deficiency zebras. The results showed that the numbers of red blood cells, hemoglobin and the percentage of lymphocytes were decreased, while the percentage of neutrophil cells was increased. Blood biochemical analysis showed that the enaymatic activity of lactic acid dehydrogenase, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase alkaline phosphatase, creatine kinase were increased, while uric acid content and the activity of GSH-Px were decreased. These results were important for further diagnose of zebras' selenium-deficiency.

zebra; selenium-deficiency; hematological index

10.11984/j.issn.1000-7083.20150185

2015-05-18 接受日期：2015-08-25

徐磊(1989—), 男, 碩士研究生

*通信作者Corresponding author， E-mail:bxy20061963@163.com

S85

A

1000-7083(2016)01-0113-04

廣西自然科學(xué)基金(2012GXNSFAA053057)