Ag85A抗體IgG表型在結(jié)核性胸膜炎診斷中的應(yīng)用

蘇永勝 宋 磊 李 丹 張秀芳 華樹(shù)成

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

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Ag85A抗體IgG表型在結(jié)核性胸膜炎診斷中的應(yīng)用

蘇永勝 宋 磊 李 丹 張秀芳 華樹(shù)成

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

目的 探討Ag85A抗體IgG在結(jié)核性胸膜炎患者外周血清及胸腔積液中的表達(dá)水平并探索其對(duì)臨床診斷與預(yù)后判斷的指導(dǎo)意義。方法 收集53例結(jié)核性胸膜炎患者，38例惡性腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移患者和28例良性胸水患者的外周血及胸腔積液，并收集12例正常人的外周血，ELISA法檢測(cè)血清和胸腔積液中Ag85A抗體IgG的表達(dá)，并對(duì)胸腔積液進(jìn)行總蛋白和乳酸脫氫酶(LDH)檢查。結(jié)果 與腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移患者、良性胸水患者和正常人相比，結(jié)核性胸膜炎患者外周血及胸腔積液中Ag85A抗體IgG水平明顯升高(P<0.01)；而腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移患者、良性胸水患者和正常人體液中的Ag85A抗體IgG水平無(wú)明顯差異(P>0.05)。胸腔積液中Ag85A抗體IgG吸光度為1.435，可作為診斷結(jié)核性胸膜炎的cut-off值，其敏感性和特異性分別為79.2%和87.2%。結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液中Ag85A抗體IgG水平與胸腔積液中總蛋白質(zhì)和LDH含量呈正相關(guān)。結(jié)論 胸腔積液中Ag85A抗體IgG水平可作為結(jié)核性胸膜炎診斷和預(yù)后判斷的生物學(xué)標(biāo)志物。

結(jié)核性胸膜炎；Ag85A

結(jié)核性胸膜炎診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是結(jié)核菌的檢出或活檢胸膜有典型結(jié)核感染的病理特TGH ，但檢出率低或創(chuàng)傷性操作限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用〔1〕。本文通過(guò)對(duì)Ag85A抗體IgG在各種胸膜炎中的表達(dá)水平進(jìn)行比較，初步探討其在結(jié)核性胸膜炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2012年12月至2015年6月吉林大學(xué)第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院和門(mén)診患者共131例，其中結(jié)核性胸膜炎53例，均為首次發(fā)病，在診斷之前未經(jīng)任何抗結(jié)核藥物治療；惡性腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移患者38例，非結(jié)核感染胸膜炎28例，12例健康對(duì)照者(HC)。見(jiàn)表1。

表1 入組患者的一般資料

結(jié)核性胸膜炎診斷符合Thwaites診斷標(biāo)準(zhǔn)〔2〕。同時(shí)收集惡性腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移患者，非結(jié)核菌感染性胸膜炎和正常人作為對(duì)照。所有患者排除合并其他傳染性疾病如艾滋病(HIV)、麻疹和傷寒等，除外近1 w出現(xiàn)心衰、燒傷、外傷和手術(shù)等應(yīng)激情況者。

1.2 主要試劑和儀器 96孔板(corning，美國(guó))，Ag85A抗原(Abcam，美國(guó))，HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體(Abcam，美國(guó))，酶標(biāo)儀(Bio-Tek，美國(guó))。

1.3 檢測(cè)方法 采集靜脈血5 ml，不抗凝，800 r/min離心10 min后取血清。并留取胸腔積液5 ml，離心后取上清液分裝儲(chǔ)存于-80℃冰箱。測(cè)定時(shí)將樣品放于冰上解凍，Ag85A抗原包被96孔板，按照ELISA方法對(duì)樣品中Ag85A抗體IgG進(jìn)行檢測(cè)。在450 nm處測(cè)各樣品的OD值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS15.0軟件，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。胸腔積液中Ag85A抗體IgG對(duì)結(jié)核性胸膜炎診斷價(jià)值的評(píng)定采用受試者工作特征曲線(xiàn)(ROC)分析，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)法。

2 結(jié) 果

2.1 血清和胸腔積液中Ag85A抗體IgG的表達(dá) 結(jié)核性胸膜炎患者血清中Ag85A抗體IgG的OD值為(2.66 ± 0.17)g/L；腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移患者、非結(jié)核感染性胸膜炎和健康對(duì)照血清中的Ag85A抗體IgG的OD值分別為(1.78 ± 0.29)g/L、(1.93±0.29)g/L，結(jié)核性胸膜炎組患者血清中Ag85A抗體IgG水平明顯高于后三者(P<0.01)。結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液中的Ag85A抗體IgG的OD值為(107.8±4.94)ng/L，也較腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移患者(73.58±3.76)ng/L、非結(jié)核感染性胸膜炎和健康對(duì)照(76.25±5.09)ng/L明顯升高(P<0.01)。

2.2 Ag85A抗體IgG對(duì)結(jié)核性胸膜炎的診斷價(jià)值 胸腔積液Ag85A抗體IgG可作為診斷結(jié)核性胸膜炎的生物學(xué)標(biāo)志物，其最佳診斷切點(diǎn)值(cut off)為OD值1.435(AUC=0.866，P<0.01)，此值在診斷結(jié)核性胸膜炎時(shí)的敏感度為79.2%，特異度為87.2%。見(jiàn)圖1。

圖1 胸腔積液Ag85A抗體IgG診斷價(jià)值的ROC分析

2.3 Ag85A抗體IgG與結(jié)核性胸膜炎病情的相關(guān)性 結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液中的Ag85A抗體IgG水平與胸水中總蛋白以及乳酸脫氫酶(LDH)含量呈正相關(guān)，相關(guān)性分別為0.373(P<0.01)和0.438(P<0.01)。

3 討 論

Ag85A是結(jié)核分支桿菌合成的一種外分泌蛋白，分子量約為35 kD，與Ag85B和Ag85C構(gòu)成復(fù)合物，具有分支桿菌酸轉(zhuǎn)移酶的活性，在結(jié)合菌細(xì)胞壁的生物合成過(guò)程中發(fā)揮著重要作用〔3〕。Ag85A曾被當(dāng)做生物標(biāo)志物用于結(jié)合診斷的研究。Kumar等〔4〕研究顯示，在對(duì)0～18歲的人群中，Ag85A作為結(jié)核病診斷的的敏感性為56%，而特異性為72%。由于Ag85A作為結(jié)核菌的一種重要的抗原，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。因此，作為Ag85A的抗體表型被推測(cè)在結(jié)核病患者體內(nèi)表達(dá)增加，并可用于結(jié)核診斷的標(biāo)志物。Osada-Oka等〔5〕發(fā)現(xiàn)，Ag85A在活動(dòng)性和陳舊性結(jié)核病患者的血漿中的水平明顯高于正常人，用于陳舊性結(jié)核的診斷敏感性為86.7%。Senoputra等〔6〕的研究同樣顯示Ag85A在結(jié)核病患者血清中表達(dá)增高，并與其他抗結(jié)核抗體水平存在相關(guān)性。但Ag85A抗體在結(jié)核性胸膜炎患者胸水中的表達(dá)以及對(duì)結(jié)核性胸膜炎的診斷意義尚未完全清楚。本研究與前人的研究結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，與健康人、其他感染性胸膜炎和腫瘤胸膜轉(zhuǎn)移患者比較，結(jié)核性胸膜炎患者的胸腔積液中Ag85A抗體IgG水平也發(fā)生上調(diào)。

目前依靠胸腔積液常規(guī)檢查只能分辨積液的來(lái)源是滲出性還是漏出性，結(jié)核性胸膜炎的診斷仍靠結(jié)核桿菌和(或)結(jié)核典型病灶的檢出。但由于結(jié)核性胸膜炎胸腔積液中結(jié)核菌檢出率非常低，典型病灶的檢查需要依賴(lài)于有創(chuàng)性的胸膜活檢。因此結(jié)核性胸膜炎的診斷特別是早期診斷仍是一個(gè)重要問(wèn)題。本研究發(fā)現(xiàn)胸腔積液Ag85A抗體IgG水平還可作為區(qū)別結(jié)核性胸膜炎和其他胸膜炎或腫瘤的生物學(xué)標(biāo)志物。

Ag85A抗體IgG高表達(dá)是結(jié)核菌感染和機(jī)體免疫系統(tǒng)相互作用的體現(xiàn)。胸腔積液總蛋白和LDH含量反映結(jié)核性胸膜炎病情的嚴(yán)重程度，常被應(yīng)用于判斷結(jié)核性胸膜炎預(yù)后的兩項(xiàng)重要指標(biāo)。本研究表明，除了作為診斷依據(jù)外，胸腔積液Ag85A抗體IgG水平還可作為評(píng)估結(jié)核性胸膜炎疾病嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。

1 Wallis RS,Maeurer M,Mwaba P,etal.Tuberculosis-advances in development of new drugs,treatment regimens,host-directed therapies,and biomarkers〔J〕.Lancet Infect Dis,2016;16(4):34-46.

2 Thwaites GE,Chau TT,Stepniewska K,etal.Diagnosis of adult tuberculous meningitis by use of clinical and laboratory features〔J〕.Lancet,2002;360(9342):1287-92.

3 Belisle JT,Vissa VD,Sievert T,etal.Role of the major antigen of mycobacterium tuberculosis in cell wall biogenesis〔J〕.Science,1997;276(5317):1420-2.

4 Kumar G,Dagur PK,Singh M,etal.Diagnostic potential of Ag85C in comparison to various secretory antigens for childhood tuberculosis〔J〕.Scand J Immunol,2008;68(2):177-83.

5 Osada-Oka M,Tateishi Y,Hirayama Y,etal.Antigen 85A and mycobacterial DNA-binding protein 1 are targets of immunoglobulin G in individuals with past tuberculosis〔J〕.Microbiol Immunol,2013;57(1):30-7.

6 Senoputra MA,Shiratori B,Hasibuan FM,etal.Diagnostic value of antibody responses to multiple antigens from Mycobacterium tuberculosis in active and latent tuberculosis〔J〕.Diagn Microbiol Infect Dis,2015;83(3):278-85.

〔2015-11-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

吉林省科技廳資助項(xiàng)目(No.20130413030GH)

華樹(shù)成(1961-)，男，教授，主要從事呼吸疾病研究。

蘇永勝(1991-)，男，碩士，主要從事呼吸疾病研究。

R561.1

A

1005-9202(2016)21-5373-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.21.074