不同酸提取對維生素C測定結果的影響

徐新娟++孫海燕++李勇超++付聰聰++馮洋洋

摘要：試驗以4種酸作為提取劑，研究不同濃度酸提取下維生素C含量的變化，并進一步探討混酸對測定結果的影響。結果表明，草酸、鹽酸和醋酸均以2%濃度提取效果最好，磷酸則以8%濃度最佳，其中2%草酸測定結果最高；2%草酸-8%磷酸測定結果顯著高于其他混合酸處理，但低于單酸處理。相關分析結果顯示，3種最佳濃度單酸之間相關顯著，2%草酸-8%磷酸混合酸與2%草酸和2%鹽酸顯著相關。

關鍵詞：維生素C；滴定法；酸提??；相關

中圖分類號：TQ460.7+2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）18-4799-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.042

維生素C（Vitamin C）又名L-抗壞血酸，是新鮮水果和蔬菜中含量非常豐富的一種水溶性維生素。維生素C可以增強機體免疫力，在機體新陳代謝中起著重要的作用，其含量常常作為衡量果蔬品質(zhì)的重要指標之一。維生素C含量測定的方法有滴定法、比色法和色譜法，經(jīng)典的滴定法有碘量法和2，6-二氯酚靛酚法，無需特殊儀器且操作簡便、快速，測定結果準確可靠，在教學及科研分析中廣泛應用。

維生素C還原性很強，在空氣中很容易被氧化，提取時可通過加入弱酸的方法增加其提取液的穩(wěn)定性。常用的酸有醋酸[1，2]、草酸[3-5]和鹽酸[5]，也有用兩種酸的混合液進行提取的報道，如偏磷酸-醋酸[1]和草酸-鹽酸[6]，鑒于偏磷酸有劇毒，且室溫下易水合成磷酸從而影響其對維生素C的穩(wěn)定作用。因此，本試驗選擇草酸、磷酸、鹽酸和醋酸4種酸，設置5種濃度梯度，研究不同酸提取濃度對滴定法測定維生素C含量的影響，在此基礎上篩選出最佳酸濃度，采用兩兩混合的方法，進一步探討混合酸對測定結果的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

選擇維生素C含量較高的獼猴桃和柿子椒作為供試材料。

試劑：碘酸鉀、碘化鉀、淀粉、鹽酸、2，6-二氯酚靛酚、碳酸氫鈉、維生素C、草酸、磷酸、鹽酸、醋酸，均為分析純，活性炭。

1.2 方法

維生素C含量的測定參考王秀奇等[7]的方法。材料清洗擦干后，去皮去子，用攪拌機快速打成勻漿，稱取5 g置于不同酸提取液中，0.5 g活性炭脫色10 min，然后分別用兩種滴定方法進行維生素C含量測定。滴定時以顏色持續(xù)5 s不退為終點，整個滴定過程不超過2 min。另取相應提取酸酸化的蒸餾水做空白對照滴定。每種提取酸均設置5種濃度：1%、2%、4%、8%、10%。混酸選擇單酸最佳濃度，按1∶1（V/V）混合后進行提取。各處理均重復3次。

碘量法計算公式：VC（mg/100 g）=■×■×100

式中，V為樣品滴定所用KIO3體積減去空白滴定所用體積；B為滴定時樣品液體積；b為樣品提取液體積；a為樣品質(zhì)量。

2，6-二氯酚靛酚法計算公式：VC（mg/100 g）=■×100

式中，VA為滴定時所用2，6-二氯酚靛酚體積；VB為空白所用2，6-二氯酚靛酚體積；S為1 mL 2，6-二氯酚靛酚溶液相當于維生素C量，詳見表1；W為10 mL樣品提取液中含有樣品量。

1.3 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均為測定平均值，數(shù)據(jù)采用SAS 9.0 軟件進行統(tǒng)計分析，LSD法多重比較。

2 結果與分析

2.1 不同酸提取濃度對維生素C測定結果的影響

如表2所示，獼猴桃和柿子椒的測定結果較為一致，碘量法的測定數(shù)據(jù)均高于2，6-二氯酚靛酚法，表明測定方法會影響測定結果。從提取酸濃度來看，草酸、鹽酸和醋酸濃度都在2%時最大，然后呈顯著下降趨勢。隨著酸濃度的增加，磷酸的測定結果不斷增加，在8%時取得最大值，10%則顯著降低。在碘量法中，獼猴桃用2%草酸、2%鹽酸、2%醋酸和8%磷酸提取的結果分別是效果最差組的1.08、1.39、1.18和1.30倍。

對于同種濃度而言，不同酸提取的結果也存在顯著差異，其中柿子椒的兩種滴定法均為草酸效果最好，其次是醋酸和磷酸，鹽酸的測定結果整體偏低。獼猴桃在草酸濃度為1%、2%和4%時測定結果較大，8%和10%的磷酸處理顯著高于草酸，表明酸濃度和酸種類都顯著影響維生素C提取量。綜上所述，測定維生素C時提取效果較好的酸是2%草酸。

2.2 不同混酸提取對維生素C測定結果的影響

將2%草酸、2%鹽酸、8%磷酸和2%醋酸進行兩兩混合，比較混酸提取對測定結果的影響。如表3所示，碘量法中獼猴桃和柿子椒結果一致，均為2%草酸-8%磷酸處理的測定結果最大，并顯著高于其他處理。除2%草酸-8%磷酸外的5種混酸處理之間差異也達到顯著水平，其中2%鹽酸-8%磷酸提取效果最差，獼猴桃和柿子椒分別比2%草酸-8%磷酸少35%和16%。在2，6-二氯酚靛酚法中，2%草酸-8%磷酸提取效果最好，2%鹽酸-8%磷酸最差。與獼猴桃各處理間差異均顯著不同，柿子椒的2%鹽酸-8%磷酸和2%醋酸-8%磷酸差異不顯著，這可能是品種之間的差異所致。

2.3 不同酸提取測定結果的相關性分析

除鹽酸外，混合酸的提取效果并不好于單酸。相關性分析結果（表4）表明，除8%磷酸外，2%草酸、2%鹽酸和2%醋酸之間相關性均達到顯著水平，即這3種單酸的提取效果較為一致。2%草酸-8%磷酸的混合酸處理與2%草酸和2%鹽酸顯著相關，但與8%磷酸和2%醋酸相關不顯著。

3 結論與討論

提取酸的種類和濃度均影響維生素C的測定結果。張淑民等[8]研究表明3%醋酸處理效果最好，本試驗擴大了濃度梯度，并得出醋酸的較佳提取濃度為2%。與醋酸相同，草酸和鹽酸均在較低濃度（2%）時提取效果較好，磷酸則在高濃度（8%）時達到最佳提取效果，其中草酸和醋酸測定結果較高，且顯著相關，表明滴定法測定維生素C含量時可選擇草酸或醋酸進行提取。用2%草酸-10%鹽酸的混酸提取維生素C，其測定結果與2%草酸、4%醋酸并無顯著差異[6]，本試驗中混酸的測定結果以2%草酸-8%磷酸最高，雖與2%草酸和2%鹽酸顯著相關，但在數(shù)值上低于單酸，可見混酸提取效果并不優(yōu)于單酸。

參考文獻：

[1] 宋秀麗，葛海龍.維生素C片中維生素C測定方法比較[J].太遠師范學院學報（自然科學版），2013，12（4）：132-137.

[2] 石東里，姚志剛，申保忠.棗品種抗壞血酸含量的測定與比較[J].濱州師專學報，2003，19（2）：90-92.

[3] 李瑞國，鄭 權.4種常見蔬菜維生素C含量測定[J].西南農(nóng)業(yè)學報，2011，24（1）：198-201.

[4] 萬學閃，劉文革，閻志紅，等.無籽西瓜果實不同部位維生素C和番茄紅素含量測定[J].中國瓜菜，2009（3）：4-9.

[5] 孫 鵬，王 寧，孫先鋒.兩種方法對蘋果中維生素C含量測定的比較[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2011，50（16）：3386-3388.

[6] 武 文，詹秀環(huán)，宣亞文.碘量法測定蔬菜中維生素C的含量[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2009，37（21）：9845-9846.

[7] 王秀奇，秦淑媛，高天慧，等.基礎生物化學實驗[M].北京：高等教育出版社，2010.195-199.

[8] 張淑民，馮雙慶.果品蔬菜中維生素C測定方法的研究[J].北京農(nóng)業(yè)大學學報，1983，9（2）：51-59.