維藥小枝玫瑰花中沒食子酸含量測定

姜君君， 郭玉婷， 施 洋， 郝宇薇， 劉婧怡， 蘭 衛(wèi)

(1新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院, 烏魯木齊 830011； 2烏魯木齊市第四人民醫(yī)院, 烏魯木齊 830002； 3新疆醫(yī)科大學(xué)對口協(xié)作辦公室；4新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報編輯部, 烏魯木齊 830011)

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維藥小枝玫瑰花中沒食子酸含量測定

姜君君1,2， 郭玉婷3， 施 洋4， 郝宇薇1， 劉婧怡1， 蘭 衛(wèi)1

(1新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院, 烏魯木齊 830011；2烏魯木齊市第四人民醫(yī)院, 烏魯木齊 830002；3新疆醫(yī)科大學(xué)對口協(xié)作辦公室；4新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報編輯部, 烏魯木齊 830011)

目的 建立測定維藥小枝玫瑰花中沒食子酸含量的方法。方法 采用反相高效液相色譜法，色譜柱大連伊力特SinoChrom ODS-BP(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-0.3%磷酸(6∶94)為流動相，檢測波長272 nm。結(jié)果 沒食子酸質(zhì)量濃度在5.05～101.00 μg/mL范圍內(nèi)峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為100.15%(RSD=1.39%)，小枝玫瑰花中沒食子酸含量為0.491 7 mg/g。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用測定小枝玫瑰花中沒食子酸的含量。

小枝玫瑰； 沒食子酸； 含量測定

小枝玫瑰花為薔薇科植物玫瑰花(Rosa rugosa Thunb.)亞種(branchlets Rosa rugosa Thunb.)的干燥花蕾[1]，主要分布在新疆南疆地區(qū)，其中以和田地區(qū)最多，維藥名為克孜力古麗，味甘、微苦，性溫，歸肝、脾經(jīng)。研究表明，玫瑰花提取物具有抗病毒[2]、抗氧化[3-4]、抗腫瘤[5]、抑制中樞神經(jīng)[6]、擴血管、保護(hù)心肌[7-8]、降血糖[9-11]等作用。近年來，因玫瑰花治療糖尿病療效確切、安全無毒而引起廣大學(xué)者的高度重視。本研究采用反相高效液相色譜法測定維藥小枝玫瑰中沒食子酸的含量，為制訂小枝玫瑰質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC-6AD雙泵，SPD-20A紫外檢測器，SIL-20A,柱溫箱CTO-10ASVP，CBM-20A，Lcsolution分析系統(tǒng))，ME204E電子分析天平(METTLER TOLEDO)。

1.2 試藥 沒食子酸對照品(金測分析技術(shù)有限公司，批號：00007040-226)，玫瑰花由新疆和田陽光沙漠玫瑰有限公司提供，批號：20150615，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥資源教研室主任盛萍教授鑒定為小枝玫瑰(branchlets Rosa rugosa Thunb)的干燥花蕾。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：大連伊力特SinoChrom ODS-BP色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：甲醇-0.3%磷酸溶液(6∶94)，流速：1.0 mL/min，檢測波長：272 nm，柱溫：25℃，進(jìn)樣量：對照品10 μL，供試品20 μL，見圖1、2。

圖1對照品HPLC色譜圖

圖2 樣品HPLC色譜圖(1沒食子酸)

2.2 對照品儲備液的制備 精密稱取沒食子酸對照品10.1 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含沒食子酸101 μg的溶液,備用。

2.3 供試品溶液的制備 稱取玫瑰花0.420 6 g置具塞錐形瓶中，加入70%甲醇50 mL，超聲提取(25℃,頻率100%)30 min，稱定重量并補足至50 mL，搖勻濾過，取濾液即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、10.0 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下色譜條件測定，峰面積分別為186 094、336 192、681 668、998 995、1 662 007、3 307 239，以峰積分面積(Y)對濃度(X)進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為：Y=32 582.34X+16 156.67，r=0.999 9，沒食子酸濃度在5.05～101.00 μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計算不低于7 300，沒食子酸峰與相鄰峰分離度大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05間，測定峰面積分別為3 310 574、3 312 723、3 294 154、3 261 022、3 259 336、3 261 964，儀器精密度以沒食子酸計算,RSD=0.35%(n=6)，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液于制備后0、2、4、7、14、24 h進(jìn)樣，測定峰面積分別為1 089 964、1 099 772、1 125 889、1 118 438、1 187 820、1 130 697、1 128 716，峰面積RSD=1.51%(n=6)，表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗 稱取樣品6份，按“2.3”項下方法平行制備供試品試液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，測得峰面積分別為1 359 266、1 351 423、1 328 505、1 372 644、1 366 370、1 385 147，平均值為1 360 559， RSD=1.43%(n=6)。

2.8 回收率試驗 稱取已知含量的玫瑰花粉末5份，每份0.200 g，精密稱定，分別加入沒食子酸儲備液3 mL，按“2.3”項下方法操作，并進(jìn)樣分析，計算回收率，結(jié)果平均回收率為100.15%,RSD=1.39%,見表1。

表1 回收率實驗結(jié)果

2.9 含量測定 稱取樣品6份，按“2.3”項下方法平行制備供試品試液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，測得峰面積分別為1 378 375、1 322 314、1 376 713、1 364 436、1 374 179、1 367 338，平均值為1 363 892，計算得沒食子酸含量為4.917 mg/g,RSD=1.55%(n=6)。

3 討論

新疆和田小枝玫瑰現(xiàn)多作為花茶飲用或作玫瑰花醬食用，在維吾爾醫(yī)藥中也有使用，根據(jù)維吾爾醫(yī)藥理論性平，主治膽液質(zhì)性疾病。維藥小枝玫瑰由于未列入國家藥典，其應(yīng)用范圍受限，玫瑰花口服液和玫瑰花糖膏均已列入《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》，該標(biāo)準(zhǔn)收錄的多個以小枝玫瑰為原料制劑，但標(biāo)準(zhǔn)中沒有對小枝玫瑰中有效成分含量測定提出要求[12]。本研究采用反相高效液相色譜法測定維藥小枝玫瑰中沒食子酸的含量，方法簡便、準(zhǔn)確,重復(fù)性好，可用于小枝玫瑰花中沒食子酸的含量測定。

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(本文編輯 施洋)

Determination of gallic acid content in the Uyghur Medicine branchlets roses

JIANG Junjun1,2, GUOY uting3, SHI Yang4, HAO Yuwei1, LIU Jingyi1, LAN Wei1

(1XinjiangMedicalUniversityInstituteofTCM,Urumqi830011,China；2TheFourthPeopleHospitalofUrumqi，Urumqi830002,China；3CounterpartCooperationOfficeofXinjiangMedicalUniversity；4EditorialDepartmentofJournal,XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011,China)

Objective Determination of gallic acid in Uyghur branchlets roses. Methods RP-HPLC was adopted, SinoChrom ODS-BP chromatographic column (4.6×250 mm, 5 μm) was from Dalian Yilite, the mobile phase was methanol -0.3% phosphoric acid (6:94), and the detection wavelength was 272 nm. Results There was a good linear relationship of Gallic acid within the range of 5.05～101 μg/mL (r=0.999 9), and the average recovery rate was 100.15% (RSD=1.39%). The content of gallic acid in branchlets roses was 0.491 7%. Conclusion The method is simple, accurate and reproducible, and can be used to measure the content of the gallic acid in Uyghur branchlets roses.

branchlets roses; gallic acid; determination of content

新疆維吾爾自治區(qū)中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新基金(201253217)

姜君君(1982-)，女，本科，主管藥師，研究方向：藥學(xué)研究。

蘭 衛(wèi)，男，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中維藥研究，E-mail：lanwei516@sina.com。

R914

A

1009-5551(2016)12-1563-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.12.019

2016-8-15]