類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清CCN1水平變化及意義

徐京京，趙琳，張曉莉，王曉非

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院，沈陽110004）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清CCN1水平變化及意義

徐京京，趙琳，張曉莉，王曉非

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院，沈陽110004）

目的 觀察類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者血清富含半胱氨酸蛋白61（CCN1）水平變化，并探討其臨床意義。方法 選擇RA患者30例作為觀察組（RA活動(dòng)期20例、穩(wěn)定期10例）、健康體檢者20例作為對(duì)照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兩組血清CCN1水平，收集實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，計(jì)算28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度評(píng)分（DAS28）、簡(jiǎn)化疾病活動(dòng)性指數(shù)（SDAI）評(píng)分，用直線相關(guān)分析CCN1與相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果 與對(duì)照組比較，觀察組血清CCN1水平升高，且RA活動(dòng)期患者高于RA穩(wěn)定期患者（P均＜0.05）。RA患者血清CCN1水平與類風(fēng)濕因子、C反應(yīng)蛋白、血沉、抗CCP抗體、DAS28評(píng)分、SDAI評(píng)分呈正相關(guān)（r分別為0.423、0.443、0.375、0.364、0.772、0.681，P均＜0.05）。結(jié)論 RA患者血清CCN1水平升高，CCN1可能參與了RA的炎癥反應(yīng)過程。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；富含半胱氨酸蛋白61；細(xì)胞因子

富含半胱氨酸蛋白61（CCN1）是一種動(dòng)態(tài)表達(dá)、富含半胱氨酸的分泌性肝素連接蛋白，是生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的即刻早期基因產(chǎn)物，在多種細(xì)胞中表達(dá)，參與調(diào)節(jié)胞外基質(zhì)形成、細(xì)胞趨化、黏附、增殖、凋亡等［1］。CCN1與結(jié)締組織增生、血管內(nèi)皮修復(fù)、血管新生、腫瘤細(xì)胞凋亡密切相關(guān)［2］。研究顯示，CCN家族部分成員與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）等結(jié)締組織病發(fā)病可能有關(guān)［3］。本研究檢測(cè)RA患者血清CCN1水平，探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料 選取2015年1～6月本院收治的RA患者30例（觀察組），均符合2009年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)／歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟提出的RA分類標(biāo)準(zhǔn)。其中男3例、女27例，年齡24～53（40±15）歲，RA活動(dòng)期即28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度評(píng)分（DAS28）＞3.2分20例、RA穩(wěn)定期即DAS28≤3.2分10例。均排除腫瘤、感染、妊娠及其他自身免疫性疾病，且無嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病（如肝病、腎功能異常、心功能不全等）。同期選擇體檢健康者20例作為對(duì)照組，男2例、女18例，年齡20～58（41±15）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2血清CCN1及相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 采集各組入院次日清晨空腹靜脈血3 mL，離心后取上清，置PC管中-20℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清CCN1水平，嚴(yán)格按照試劑盒（上?；顦飞锛夹g(shù)有限公司）說明書進(jìn)行操作；用速率散射比濁法檢測(cè)C反應(yīng)蛋白（CRP）；魏氏法檢測(cè)血沉（ESR）；散射免疫比濁法檢測(cè)類風(fēng)濕因子（RF）、免疫球蛋白；酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體（抗CCP抗體）。1.3 DAS28、簡(jiǎn)化疾病活動(dòng)性指數(shù)（SDAI）計(jì)算DAS28＝0.56×28個(gè)關(guān)節(jié)中壓痛關(guān)節(jié)數(shù)+0.28×28個(gè)關(guān)節(jié)中腫脹關(guān)節(jié)數(shù)+0.7×ESR+0.014×總體健康評(píng)分或視覺模擬評(píng)分；SDAI評(píng)分＝28個(gè)關(guān)節(jié)中壓痛關(guān)節(jié)數(shù)+28個(gè)關(guān)節(jié)中腫脹關(guān)節(jié)數(shù)+患者的總體評(píng)分+醫(yī)生的總體評(píng)分+CRP。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用xˉ±s表示，多組間比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；用直線相關(guān)分析CCN1水平與相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組血清CCN1水平及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較見表1。

2.2RA患者血清CCN1與其他指標(biāo)的關(guān)系 經(jīng)直線相關(guān)分析，RA患者血清CCN1水平與CRP、ESR、RF、抗CCP抗體水平呈正相關(guān)（r分別為0.443、0.375、0.423、0.364，P均＜0.05）；與免疫球蛋白無相關(guān)性（r＝0.261，P＞0.05）；與DAS28評(píng)分、SDAI評(píng)分呈正相關(guān)（r分別為0.772、0.681，P均＜0.01）。

表1　各組檢測(cè)指標(biāo)水平比較（±s）

表1　各組檢測(cè)指標(biāo)水平比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與RA穩(wěn)定期比較，＃P＜0.05。

組別nCCN1（ng／L）CRP（mg／L）ESR（mm／h）RF（IU／mL）抗CCP抗體（AU／mL）免疫球蛋白（g／L）對(duì)照組201 199.87±135.20觀察組302 475.32±1 318.41*38±3635±18338±323501.37±413.7515.47±5.97 RA活動(dòng)期202 683.86±1 321.36＃52±38＃45±14＃474±363＃703.30±520.24＃17.19±3.73 RA穩(wěn)定期101 288.67± 557.3310±415±568±3497.50±85.2313.01±8.18

3　討論

CCN1是CCN家族重要成員，其開放閱讀框編碼381個(gè)氨基酸，包含四組保守獨(dú)立的模塊，四組模塊和其他多種因子相互作用，使其在生物體不同組織、細(xì)胞和發(fā)育階段中發(fā)揮多重生物效應(yīng)［4］。CCN1廣泛存在于人類多種組織器官，但在正常人中表達(dá)相對(duì)較低。CCN1主要通過與細(xì)胞表面分子結(jié)合，作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體來發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞的作用［5］。CCN1具有明顯的促有絲分裂活性和趨化性，參與干細(xì)胞分化、組織炎癥等過程，調(diào)節(jié)細(xì)胞增生、遷移、凋亡。Komatsu等［3］在研究RA和骨關(guān)節(jié)炎（OA）時(shí)證實(shí)，在對(duì)照組、OA組、RA組中均未檢測(cè)到CCN3、CCN6，但可檢測(cè)到CCN1、CCN2、CCN4、CCN5，以CCN1為著，檢測(cè)部位以軟骨、關(guān)節(jié)液為主。

RA在病理組織學(xué)上以炎癥細(xì)胞滲出、滑膜增殖性改變、血管翳形成為主，與細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫炎癥損傷、血管增生、滑膜細(xì)胞增殖及凋亡異常密切相關(guān)。CCN1能夠增加炎細(xì)胞的趨化和黏附，在炎癥因子的刺激下，調(diào)節(jié)前列腺素、NO、組胺等參與的生物學(xué)效應(yīng)［6，7］。過表達(dá)的CCN1會(huì)刺激滑膜細(xì)胞分泌IL-6、IL-8、IL-17等炎癥因子，參與炎癥微環(huán)境的形成。RA患者滑液中的炎癥因子TNF-α、IFN-γ能上調(diào)CCN1表達(dá)，過表達(dá)的CCN1可能通過促進(jìn)滑膜細(xì)胞分裂、抑制滑膜細(xì)胞凋亡的作用而促進(jìn)滑膜細(xì)胞增殖，從而參與滑膜細(xì)胞的過度增生。另一方面，RA患者成纖維樣滑膜細(xì)胞（FLS）中CCN1產(chǎn)生增多，促進(jìn)了FLS增殖，這與CCN1通過αvβ5／Akt／NF-κB信號(hào)通路活化IL-6的作用以及IL-17介導(dǎo)相關(guān)發(fā)病機(jī)制有關(guān)［8］。

CCN1蛋白能夠促進(jìn)間葉細(xì)胞積聚、分化，加速成軟骨細(xì)胞的標(biāo)志物即早熟的Ⅱ型膠原表達(dá)，使其分化成為軟骨細(xì)胞，促進(jìn)硫酸鹽的沉積。在骨骼發(fā)育方面，CCN1的表達(dá)是由Wnt／β-catenin信號(hào)途徑調(diào)節(jié)的，雖然詳細(xì)機(jī)制尚未清楚，但是成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞間存在CCN1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的相互調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)。在體外，CCN1過表達(dá)促進(jìn)軟骨細(xì)胞成熟而抑制內(nèi)源性CCN1功能，導(dǎo)致其成熟障礙［9］。這在RA病變過程中可能發(fā)生于血管翳侵蝕軟骨、軟骨細(xì)胞增生等過程。提示CCN1軸在軟骨細(xì)胞簇形成中起重要作用。

CCN1能夠誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞衰老。研究指出CCN1結(jié)合整合素后能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞衰老進(jìn)程，配合CCN1引發(fā)DNA損傷反應(yīng)、激活p53、活化復(fù)合物，激活活性氧依賴的p16（INK4A）／pRb通路，導(dǎo)致成纖維細(xì)胞衰老，分泌抗纖維化物質(zhì)和提高抗纖維化基因表達(dá)［10］。這無疑為功能組織被瘢痕、纖維組織取代引起的一類疾病提供了新的研究方向，如RA肺間質(zhì)改變等。

本研究結(jié)果提示，RA患者血清CCN1水平明顯高于正常人，活動(dòng)期RA患者CCN1水平更高，且其水平與CRP、ESR、DAS28評(píng)分、SDAI評(píng)分等RA評(píng)估指標(biāo)相關(guān)，提示CCN1與RA炎癥反應(yīng)、活動(dòng)程度相關(guān)，可能在RA炎癥反應(yīng)過程中發(fā)揮作用。

［1］Chen CC，Lau LF.Functions and mechanisms of action of CCN matricellular proteins［J］.Int J Biochem Cell Biol，2009，41（4）：771-783.

［2］翟天航，孫悅，火蓉芬，等.IL-17調(diào)控類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞SENP6表達(dá)與CYR61關(guān)系初探［J］.現(xiàn)代免疫學(xué)，2015，35（1）：1-5.

［3］Komatsu M，Nakamura Y，Maruyama M，et al.Expression profiles of human CCN genes in patients with osteoarthritis or rheumatoid arthritis［J］.J Orthop Sci，2015，20（4）：708-716.

［4］Chen Y，Du XY.Functional properties and intracellular signaling of CCN1／Cyr61［J］.J Cell Biochem，2007，100（6）：1337-1345.

［5］Katsube K，Sakamoto K，Tamamura Y，et al.Role of CCN，a vertebrate specific gene family，in development［J］.Dev Growth Differ，2009，51（1）：55-67.

［6］Emre Y，Imhof BA.Matricellular protein CCN1／CYR61：a new player in inflammation and leukocyte trafficking［J］.Semin Immunopathol，2014，36（2）：253-259.

［7］張園，崔麗艷，張捷.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎早期診斷指標(biāo)的研究進(jìn)展［J］.山東醫(yī)藥，2014，54（19）：91-94.

［8］Lin J，Zhou Z，Huo R，et al.Cyr61 induces IL-6 production by fibroblast-like synoviocytes promoting Th17 differentiation in rheumatoid arthritis［J］.J Immunol，2012，188（11）：5776-5784.

［9］Zhang Y，Sheu TJ，Hoak D，et al.CCN1 regulates chondrocyte maturation and cartilage development［J］.J Bone Miner Res，2016，31（3）：549-559.

［10］Borg M，Brincat S，Camilleri G，et al.The role of cytokines in skin aging［J］.Climacteric，2013，16（5）：514-521.

10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.023

R593.22

B

1002-266X（2016）21-0058-02

遼寧省科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目（2014225017）。

王曉非（E-mail：1361611840＠qq.com）

（2016-01-18）