cyp2c19基因多態(tài)性、高水平FIB對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)的相關(guān)性研究

李勤琴

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所，重慶 400010)

?

·論 著·

cyp2c19基因多態(tài)性、高水平FIB對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)的相關(guān)性研究

李勤琴

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所，重慶 400010)

目的 研究冠心病患者中cyp2c19基因多態(tài)性、高水平纖維蛋白原(FIB)與氯吡格雷抗凝效應(yīng)的關(guān)系。方法 選取2015年5～11月正在服用氯吡格雷的冠心病患者611例，并對(duì)其cyp2c19基因特征和FIB水平進(jìn)行分析。將患者分為cyp2c19基因純合子強(qiáng)代謝型組(n=261)、雜合子強(qiáng)代謝型組(n=272)及弱代謝型組(n=78)；611例冠心病患者中有408例患者檢測(cè)凝血項(xiàng)，分為高水平FIB組(n=116)、正常水平FIB組(n=224)及低水平FIB組(n=68)；再分為cyp2c19基因弱代謝型且高水平FIB組(n=24)、cyp2c19基因純合子強(qiáng)代謝型且高水平FIB組(n=48)，cyp2c19基因雜合子強(qiáng)代謝型且高水平FIB組(n=44)，比較3組的凝血酶時(shí)間(TT)。結(jié)果 cyp2c19基因型別有*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3。經(jīng)基因芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，上述各型分別為261例(占42.7%)、235例(占38.4%)、37例(占6.0%)、60例(占9.8%)、17例(占2.9%)、1例(占0.2%)。cyp2c19*1、*2和*3等位基因頻率分別為65.0%(794/1 222)、30.5%(373/1 222)和4.5%(55/1 222)；純合子強(qiáng)代謝型組占42.7%(n=261)，雜合子強(qiáng)代謝型組占44.4%(n=272)，弱代謝型組占12.9%(n=78)。高水平FIB組的TT水平與正常水平FIB組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.400 8)； 無論是純合子還是雜合子，cyp2c19基因強(qiáng)代謝型均比cyp2c19基因弱代謝型對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)更敏感(P<0.05)。結(jié)論 高水平FIB對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)并無顯著影響；cyp2c19基因多態(tài)性對(duì)氯吡格雷的抗凝效應(yīng)有顯著影響，有助于臨床指導(dǎo)用藥，降低冠狀動(dòng)脈血栓發(fā)生率。

cyp2c19基因； 纖維蛋白原； 基因多態(tài)性； 冠心??； 氯吡格雷

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病是冠狀動(dòng)脈血管發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變引起血管管腔狹窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或壞死而導(dǎo)致的心臟病，常稱為冠心病。為預(yù)防不良心血管事件的發(fā)生，氯吡格雷與阿司匹林聯(lián)合抗血小板治療是目前推薦的治療藥物[1]，但由于個(gè)體差異，氯吡格雷的抗血小板效應(yīng)對(duì)于某些患者并沒有發(fā)揮良好療效，從而導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈血栓的發(fā)生[2]。隨著生活水平的提高，冠心病的患病率在我國(guó)呈上升趨勢(shì)[3]，冠心病患者日趨年輕化[4]，因此積極采取有效的抗血小板治療是減少冠心病發(fā)病率的重要任務(wù)。除某些臨床因素(如年齡、肥胖、糖尿病和腎衰竭等)，有報(bào)道發(fā)現(xiàn)細(xì)胞色素P450(CYP450)與氯吡格雷的療效有關(guān)[5]。氯吡格雷是一種酯類前體藥物，需要經(jīng)過CYP450酶代謝為有活性的產(chǎn)物才能發(fā)揮抗血小板作用，而cyp2c19基因具有基因多態(tài)性，能直接影響氯吡格雷在臨床中的療效[6]。此外，纖維蛋白原(FIB)作為冠心病的重要危險(xiǎn)因素，近期備受關(guān)注。FIB是凝血途徑的重要環(huán)節(jié)，通過與血小板膜上受體相結(jié)合，導(dǎo)致急性冠狀動(dòng)脈血栓的形成。一般情況下，F(xiàn)IB與凝血酶時(shí)間(TT)呈反比。氯吡格雷通過間接抑制GPⅡb/Ⅲa受體與FIB結(jié)合，從而阻止血小板聚集。本研究將探討cyp2c19基因多態(tài)性、FIB水平與氯吡格雷抗血小板效應(yīng)的關(guān)系，以期為臨床實(shí)施個(gè)體化用藥提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2015年5～11月經(jīng)心電圖和冠狀動(dòng)脈造影等檢查確診為冠心病、且正在服用氯吡格雷的患者611例，其中男311例，女300例；年齡30～89歲，平均(61.0±0.5)歲。入組患者均簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)成年人(大于18歲)；(2)漢族；(3)長(zhǎng)期服用氯吡格雷。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)嚴(yán)重心衰及肝腎功能損傷；(2)不能按醫(yī)囑服用氯吡格雷；(3)對(duì)氯吡格雷和阿司匹林耐藥；(4)近期有創(chuàng)傷等具有抗血小板治療禁忌證患者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 cyp2c19基因多態(tài)性檢測(cè)用乙二胺四乙酸二鈉抗凝，F(xiàn)IB和TT檢測(cè)用3.2%枸櫞酸鈉抗凝。所有標(biāo)本采集后送往本院分子生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 基因擴(kuò)增與雜交顯色 采用核酸提取試劑盒(試劑盒由上海百傲科技股份有限公司提供，產(chǎn)品編號(hào)BST01051)提取DNA；采用cyp2c19基因特異引物經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增后，將帶生物素標(biāo)記的PCR產(chǎn)物與固定在醛基基片的cyp2c19基因型檢測(cè)探針進(jìn)行雜交反應(yīng)[基因檢測(cè)芯片試劑盒，國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2013第3400956號(hào)]及顯色反應(yīng)，最后將芯片進(jìn)行掃描得到圖像(生物芯片識(shí)讀儀，規(guī)格型號(hào)BE-20，生產(chǎn)廠家為上海百傲生物技術(shù)有限公司)，判斷基因型別。

1.3 結(jié)果判斷 cyp2c19*1/*1為野生型、cyp2c19*1/*2和cyp2c19*1/*3為突變雜合子、cyp2c19*2/*2和cyp2c19*3/*3為突變純合子。根據(jù)不同基因型別所編碼的酶對(duì)氯吡格雷代謝速度，將cyp2c19*1/*1歸為快代謝型，cyp2c19*1/*2和cyp2c19*1/*3為中間代謝型，cyp2c19*2/*2和cyp2c19*3/*3為慢代謝型。

2 結(jié) 果

2.1 cyp2c19基因多態(tài)性的型別 cyp2c19基因型別包括*1/*1，*1/*2，*1/*3，*2/*2，*2/*3，*3/*3，經(jīng)基因芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各型別分布情況依次如下：261例(占42.7%)、235例(占38.4%)、37例(占6.0%)、60例(占9.8%)、17例(占2.9%)、1例(占0.2%)。cyp2c19*1、*2和*3等位基因頻率分布分別為65.0%(794/1 222)、30.5%(373/1 222)和4.5%(55/1 222)。其中，純合子強(qiáng)代謝型組占42.7%(n=261)、雜合子強(qiáng)代謝型組占44.4%(n=272)及弱代謝型組占12.9%(n=78)。

2.2 不同F(xiàn)IB水平冠心病患者FIB、TT水平分析 分析高水平FIB對(duì)正在服用氯吡格雷冠心病患者的TT水平影響，發(fā)現(xiàn)高水平FIB組TT水平與正常水平TT水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.400 8)。說明高水平FIB對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)并無影響。見表1。

表1 不同F(xiàn)IB水平冠心病患者FIB、TT水平分析

注：與高水平FIB比較，*P=0.018 2。

表2 純合子強(qiáng)代謝型與弱代謝型cyp2c19基因型構(gòu)成比及TT水平

表3 雜合子強(qiáng)代謝型與弱代謝型cyp2c19基因型構(gòu)成比及TT水平

表4 強(qiáng)代謝型與弱代謝型cyp2c19基因型構(gòu)成比及TT水平

2.3 cyp2c19基因型頻數(shù)、頻率分布及對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)的影響 對(duì)高水平FIB冠心病患者的cyp2c19基因型頻數(shù)、頻率分布對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)的影響進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)cyp2c19基因純合子強(qiáng)代謝型冠心病患者的TT水平[(16.22±0.32)s]高于cyp2c19基因弱代謝型冠心病患者[(12.95±0.30)s]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。同樣，cyp2c19基因雜合子強(qiáng)代謝型冠心病患者的TT水平[(15.44±0.40)s]高于cyp2c19基因弱代謝型冠心病患者[(12.95±0.30)s]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3?？傊?，無論是cyp2c19基因純合子還是雜合子強(qiáng)代謝型均比cyp2c19基因弱代謝型對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)敏感。見表4。

3 討 論

CYP450同工酶被稱為藥酶，是一系列結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)酶組成的超家族，也是體內(nèi)藥物代謝的酶系。CYP450酶代謝的藥物中，12.0%是由cyp2c19基因負(fù)責(zé)代謝。氯吡格雷是一種血小板聚集抑制劑。作為一種藥物前體，其需要通過氧化作用形成2-氧基-氯吡格雷后再水解成有活性的代謝物[7]。該氧化作用過程中，cyp2c19基因具有一定調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果表明，無論是純合子還是雜合子強(qiáng)代謝型cyp2c19基因都有助于氯吡格雷的抗凝效應(yīng)，雖然TT主要用于檢測(cè)凝血、抗凝和顯微蛋白溶解系統(tǒng)功能，對(duì)血小板聚集的反應(yīng)并不完全，但其仍然能反應(yīng)出 cyp2c19基因多態(tài)性對(duì)氯吡格雷抗血小板效應(yīng)的影響。

FIB是冠心病的重要危險(xiǎn)因子，其通過與血小板膜受體相結(jié)合，最終導(dǎo)致急性冠狀動(dòng)脈血栓的形成[8]。已有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IB的關(guān)鍵作用是與活化的血小板相互作用[9]，而氯吡格雷是一種血小板聚集抑制劑，F(xiàn)IB水平的高低是否對(duì)氯吡格雷抗血小板效應(yīng)有影響還缺乏詳細(xì)研究。本研究中，筆者將已檢測(cè)凝血項(xiàng)的患者分為高水平FIB組、正常水平FIB組和低水平FIB組，并總結(jié)患者服用氯吡格雷后各組間TT的變化，發(fā)現(xiàn)高水平的FIB 對(duì)氯吡格雷抗血小板效應(yīng)并無影響，說明TT雖是檢測(cè)纖維蛋白溶解系統(tǒng)功能的重要指標(biāo)，但受到體內(nèi)其他凝血因素及相關(guān)凝血因子等多因素的影響。雖然已有研究表明，高水平FIB與冠心病的病變程度相關(guān)[10]，但本研究所選患者病變程度可能并未達(dá)到FIB能影響的程度。

雖然既往研究報(bào)道cyp2c19基因多態(tài)性對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)存在影響，但較少文獻(xiàn)報(bào)道cyp2c19基因多態(tài)性與FIB聯(lián)合影響氯吡格雷的抗凝效應(yīng)，因此本研究獻(xiàn)報(bào)道具有一定創(chuàng)新性。本研究發(fā)現(xiàn)，無論是cyp2c19基因純合子還是雜合子強(qiáng)代謝型都比cyp2c19基因弱代謝型對(duì)氯吡格雷抗凝效應(yīng)敏感，對(duì)冠心病患者進(jìn)行cyp2c19基因型別檢測(cè)有助于臨床指導(dǎo)用藥，減少冠狀動(dòng)脈血栓加重的風(fēng)險(xiǎn)。

[1]Kushner FG,Hand M,Smith SC,et al.2009 focused updates:ACC/AHA guidelines for the management of patients with ST-elevation myocardial infarction(updating the 2004 guideline and 2007 focused update)and ACC/AHA/SCAI guidelines on percutaneous coronary intervention(updating the 2005 guideline and 2007 focused update)a report of the American College of Cardiology Foundation/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines[J].J American College Cardiol,2009,54(23):2205-2241.

[2]Serebruany V,Cherala G,Williams C,et al.Association of platelet responsiveness with clopidogrel metabolism:role of compliance in the assessment of resistance[J].American Heart Journal,2009,158(6):925-932.

[3]Wong ND.Epidemiological studies of CHD and the evolution of preventive cardiology[J].Nature Rev Cardiol,2014,11(5):276-289.

[4]Rubin JB,Borden WB.Coronary heart disease in young adults[J].Current Atherosclerosis Reports,2012,14(2):140-149.

[5]Yamamoto K,Hokimoto S,Chitose T,et al.Impact of CYP2C19 polymorphism on residual platelet reactivity in patients with coronary heart disease during antiplatelet therapy[J].J Cardiol,2011,57(2):194-201.

[6]Simon T,Verstuyft C,Mary-Krause M,et al.Genetic determinants of response to clopidogrel and cardiovascular events[J].New Engl J Med,2009,360(4):363-375.

[7]Rothenbacher D,Hoffmann MM,Breitling LP,et al.Cytochrome P450 2C19*2 polymorphism in patients with stable coronary heart disease and risk for secondary cardiovascular disease events:results of a long-term follow-up study in routine clinical care[J].BMC Cardiovascr Disord,2013,13:61.

[8]Mikolasevic I,Orlic L,Zaputovic L,et al.Usefulness of liver test and controlled attenuation parameter in detection of nonalcoholic fatty liver disease in patients with chronic renal failure and coronary heart disease[J].Wiener Klinische Wochenschrift,2015,127(11/12):451-458.

[9]劉顏梅,胡大一.高尿酸血癥與高纖維蛋白原血癥對(duì)冠狀動(dòng)脈風(fēng)險(xiǎn)的聯(lián)合評(píng)估價(jià)值探討[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2006,86(10):678-680.

[10]耿婕,陳樹濤,王林.老年冠心病患者脂蛋白(a)與纖維蛋白原的相關(guān)性分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2013,93(6):436-439.

Study on correlation between cyp2c19 gene polymorphisms and high concentration of fibrinogen with clopidogrel resistance

LIQinqin

(FieldsurgeryResearchInstitute,DapingHospitalofThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400010,China)

Objective To investigate the relationship between cyp2c19 gene polymorphisms and high concentration of fibrinogen with clopidogrel anticoagulation effect in the patients with coronary atherosclerotic heart disease(CAHD).Methods A total of 611 CAHD patients taking oral clopidogrel in our hospital from May 2015 to November 2015 were selected and their cyp2c19 gene characteristics and the fibrinogen(FIB)levels were analyzed.The patients were divided into the cyp2c19 gene homozygote strong metabolism group(n=261),heterozygote strong metabolim group(n=272)and weak metabolism group(n=78).In all the cases,408 cases were detected the coagulation indicators and divided into the high FIB level group(n=116),normal FIB level group(n=224)and low FIB level group(n=68);then re-divided into the cyp2c19 gene weak metabolism and high FIB level group(n=24),the cyp2c19 gene homozygote strong metabolism and high FIB level group(n=48)and cyp2c19 gene heterozygote strong metabolism and high FIB level group(n=48).The thrombin time(TT)was compared among 3 groups.Results cyp2c19 genotypes were *1/*1,*1/*2,*1/*3,*2/*2,*2/*3 and *3/*3.The gene chip detection found that the above genotypes had 261 cases(42.7%)of cyp2c19*1/*1,235 cases(38.4%)of cyp2c19*1/*2,6% 37 cases(6.0%)of cyp2c19*1/*3,60 cases(9.8%)of cyp2c19*2/*2,17 cases(2.9%)of cyp2c19*2/*3 and 1 case(0.2%)of cyp2c19*3/*3.The cyp2c19 *1,*2 and *3 allele frequencies were 65.0%(794/1 222),30.5%(373/1 222)and 4.5%(55/1 222)respectively;The homozygote strong metabolism group accounted for 42.7%(n=261),the heterozygote strong metabolism group accounted for 44.4%(n=272)and the weak metabolism group accounted for 12.9%(n=78).The TT level had no statistical difference between the high FIB level group and the normal FIB level group(P=0.400 8);no matter homozygote or heterozygote,the cyp2c19 gene strong metabolism type had more sensitivity to the clopidogrel anticoagulation effect than the cyp2c19 gene weak metabolism type(P<0.05).Conclusion The high FIB level has no influence to the clopidogrel anticoagulation effect;the cyp2c19 gene polymorphisms have significant influence on clopidogrel anticoagulation effect,which is conducive to clinical medication guidance and reduce the occurrence rate of coronary arterial thrombus.

cyp2c19; FIB; gene polymorphisms; coronary atherosclerotic heart disease; clopidogrel

李勤琴，女，技師，主要從事腫瘤等方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.22.011

A

1673-4130(2016)22-3123-03

2016-02-01

2016-04-21)