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    MeJA處理對(duì)藍(lán)莓果實(shí)采后灰霉病的影響及機(jī)理

    2016-12-06 09:11:41黃曉杰韓媛媛高嘉悅
    食品科學(xué) 2016年22期
    關(guān)鍵詞:灰霉病總酚花色

    黃曉杰,李 婧,柴 媛,韓媛媛,高嘉悅

    (錦州醫(yī)科大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,遼寧 錦州 121001)

    MeJA處理對(duì)藍(lán)莓果實(shí)采后灰霉病的影響及機(jī)理

    黃曉杰,李 婧,柴 媛,韓媛媛,高嘉悅

    (錦州醫(yī)科大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,遼寧 錦州 121001)

    以“埃利奧特”藍(lán)莓果實(shí)為實(shí)驗(yàn)材料,研究茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)處理對(duì)藍(lán)莓果實(shí)灰霉病、活性氧代謝酶、防御相關(guān)酶活性和總酚、總花色苷含量的影響。50 μmol/L MeJA處理藍(lán)莓果實(shí)后刺孔接種Botrytis cinerea孢子懸浮液,于(1±1) ℃貯藏16 d。結(jié)果表明,MeJA處理有效抑制果實(shí)發(fā)病率和過氧化氫酶、抗壞血酸過氧化物酶活性,促進(jìn)貯藏初期果實(shí)H2O2的迅速積累,提高果實(shí)防御相關(guān)酶苯丙氨酸解氨酶、過氧化物酶和多酚氧化酶活性,促進(jìn)酚類、木質(zhì)素等植保素類物質(zhì)的合成。表明MeJA處理可提高藍(lán)莓果實(shí)抗病性,從而有效抑制了果實(shí)灰霉病的發(fā)生。

    茉莉酸甲酯;活性氧代謝;防御相關(guān)酶;抗病性;灰霉病

    藍(lán)莓果實(shí)成熟于高溫多雨季節(jié),采后果實(shí)蒂痕部極易受到病原菌的侵染而發(fā)生腐敗[1]。采后藍(lán)莓果實(shí)的腐敗常見由Botrytis cinerea引起的灰霉病,由Colletotrichum acutatum引起的炭疽病和由Alternaria spp.引起的黑斑病[2]。目前,對(duì)于灰霉病的防治常采用腐霉利、甲基硫菌靈和啶酰菌胺等化學(xué)殺菌劑,雖然殺菌效果好,但是有試劑殘留的可能。隨著人們對(duì)食品安全的不斷關(guān)注,尋求綠色、環(huán)保的天然防腐劑替代化學(xué)殺菌劑已成為必然趨勢(shì)[3]。

    茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)是一種天然植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,可調(diào)節(jié)包括對(duì)環(huán)境脅迫響應(yīng)在內(nèi)的多種植物生理過程[4]。Wasternack等[5]研究認(rèn)為,植物系統(tǒng)通過MeJA的信號(hào)作用誘導(dǎo)特定酶催化生成如生物堿、酚類物質(zhì)、活性氧或病程相關(guān)蛋白等防御化合物,從而獲得抗病性。采后適當(dāng)濃度的MeJA處理可顯著抑制枇杷由Penicillium citrinum引起的灰霉病[2]、草莓由Botrytis cinerea引起的灰霉病[6]。此外,外源MeJA處理還顯著提

    高了甜櫻桃[7]和桃子[8]的抗病性。本課題組前期的研究結(jié)果顯示[9],MeJA處理可顯著抑制藍(lán)莓果實(shí)腐爛,但MeJA處理對(duì)采后藍(lán)莓果實(shí)病害的影響鮮見報(bào)道,對(duì)果實(shí)防御系統(tǒng)的作用模式仍不清晰,因此,本實(shí)驗(yàn)主要研究MeJA處理對(duì)藍(lán)莓果實(shí)采后灰霉病及抗病相關(guān)酶活性的影響,揭示MeJA處理減輕果實(shí)病害發(fā)生率的機(jī)理,為MeJA應(yīng)用于藍(lán)莓果實(shí)的灰霉病防治提供理論參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與病原菌

    實(shí)驗(yàn)藍(lán)莓(Vaccinium corymbosum L.)品種為“埃利奧特”,采自遼寧省丹東市天賜花卉基地。

    病原菌Botrytis cinerea的分離純化參考曹士鋒[10]的方法略有改動(dòng),從室溫自然腐爛的藍(lán)莓果實(shí)中分離純化Botrytis cinerea,經(jīng)鑒定和回接試驗(yàn)后,再次從發(fā)病的藍(lán)莓果實(shí)病健交界處分離純化Botrytis cinerea,隨后挑取Botrytis cinerea的單孢于26 ℃進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),純化好的菌種接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar,PDA)斜面4 ℃培養(yǎng)。接種前,將斜面菌種接種于平板PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)基,26 ℃活化14 d,用無菌生理鹽水配成1×105個(gè)/mL的孢子懸浮液(血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)),隨配隨用。

    1.2 試劑與儀器

    MeJA 美國(guó)Sigma-Aldrich公司;福林-酚試劑、過氧化氫、苯丙氨酸、乙二胺四乙酸、鹽酸羥胺、核黃素、蛋氨酸、氮藍(lán)四唑、愈創(chuàng)木酚、三氯乙酸 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

    5804R高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司;UV-2700紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司;DELTA320酸度計(jì) 梅特勒-托利多有限公司;CX21FS1顯微鏡奧林巴斯(中國(guó))有限公司;KQ-250E超聲波清洗機(jī)昆山市超聲儀器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 實(shí)驗(yàn)處理

    采后當(dāng)天冷藏車運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,剔除殘次、病蟲害及機(jī)械損傷的果實(shí),在(1±1) ℃條件下預(yù)冷24 h后,挑選成熟度、顏色、大小基本一致的果實(shí)做為試材。將挑選出的果實(shí)隨機(jī)分為2 組,每組果實(shí)1.44 kg,分別放入封閉的熏蒸室,0、50 μmol/L MeJA(預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的適宜濃度)熏蒸處理果實(shí)12 h,熏蒸溫度為20 ℃。熏蒸處理完畢后,果實(shí)取出通風(fēng)冷卻,24 h后開始接種。藍(lán)莓果實(shí)用70%酒精進(jìn)行表面消毒,無菌解剖針在果實(shí)腰部刺孔,孔深3 mm、直徑2 mm,孔內(nèi)接種配制的Botrytis cinerea孢子懸浮液50 μL后分裝,每盒120 g左右,貯藏于(1±1)℃、相對(duì)濕度90%~95%的環(huán)境貯藏16 d,分別在果實(shí)處理前(0 d)和貯藏期間每隔4 d測(cè)定果實(shí)相關(guān)指標(biāo),每個(gè)指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3 次。

    1.3.2 發(fā)病率的計(jì)算

    藍(lán)莓果實(shí)表面出現(xiàn)灰霉病病斑即視為發(fā)病果實(shí),每組含大小一致的果實(shí)30 個(gè),重復(fù)3 次,按下式計(jì)算發(fā)病率:

    1.3.3 H2O2含量和活性氧代謝酶活性的測(cè)定

    H2O2含量的測(cè)定參考曹建康等[11]的測(cè)定方法,結(jié)果以μmol/g表示,以鮮質(zhì)量計(jì)。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過氧化氫酶(catalase,CAT)和抗壞血酸過氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)活性測(cè)定參考曹建康等[11]的方法,略有改進(jìn)。隨機(jī)稱取10 g藍(lán)莓果肉,加入10 mL預(yù)冷的50 mmol/L pH 7.8磷酸鈉緩沖液(含1 mmol/L乙二胺四乙酸,5%聚乙烯吡咯烷酮),冰浴研磨成勻漿后,于4 ℃條件下12 000×g離心20 min,收集上清液用作酶的粗提物來測(cè)定SOD、CAT和APX的活性。以每分鐘每克鮮果對(duì)NBT光化還原的抑制為50%為一個(gè)SOD活力單位(U);CAT活性活性以每克鮮果每分鐘引起240 nm波長(zhǎng)處光密度值降低0.01為一個(gè)酶活單位(U);APX活性以每克鮮果每分鐘引起290 nm波長(zhǎng)處光密度值降低0.01為一個(gè)酶活單位(U)。

    1.3.4 防御相關(guān)酶活性的測(cè)定

    苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)、過氧化物酶(peroxidase,POD)和多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PPO)活性的測(cè)定參考曹建康等[11]的方法,略有改動(dòng)。PAL活性以每小時(shí)每克鮮果酶促反應(yīng)體系290 nm波長(zhǎng)處光密度值增加0.01為一個(gè)PAL活性單位(U);POD活性以每克鮮果每分鐘引起470 nm波長(zhǎng)處光密度值降低0.01為一個(gè)酶活單位(U);PPO活性以每克鮮果每分鐘420 nm波長(zhǎng)處光密度值變化1為一個(gè)酶活單位(U)。

    1.3.5 總酚和總花色苷含量的測(cè)定

    20 g藍(lán)莓果置于預(yù)冷的研缽中,低溫(4 ℃)研磨成漿,快速準(zhǔn)確稱取2.5 g勻漿,加入25 mL預(yù)冷的1%鹽酸酸化的80%乙醇溶液,4 ℃浸提12 h,15 000×g低溫離心10 min,收集上清液,殘?jiān)妙A(yù)冷的酸化乙醇洗滌2 次,離心后合并上清液定容至100 mL,用于測(cè)定總酚和總花色苷含量。

    總酚含量的測(cè)定:參照Slinkard等[12]的方法并略加改進(jìn),樣品中的總酚含量以沒食子酸的當(dāng)量表示,單位為mg/g;總花色苷含量的測(cè)定:參照Lako等[13]的方法并略加修改,樣品中的總花色苷含量以矢車菊素-3-葡萄糖苷的當(dāng)量表示,單位為mg/100 g。

    1.3.6 木質(zhì)素含量的測(cè)定

    木質(zhì)素含量測(cè)定參照Morrison[14]的方法并略加修改。隨機(jī)稱取10 g果肉,加入20 mL預(yù)冷的95%乙醇溶液,冰浴研磨成勻漿后,于4 ℃條件下12 000×g離心20 min,

    沉淀物用10 mL 95%乙醇溶液沖洗3 次,收集沉淀并干燥。干燥物加入0.5 mL 25%溴乙酰溶液溶解,70 ℃水浴保溫30 min后,加0.9 mL 2 mol/L NaOH溶液終止反應(yīng),混合液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶,冰乙酸定容后,于280 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,單位是?OD280 nm/g。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    本實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)利用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均為重復(fù)的x±s。以處理方法和貯藏時(shí)間為變量,進(jìn)行方差分析,處理間的差異性多重比較采用最小顯著差數(shù)法,顯著性水平設(shè)置為P<0.05。采用Origin 8.0和Excel 2003軟件作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)發(fā)病率的影響

    圖1 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)發(fā)病率的影響Fig.1 Effect of MeJA treatment on disease incidence of blueberry inoculated with Botrytis cinerea during storage at (1 ± 1) ℃

    對(duì)于不同果實(shí)不同病害的防治,MeJA作用的有效濃度有明顯不同[15],經(jīng)濃度篩選預(yù)實(shí)驗(yàn),得到50 μmol/L MeJA處理抑制發(fā)病率的效果最佳,因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇50 μmol/L MeJA處理果實(shí)。由圖1可以看出,隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)發(fā)病率呈逐漸上升的趨勢(shì),貯藏16 d后,對(duì)照組果實(shí)發(fā)病率達(dá)94.44%,MeJA處理組果實(shí)發(fā)病率為73.33%,MeJA處理顯著抑制了果實(shí)發(fā)病率的上升(P<0.05)。

    2.2 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)活性氧代謝的影響

    圖2 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)活性氧代謝的影響Fig.2 Effect of MeJA treatment on ROS metabolism of blueberry inoculated with Botrytis cinerea during storage at (1 ± 1) ℃

    由圖2A可以看出,貯藏4 d時(shí),MeJA處理顯著提高了Botrytis cinerea接種果實(shí)H2O2含量(P<0.05),MeJA處理組果實(shí)H2O2含量達(dá)到85.82 μmol/g,比對(duì)照組果實(shí)高出41.66%。貯藏初期,出現(xiàn)了“氧化迸發(fā)”,MeJA處理組果實(shí)H2O2的迅速積累可能與其誘導(dǎo)Botrytis cinerea接種果實(shí)的抗病性有關(guān)[16]。貯藏8 d后,MeJA處理顯著抑制果實(shí)H2O2的積累,對(duì)照組果實(shí)H2O2含量顯著高于MeJA處理組(P<0.05)。

    由圖2B可以看出,Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)在冷藏期間SOD活性呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)。貯藏前4 d,對(duì)照組和處理組間差異不顯著。貯藏8~12 d時(shí),MeJA處理組果實(shí)SOD活性高于對(duì)照組。

    由圖2C可以得出,隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),對(duì)照組果實(shí)CAT活性呈逐漸下降趨勢(shì)。貯藏前4 d,MeJA處理組果實(shí)CAT活性逐漸下降,而后CAT活性呈上升趨勢(shì),貯藏12 d后CAT活性下降。貯藏第4天時(shí),MeJA處理組果實(shí)CAT活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05),這說明此時(shí)SOD歧化生成的H2O2沒有被及時(shí)高效的清除,導(dǎo)致貯藏第4天時(shí),MeJA處理組果實(shí)H2O2快速積累(圖2A)。

    圖2D是Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)APX活性的變化。所有果實(shí)APX活性均隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸下降趨勢(shì),貯藏第4天時(shí),MeJA處理組果實(shí)APX活性顯著

    低于對(duì)照組(P<0.05),貯藏8 d后,MeJA處理顯著抑制APX活性的下降(P<0.05),MeJA處理組維持高水平APX活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,MeJA處理組果實(shí)早期H2O2含量的增加可能與APX活性的下降有關(guān),貯藏后期APX活性的維持有助于清除過量積累的H2O2,抑制貯藏末期果實(shí)發(fā)病率。

    2.3 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)防御相關(guān)酶活性的影響

    圖3 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)防御相關(guān)酶的影響Fig.3 Effect of MeJA treatment on defense related enzymes activities of blueberry inoculated with Botrytis cinerea during storage at (1 ± 1) ℃

    植物組織中存在一類防御酶,如PAL、POD、PPO等。這些防御酶可通過誘導(dǎo)組織中酚類物質(zhì)、木質(zhì)素等次生代謝產(chǎn)物合成,間接提高植物抗病性。由圖3A可以看出,Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)PAL活性在貯藏第4天時(shí)達(dá)到最大值,MeJA處理組果實(shí)PAL活性比對(duì)照組高出82.21%,而后PAL活性逐漸下降,整個(gè)貯藏期間,MeJA處理組果實(shí)維持較高PAL活性。如圖3B所示,在整個(gè)貯藏期間所有Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)POD活性均逐漸增大,這是由于Botrytis cinerea接種后果實(shí)在貯藏初期即出現(xiàn)衰老,膜完整性受到破壞,POD和催化底物酚類等去區(qū)域化,誘導(dǎo)酶活性增加。MeJA處理組果實(shí)POD活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05),這可能是因?yàn)橘A藏初期MeJA處理組果實(shí)積累的H2O2誘導(dǎo)POD的從頭合成的原因。由圖3C可知,MeJA處理組果實(shí)的PPO活性在整個(gè)貯藏期間呈先上升而后下降的趨勢(shì),在貯藏第8天時(shí),PPO活性達(dá)到最大值0.467 U/g。對(duì)照組果實(shí)PPO活性隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降,整個(gè)貯藏過程中,MeJA處理組果實(shí)PPO活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。綜上所述,MeJA處理顯著提高了貯藏期間果實(shí)防御相關(guān)酶活性(P<0.05)。

    2.4 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)總酚和總花色苷含量的影響

    圖4 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)總酚(A)和總花色苷(B)含量的影響Fig.4 Effect of MeJA treatment on total phenol (A) and total anthocyanin (B) contents of blueberry inoculated with Botrytis cinerea during storage at (1 ± 1) ℃

    隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),果實(shí)總酚和總花色苷含量整體呈下降趨勢(shì)。由圖4A可知,MeJA處理組果實(shí)總酚含量在貯藏第4天時(shí)出現(xiàn)小幅度增加而后持續(xù)下降,貯藏初期總酚含量的增加可能與提高果實(shí)抗病性有關(guān)。對(duì)照組果實(shí)總酚含量在整個(gè)貯藏期間呈現(xiàn)逐步下降的趨勢(shì),8 d后對(duì)照組果實(shí)總酚含量高于MeJA處理組,這可能是MeJA處理提高了PPO和POD活性,酚類物質(zhì)不斷氧化的結(jié)果。

    由圖4B可以看出,整個(gè)貯藏期間Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)花色苷含量呈逐漸下降趨勢(shì)。研究結(jié)果表明,MeJA處理通過提高果實(shí)PAL活性來誘導(dǎo)新鮮藍(lán)莓果實(shí)采后花色苷的合成[9],而MeJA處理Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí),貯藏初期雖然PAL活性也有提高,但是總花色苷含量卻持續(xù)下降,這說明MeJA處理病原菌侵染的果實(shí)并不能誘導(dǎo)采后果實(shí)花色苷的繼續(xù)合成,這可能與果實(shí)的衰老有關(guān)。整個(gè)貯藏期間,MeJA處理組果實(shí)總花色苷含量高于對(duì)照組,這是由于MeJA處理抑制了果實(shí)發(fā)病率,延緩果實(shí)衰老的原因。

    2.5 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)木質(zhì)素含量的影響

    圖5 MeJA處理對(duì)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)木質(zhì)素含量的影響Fig.5 Effect of MeJA treatment on lignin content of blueberry inoculated with Botrytis cinerea during storage at (1 ± 1) ℃

    病原菌侵染果實(shí)后,果實(shí)細(xì)胞壁的木質(zhì)化可以對(duì)病原菌的侵入形成屏障[15]。由圖5可以看出,Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)木質(zhì)素含量在貯藏期間持續(xù)增加,MeJA處理顯著提高了果實(shí)中木質(zhì)素含量的增加。

    3 討 論

    大量的研究結(jié)果表明,MeJA處理可以抑制番茄[17]、櫻桃[7]、楊梅[16]和桃子[18]等果實(shí)采后病害的發(fā)生。研究結(jié)果也表明,50 μmol/L MeJA處理能夠顯著抑制藍(lán)莓果實(shí)灰霉病的發(fā)病率,MeJA可能是通過誘導(dǎo)果實(shí)組織的抗病性來降低果實(shí)發(fā)病率[16]。

    植物受到病原菌侵染時(shí),活性氧(主要是H2O2)會(huì)出現(xiàn)“氧化迸發(fā)”似的積累,積累的H2O2一方面對(duì)病原菌有直接毒性,另一方面H2O2還可作為第二信使調(diào)控植物防御系統(tǒng)[19]。H2O2的積累被認(rèn)為是病原菌侵染的植物組織最早期的防御響應(yīng)[20],研究發(fā)現(xiàn),Colletotrichum acutatum接種的枇杷果實(shí)[21]、Rhizopus stolonife接種的桃果實(shí)[21]和Trichothecium roseum接種的甜瓜果實(shí)[22]中迅速產(chǎn)生的H2O2與果實(shí)抗病性顯著正相關(guān),認(rèn)為是H2O2作為信號(hào)分子誘導(dǎo)果實(shí)的抗病性。有研究表明[15],低濃度H2O2可對(duì)細(xì)胞起保護(hù)作用,而高濃度的H2O2對(duì)植物細(xì)胞產(chǎn)生毒害,H2O2在植物細(xì)胞中的含量低于10 μmol/L即處于安全濃度范圍,該濃度范圍內(nèi)的H2O2可作為信號(hào)分子參與植物的生理生化進(jìn)程[23]。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果顯示,MeJA處理顯著提高了貯藏初期果實(shí)中的H2O2含量(P<0.05),這是MeJA處理抑制貯藏初期果實(shí)中CAT、APX活性的原因,MeJA處理有效抑制藍(lán)莓灰霉病的發(fā)生。Wang Kaituo等[16]研究表明MeJA處理通過貯藏初期H2O2的快速積累提高果實(shí)抗病性,這與本研究一致。MeJA可有效誘導(dǎo)藍(lán)莓果實(shí)對(duì)病原體的防御相應(yīng),當(dāng)病原體侵染果實(shí)后,MeJA可能通過啟動(dòng)H2O2的“氧化迸發(fā)”,提高果實(shí)抗病性。

    研究發(fā)現(xiàn)[17],MeJA可以誘導(dǎo)產(chǎn)生抗病性蛋白,主要包括PAL、POD和PPO等防御酶。PAL是苯丙烷代謝途徑的關(guān)鍵限速酶,MeJA處理Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí),PAL活性維持較高水平,而花色苷含量持續(xù)下降,這就意味著MeJA處理并不會(huì)誘導(dǎo)病害果實(shí)采后花色苷的生物合成,PAL更多的參與木質(zhì)素、酚類和植保素的合成,其中酚類對(duì)局部病原菌有直接殺菌作用[24]。“氧化迸發(fā)”產(chǎn)生的H2O2可誘導(dǎo)POD的合成,POD參與細(xì)胞壁的木質(zhì)化,以防御病害的侵染[25]。當(dāng)Botrytis cinerea接種果實(shí)后,果實(shí)開始衰老,細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)部分解體,PPO與酚類物質(zhì)接觸催化酚類氧化生成有毒的醌類,對(duì)病原菌有直接毒性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)MeJA處理誘導(dǎo)主要抗病性蛋白如PAL、POD和PPO活性的增加,提高了其催化產(chǎn)物木質(zhì)素、酚類物質(zhì)和醌類物質(zhì)的積累,通過直接或間接作用抑制病原菌的生長(zhǎng)。Wang Kaituo等[16]研究發(fā)現(xiàn)MeJA處理通過提高楊梅果實(shí)中PAL、POD活性和木質(zhì)素含量,以增加果實(shí)對(duì)橘青霉的抑制,提高果實(shí)抗病性。這與本研究結(jié)果一致,本研究結(jié)果表明抗病性蛋白(PAL、POD和PPO)、木質(zhì)素和酚類物質(zhì)等在MeJA誘導(dǎo)的藍(lán)莓果實(shí)抗病性中起著重要作用。而Cao Shifeng等[21]的研究顯示,MeJA處理減少了Colletotrichum acutatum接種的枇杷果實(shí)PAL、POD活性和木質(zhì)素含量,這說明抗病性蛋白和木質(zhì)素并不是MeJA處理抑制枇杷采后病害的重要因素。MeJA誘導(dǎo)果實(shí)抗病性的原因各有不同,這可能與果實(shí)種類、病原菌種類和MeJA處理劑量等因素有關(guān)。

    4 結(jié) 論

    50 μmol/L MeJA處理通過抑制貯藏初期果實(shí)中CAT 和APX活性,促進(jìn)貯藏初期果實(shí)H2O2的迅速積累,通過H2O2直接殺菌效應(yīng)和H2O2的第二信使作用啟動(dòng)防御體系,提高果實(shí)抗性蛋白酶PAL、POD和PPO活性,促進(jìn)酚類物質(zhì)、醌類和木質(zhì)素的合成,提高藍(lán)莓果實(shí)抗病性,從而有效抑制了果實(shí)灰霉病的發(fā)生。50 μmol/L MeJA處理并沒有誘導(dǎo)Botrytis cinerea接種的藍(lán)莓果實(shí)中花色苷的繼續(xù)合成,但是整個(gè)貯藏期間,花色苷維持較高水平。

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    Effect and Mechanism of Methyl Jasmonate on Incidence of Grey Mould Decay in Postharvest Blueberry

    HUANG Xiaojie, LI Jing, CHAI Yuan, HAN Yuanyuan, GAO Jiayue
    (College of Food Science and Engineering, Jinzhou Medical University, Jinzhou 121001, China)

    The effects of methyl jasmonate (MeJA) treatment on postharvest grey mould decay, the activities of enzymes involved in reactive oxygen species (ROS) metabolism, defense-related enzymes activities and total phenol and total anthocyanin contents in ‘Elliott’ blueberry were investigated. Blueberry fruits were treated with MeJA at 50 μmol/L, inoculated with Botrytis cinerea and then stored at (1 ± 1) ℃ for 16 days. MeJA treatment resulted in significantly lower disease incidence compared with control fruits. MeJA treatment significantly inhibited the activities of catalase (CAT) and ascorbate peroxidase (APX) and thus resulted in a higher level of H2O2in the early period of storage. However, MeJA treatment enhanced the activities of phenylalanine ammonialyase (PAL), polyphenoloxidase (PPO) and peroxidase (POD), and induced the synthesis of phenolics and lignin. These results suggest that MeJA treatment can reduce the incidence and severity of grey mould decay by enhancing the disease resistance of blueberry fruit.

    methyl jasmonate; reactive oxygen species metabolism; defense-related enzymes; disease resistance; gray mould decay

    10.7506/spkx1002-6630-201622047

    TS255.3

    A

    1002-6630(2016)22-0307-06

    黃曉杰, 李婧, 柴媛, 等. MeJA處理對(duì)藍(lán)莓果實(shí)采后灰霉病的影響及機(jī)理[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(22): 307-312. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201622047. http://www.spkx.net.cn

    HUANG Xiaojie, LI Jing, CHAI Yuan, et al. Effect and mechanism of methyl jasmonate on incidence of grey mould decay in postharvest blueberry[J]. Food Science, 2016, 37(22): 307-312. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201622047. http://www.spkx.net.cn

    2016-05-02

    遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015020793);遼寧省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目(L2014325)

    黃曉杰(1981—),女,副教授,博士研究生,研究方向?yàn)楣郀I(yíng)養(yǎng)與質(zhì)量控制。E-mail:food_xiaojie@163.com

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