延邊地區(qū)朝鮮族和漢族人群MTRR A66G基因多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系

安海蓮，吳兆洋，吳光，崔松彪

(延邊大學(xué)附屬醫(yī)院,吉林延吉133000)

?

延邊地區(qū)朝鮮族和漢族人群MTRR A66G基因多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系

安海蓮，吳兆洋，吳光，崔松彪

(延邊大學(xué)附屬醫(yī)院,吉林延吉133000)

目的 觀察延邊地區(qū)朝鮮族和漢族人群腦梗死與蛋氨酸合成酶還原酶(MTRR) A66G基因多態(tài)性的關(guān)系及民族差異。方法 采用PCR-RFLP法檢測352例腦梗死患者(病例組)和315例健康人群(對照組)MTRR A66G基因多態(tài)性，并分析基因型和等位基因在不同民族的分布情況。結(jié)果 病例組和對照組均具有MTRR A66G的AA、AG和GG基因型, 兩組3種基因型及A和G等位基因分布均無差異(P均>0.05)；對照組中朝、漢兩民族間MTRR A66G基因AA、AG和GG基因型及A和G等位基因分布均無差異(P均>0.05)，但病例組中朝鮮族患者GG基因型分布頻率(11.11%)高于漢族(5.03%),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論 MTRR基因A66G多態(tài)性與延邊地區(qū)人群腦梗死不相關(guān)，但是朝鮮族人群中MTRR基因66位A突變?yōu)镚患腦梗死風(fēng)險(xiǎn)高于漢族。

腦梗死；蛋氨酸合成酶還原酶；同型半胱氨酸；基因多態(tài)性；朝鮮族；漢族；延邊

高同型半胱氨酸(Hcy)血癥與腦梗死的發(fā)生密切相關(guān)[1,2]，而蛋氨酸合成酶還原酶(MTRR)是Hcy代謝過程中的主要輔酶，其基因多態(tài)性可引起相應(yīng)的酶缺陷或活性下降。MTRR基因錯(cuò)義突變是導(dǎo)致該酶缺乏或活性降低的主要機(jī)制，而MTRR A66G位點(diǎn)中AA基因型可突變?yōu)锳G或GG基因型，可使殘基22處蛋氨酸被異亮氨酸取代，進(jìn)而導(dǎo)致Hcy水平升高。近年來研究[3～5]表明，MTRR A66G基因多態(tài)性與腦血管疾病密切相關(guān)，但具有地區(qū)和種族差異。2014年6月～2015年5月，我們觀察了延邊地區(qū)朝鮮族和漢族腦梗死患者中MTRR A66G基因多態(tài)性分布，探討MTRR A66G基因多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性及民族間差異。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 遵循知情自愿原則，選擇延邊大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的352例腦梗死患者為病例組。其中男212例、女140例，年齡(62.59±10.89)歲，漢族199例、朝鮮族153例，均符合1996年中華醫(yī)學(xué)會第四次全國腦血管學(xué)術(shù)會議制定的腦血管病診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)CT或MRI證實(shí)。同時(shí)，選取與病例組性別、年齡、民族等分布無差異的315例健康體檢者為對照組。其中男179例、女136例，年齡(58.05±11.58)歲，漢族178例、朝鮮族137例，均無腦血管疾病史。兩組人群均為長期居住延邊地區(qū)的朝鮮族和漢族。

1.2 MTRR A66G基因多態(tài)性檢測方法 留取兩組血樣，利用全血基因組DNA提取試劑盒(北京艾德萊生物科技有限公司)提取基因組DNA，并用核酸定量分析儀進(jìn)行DNA含量及純度檢測。參考文獻(xiàn)[6]設(shè)計(jì)引物序列，上游引物5′-CAGGCAAAGGCCATCGCAGAAGACAT-3′，下游引物5′-CACTTCCCAACCAAAATTCTTCAAAG-3′。PCR擴(kuò)增體系為30 μL，其中DNA模板2 μL、上下引物各2 μL、Taq PCR Premix 15 μL、雙蒸水9 μL。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性4 min、94 ℃變性 1 mim、58 ℃退火 1 min、72 ℃延伸 1 min ，共40個(gè)循環(huán)；末次循環(huán)后72 ℃延伸 5 min。以2.5%的瓊脂糖凝膠電泳鑒別后，加入1 μL限制性內(nèi)切酶NdeⅠ在37 ℃過夜。以5%瓊脂糖電泳分析酶切產(chǎn)物，判斷基因型并攝像。MTRR A66G位點(diǎn)PCR產(chǎn)物長度為151 bp，NdeⅠ的酶切后含124、27 bp片段為AA型，含124、151、27 bp片段為AG型，含151、27 bp片段為GG型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)比較行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組MTRR A66G基因多態(tài)性比較 兩組MTRR A66G基因的AA、AG和GG基因型及A、G等位基因分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 兩組MTRR A66G基因多態(tài)性比較(例)

2.2 兩組朝鮮族人群MTRR A66G基因多態(tài)性比較 兩組朝鮮族人群MTRR A66G基因AA、AG、GG基因型及A、G等位基因分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表2。

表2 兩組朝鮮族人群MTRR A66G基因多態(tài)性比較(例)

2.3 兩組漢族人群MTRR A66G基因多態(tài)性比較 兩組朝鮮族人群MTRR A66G基因AA、AG、GG基因型及A、G等位基因分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表3。

表3 兩組漢族人群MTRR A66G基因多態(tài)性比較(例)

2.4 病例組中漢族和朝鮮族MTRR A66G基因多態(tài)性比較 病例組朝鮮族GG基因型分布頻率為11.11%，高于漢族的5.03%(P<0.05)；朝鮮族和漢族MTRR A66G基因AA、AG基因型及A、G等位基因分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表4。

表4 病例組中朝鮮族與漢族的MTRR A66G基因多態(tài)性比較(例)

注：與朝鮮族比較，*P<0.05。

3 討論

高Hcy血癥是腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，而葉酸代謝通路介導(dǎo)的一碳單位代謝影響Hcy水平[7]。MTRR基因多態(tài)性會影響蛋氨酸代謝，導(dǎo)致其濃度升高。Wilson等[8]報(bào)道，MTRR基因66位A基因突變?yōu)镚基因在人群中很常見，G等位基因頻率在健康對照中達(dá)51%。杜子明等[9]檢測人MTRR A66G基因突變頻率為49%，本研究顯示G等位基因在健康對照中達(dá)46.98%,可見MTRR基因66位A基因突變?yōu)镚基因確實(shí)比較普遍。由于MTRR基因A66G突變率很高，此基因位點(diǎn)易受環(huán)境因素的影響。對國內(nèi)10個(gè)地域漢族成年人MTRR A66G基因多態(tài)性分布的研究[10～13]結(jié)果表明，G等位基因和GG型基因頻率從我國低水平的山東(23.7%和5.4%)升高到海南(29.2%和8.6%)，表明MTRR A66G基因多態(tài)性具有地區(qū)差異性。本研究結(jié)果顯示，G等位基因和GG基因型頻率分別為46.98%和6.35%,表明延邊地區(qū)G等位基因頻率比我國其他已報(bào)到的地區(qū)平均水平更高，甚至高于最高的海南地區(qū)。

國內(nèi)外對MTRR A66G與腦梗死的相關(guān)性研究有不同的結(jié)果。Bosco等[14]報(bào)道，MTRR A66G基因多態(tài)性與缺血性腦卒中沒有關(guān)系；徐恩等[15]選取急性腦梗死患者136例與70例正常人進(jìn)行對照研究，結(jié)果表明MTRR A66G基因多態(tài)性不是腦梗死的獨(dú)立遺傳危險(xiǎn)因素。但是，國內(nèi)病例對照研究[16]結(jié)果表明，MTRR A66G基因多態(tài)性與腦梗死發(fā)病相關(guān)，且GG基因型可能為其易感基因。本研究結(jié)果顯示，腦梗死患者M(jìn)TRR基因A66G基因型及等位基因分布情況與健康對照之間無差異，與其他國內(nèi)外學(xué)者研究相一致。盡管病例組中朝鮮族和漢族A66G等位基因分布無差異性，但是病例組GG基因型分布頻率朝鮮族高于漢族2.21倍。說明漢族人群中MTRR A66G的GG基因型比朝鮮族人群比例低，而且MTRR基因A66G的分布具有民族差異性。我們認(rèn)為，MTRR A66G基因多態(tài)性與腦梗死關(guān)聯(lián)性的研究結(jié)論不一，這可能與MTRR A66G基因多態(tài)性具有地區(qū)和種族差異性、基因的突變對甲硫氨酸的影響尚不明確以及腦梗死的發(fā)生與環(huán)境和基因多因素共同作用等有關(guān)。但是能從基因水平篩查腦梗死高危人群，無疑會對腦梗死的一級預(yù)防起到重要作用。因此，分析葉酸代謝相關(guān)基因?qū)δX梗死發(fā)生發(fā)展的影響，確定MTRR基因多態(tài)性是否為腦梗死的遺傳易感因素進(jìn)而進(jìn)行早期干預(yù)具有深遠(yuǎn)意義。

[1] Zhang F, Li X, Dong Q, et al. Risk of acute cerebral infarction and plasma asymmetrical dimethylarginine and homocysteine levels: a clinical correlation analysis of Chinese population[J]. J Stroke Cerebrovasc Dis, 2014,23(9):2225-2232.

[2] 李曉霞.血漿同型半胱氨酸水平與腦梗死的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥,2014,54(1)：84-86.

[3] 王偉華,郭棟,王鳳菊.MTRR基因A66G多態(tài)性與動脈粥樣硬化性腦梗死的相關(guān)性研究[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2008,16(10):12-52.

[4] 吳兆洋,吳光,崔松彪.同型半胱氨酸代謝酶基因多態(tài)性與同型半胱氨酸代謝及腦梗死的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào),2015,38(1)：70-73.

[5] Li WX, Lv WW, Dai SX, et al. Joint associations of folate, homocysteine and MTHFR, MTR and MTRR gene polymorphisms with dyslipidemia in a Chinese hypertensive population:a cross-sectional study[J]. Lipids Health Dis, 2015,14:101.

[6] 笪偉,劉和俊.MTRR基因A66G多態(tài)性及血漿同型半胱氨酸水平與心肌梗死的關(guān)系[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,46(5):467-470.

[7] Manolescu BN, Oprea E, Farcasanu IC, et al. Homocysteine and vitamin therapy in stroke prevention and treatment: a review [J]. Acta Biochim Pol, 2010,57(4):467-477.

[8] Wilson A, platt R, Wu Q, et al. A common variant in methionine synthase reductase combined with low cobalamin(vitamin B12)increases risk for spina bifida[J]. Mol Genet Metab, 1999,67(4):317-323.

[9] 杜子明,黃愛玲,柳息洪.人蛋氨酸合成酶還原酶A66G基因突變頻率的檢測[J].解剖學(xué)研究,2004,26(2):112-114.

[10] 嚴(yán)倩,石紅春,姜凌,等.煙臺市漢族女性MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布特征[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2014,52(1):79-83.

[11] 張愛玲,馮來會,騰軍放.中青年腦梗死患者蛋氨酸合成酶還原酶基因多態(tài)性研究[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2012,1(11):37-41.

[12] 高利潔,魯衍強(qiáng),芮欣憶,等. 惠州漢族女性亞甲基四氫葉酸還原酶和甲硫氨酸合成還原酶的基因多態(tài)性分布[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)科學(xué)版,2013,34(1):140-143.

[13] 閆珠苗，陳曉，許少珍，等.瓊海市漢族女性MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013,19(9):18-20.

[14] Bosco P, Gueant-Rodriguez RM, Anello G, et al. Association of homocysteine(but not of MTHFR 677 C>T,MTR2756 A>G,MTRR 66 A>G and TCN2 776C>G)with ischemic cerebrovascular disease in Sicily[J].Thromb Haemost, 2006,96(2):154-159.

[15] 徐恩,鄧兵梅,陳盛強(qiáng),等.MTRR A66G、MS D919G、MTHFR C677T基因多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2005,4(9):902-907.

[16] 張愛玲,滕軍放,越萃瑜.缺血性腦血管病患者同型半胱氨酸代謝酶MTRR基因A66G及cystatin C基因G73A多態(tài)性檢測[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào),2010,45(9):425-428.

基金項(xiàng)目：河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(152102310192)。

通信作者：祁相煥(E-mail: qixianghuanhuan@126.com)

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260179)。

崔松彪(E-mail： sbcui@ybu.edu.cn)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.42.014

R743.3

B

1002-266X(2016)42-0046-03

2016-08-22)