CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)接受他莫昔芬治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后的影響

于洋，尤偉,梁棟,呂峰,楊秦蘅,張斌

(鄭州市人民醫(yī)院，鄭州450003)

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CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)接受他莫昔芬治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后的影響

于洋，尤偉,梁棟,呂峰,楊秦蘅,張斌

(鄭州市人民醫(yī)院，鄭州450003)

目的 探討細(xì)胞色素P4502D6(CYP2D6)基因多態(tài)性對(duì)接受他莫昔芬(TAM)治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后的影響。方法 采用PCR法檢測(cè)2010年3月～2011年3月106例接受TAM治療的ER陽(yáng)性乳腺癌患者外周血CYP2D6基因型，分別采用χ2檢驗(yàn)和Logistic回歸模型分析CYP2D6基因多態(tài)性與患者臨床參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 106例ER陽(yáng)性乳腺癌患者中，CYP2D6基因Wt/Wt型48例，占45.3%；Wt/*10型42例，占39.6%；*10/*10型16例，占15.1%。CYP2D6基因型與患者的年齡(χ2=0.391，P=0.822)、腫瘤直徑(χ2=2.544，P=0.280)、組織類型(χ2=3.600，P=0.165)、TNM分期(χ2=2.785，P=0.246)以及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=2.997，P=0.223)無(wú)相關(guān)性差異。Logistic回歸模型分析，CYP2D6基因*10/*10型較Wt/Wt型和Wt/*10型對(duì)接受TAM 治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者3年、5年的無(wú)病生存有較高的風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)論 CYP2D6基因*10/*10型ER陽(yáng)性乳腺癌患者接受TAM治療預(yù)后較差，臨床可在TAM治療前行CYP2D6基因多態(tài)性檢測(cè)以便合理用藥。

乳腺癌；細(xì)胞色素P4502D6；基因多態(tài)性；他莫昔芬；雌激素受體

內(nèi)分泌綜合治療是降低雌激素受體(ER)陽(yáng)性乳腺癌患者復(fù)發(fā)的一種重要治療方法，其中他莫昔芬(TAM)作為一種常見(jiàn)的人工合成非膽固醇類抗雌激素藥物，長(zhǎng)期以來(lái)被廣泛應(yīng)用[1]。然而，TAM需要經(jīng)過(guò)肝臟酶的轉(zhuǎn)化才能夠發(fā)揮較強(qiáng)的抗雌激素活性[2]。細(xì)胞色素P4502D6(CYP2D6)是TAM代謝過(guò)程中的一種關(guān)鍵作用酶，位于22號(hào)常染色體上[3]。最近有研究顯示[4]，CYP2D6存在70～100種基因突變位點(diǎn)，一些位點(diǎn)的突變可導(dǎo)致酶活性的變化，使機(jī)體呈現(xiàn)出對(duì)藥物反應(yīng)的個(gè)體化差異。為進(jìn)一步了解CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)接受TAM治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后的影響，本研究對(duì)106例接受TAM治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者的CYP2D6基因多態(tài)性進(jìn)行調(diào)查。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入標(biāo)準(zhǔn)：①女性；②術(shù)后組織標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)確診為原發(fā)性乳腺惡性腫瘤；③免疫組化染色顯示為ER陽(yáng)性；④TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期；⑤均行乳腺癌根治術(shù)，術(shù)后接受統(tǒng)一放療治療，并輔以TAM綜合治療，術(shù)前未接受任何化療方案。選擇2010年3月～2011年3月鄭州市人民醫(yī)院收治符合標(biāo)準(zhǔn)的乳腺癌患者106例，年齡36～75歲，中位年齡58歲；其中腫瘤直徑<2 cm 54例、≥2 cm 58例；導(dǎo)管癌81例，小葉癌25例；TNM分期Ⅰ期19例,Ⅱ期51例,Ⅱ期36例；無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例,腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移88例。

1.2 樣本采集及基因組DNA提取 所有患者于術(shù)后第2天清晨采集3 mL空腹靜脈血，EDTA抗凝，以3 000 r/min離心10 min分離血漿；采用苯酚-氯仿抽提法對(duì)基因組DNA進(jìn)行提取，DNA樣品于-80 ℃冰箱保存待測(cè)。

1.3 CYP2D6基因多態(tài)性檢測(cè) 根據(jù)NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中CYP2D6的DNA序列，設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物。CYP2D6上游引物5′-CCATTTGGTAGTGAGGCAGGTAT-3′，下游引物5′-CACCATCCATGTTTGCTTCTGGT-3′，由上海生工生物工程股份有限公司進(jìn)行合成。PCR反應(yīng)體系(20 μL )：基因組DNA(100 ng)2.0 μL，dNTP(2.5 mmol/L)1.0 μL，10×PCR緩沖液 2.0 μL，Taq DNA聚合酶(10 U/μL) 0.5 μL ，上下游引物(10 pmol/μL) 各1.0 μL，ddH2O 13.5 μL。PCR擴(kuò)增條件：首先95 ℃ 15 min；然后95 ℃ 45 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 15 s，40個(gè)循環(huán)；最后72 ℃ 10 min，4 ℃保溫。取10 μL PCR產(chǎn)物加入HphⅠ限制性內(nèi)切酶37 ℃作用1 h，然后取5 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行 2.5% 瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察條帶分布。

1.4 預(yù)后隨訪方法 術(shù)后患者均進(jìn)行電話及門診隨訪，隨訪截止時(shí)間為2016年3月31日，記錄患者無(wú)病生存情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。CYP2D6基因多態(tài)性與ER陽(yáng)性乳腺癌患者臨床參數(shù)間的相關(guān)性采用行×列表的χ2檢驗(yàn)，CYP2D6基因多態(tài)性與ER陽(yáng)性乳腺癌患者無(wú)病生存期間的關(guān)系采用Logistic 回歸模型分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ER陽(yáng)性乳腺癌患者CYP2D6基因多態(tài)性及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 106例ER陽(yáng)性乳腺癌患者中，CYP2D6基因Wt/Wt型48例，占45.3%；Wt/*10型42例，占39.6%；*10/*10型16例，占15.1%。CYP2D6基因型與患者的年齡(χ2=0.391，P=0.822)、腫瘤直徑(χ2=2.544，P=0.280)、組織類型(χ2=3.600，P=0.165)、TNM分期(χ2=2.785，P=0.246)以及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=2.997，P=0.223)無(wú)明顯相關(guān)性。見(jiàn)表1。

表1 CYP2D6基因多態(tài)性與ER陽(yáng)性乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2 CYP2D6基因多態(tài)性與ER陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系 106例ER陽(yáng)性乳腺癌患者中，3年無(wú)病生存75例，5年無(wú)病生存69例。Logistic 回歸模型分析，CYP2D6基因*10/*10型較Wt/Wt型和Wt/*10型對(duì)接受 TAM 治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者3年、5年無(wú)病生存有較高的風(fēng)險(xiǎn)；而CYP2D6基因Wt/Wt型和Wt/*10型對(duì)患者無(wú)病生存的影響類似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 CYP2D6基因多態(tài)性與ER陽(yáng)性乳腺癌患者無(wú)病生存期的關(guān)系

3 討論

在中國(guó)大部分女性乳腺癌患者呈ER陽(yáng)性，而雌激素可通過(guò)與體內(nèi)ER結(jié)合促進(jìn)乳腺癌的發(fā)展[5]。TAM被認(rèn)為是治療ER陽(yáng)性乳腺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療藥物，長(zhǎng)期以來(lái)被證實(shí)可以降低ER陽(yáng)性乳腺癌的復(fù)發(fā)率，延長(zhǎng)患者的無(wú)病生存期[6，7]。但是，TAM本身是一種抗雌激素作用較弱的前體藥物，只有經(jīng)過(guò)肝臟細(xì)胞色素P450酶(CYP450)作用才有轉(zhuǎn)化為具有較強(qiáng)抗雌激素活性的成分[8]。CYP450是一種以血紅蛋白為輔基的b族細(xì)胞色素超家族基因代謝酶，可使有毒性的脂溶性物質(zhì)轉(zhuǎn)化為水溶性物質(zhì)排除體外，在體內(nèi)發(fā)揮解毒的作用，屬單加氧酶[9]。CYP2D6是CYP450家族中的一種，約占CYP450總量的4%，但能代謝約1/3的臨床藥物[10]。TAM經(jīng)CYP2D6代謝為4-羥基TAM(4-OH-TAM)，后者與ER結(jié)合力是TAM藥物本身的100倍，在TAM為主的內(nèi)分泌治療中發(fā)揮中重要作用[11]。熊萱等[12]對(duì)中國(guó)人群CYP2D6的基因多態(tài)性與乳腺癌患者TAM及其代謝物血藥濃度關(guān)系進(jìn)行了Meta分析，結(jié)果顯示攜帶CYP2D6 *10/*10基因型患者的TAM活性代謝物血藥濃度明顯低于攜帶其他基因型患者；攜帶CYP2D6 *10/*10基因型患者的TAM血藥濃度低于攜帶CYP2D6 Wt/Wt基因型患者。而CYP2D6 Wt/Wt及CYP2D6 Wt/*10基因型攜帶患者間，TAM及其活性代謝物血藥濃度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明中國(guó)人群CYP2D6的基因多態(tài)型對(duì)乳腺癌患者體內(nèi)TAM及其代謝物的濃度有影響。

目前，關(guān)于CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)接受TAM治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后的影響還存在較大爭(zhēng)議[13，14]。魏影等[15]對(duì)2003～2008年收治的257例接受TAM治療乳腺癌患者的外周靜脈血或腫瘤組織石蠟切片CYP2D6基因多態(tài)性進(jìn)行分析，研究CYP2D6*10基因型對(duì)接受TAM治療乳腺癌患者生存率相關(guān)性的影響，結(jié)果顯示各CYP2D6 *10基因型的臨床病理參數(shù)之間沒(méi)有相關(guān)性差異。在中國(guó)CYP2D6 *10/*10基因型對(duì)接受TAM治療乳腺癌患者的無(wú)病生存期和整體生存期的影響與CYP2D6 Wt/Wt和CYP2D6 Wt/*10基因型類似，不存在相關(guān)性，提示CYP2D6*10基因型與接受TAM治療乳腺癌患者的生存率之間沒(méi)有相關(guān)性。而肖剛等[16]對(duì)術(shù)后口服TAM內(nèi)分泌治療的絕經(jīng)后ER陽(yáng)性乳腺癌患者CYP2D6基因多態(tài)性與TAM治療后生存情況的相關(guān)性進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)CYP2D6基因型為*10/*10的患者無(wú)復(fù)發(fā)生存期和無(wú)病生存期明顯短于基因型為*1/*10和*1/*1的患者，并未發(fā)現(xiàn)CYP2D6基因型為*1/*10和*1/*1的患者間長(zhǎng)期生存情況有任何顯著性差異，提示CYP2D6*1/*10基因多態(tài)性與絕經(jīng)后ER陽(yáng)性乳腺癌患者的術(shù)后TAM內(nèi)分泌治療的生存情況具有相關(guān)性，可能作為絕經(jīng)后乳腺癌患者TAM療效和預(yù)后估計(jì)的臨床預(yù)測(cè)指標(biāo)。本研究對(duì)106例ER陽(yáng)性乳腺癌患者中CYP2D6基因型進(jìn)行分析，其中Wt/Wt型48例，Wt/*10型42例，*10/*10型16例；CYP2D6基因型與患者的年齡、腫瘤直徑、組織類型、TNM分期以及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性；Logistic回歸模型分析顯示，CYP2D6基因*10/*10型較Wt/Wt型和Wt/*10型對(duì)接受TAM治療ER陽(yáng)性乳腺癌患者3年、5年無(wú)病生存有較高的風(fēng)險(xiǎn)；而CYP2D6基因Wt/Wt型和Wt/*10型對(duì)患者無(wú)病生存的影響類似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，CYP2D6基因*10/*10型ER陽(yáng)性乳腺癌患者接受TAM治療的預(yù)后較差，臨床可在采用TAM治療前進(jìn)行CYP2D6基因多態(tài)性檢測(cè)，以便合理用藥。

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Effects of CYP2D6 gene polymorphism on prognosis of ER-positive breast cancer patients treated with tamoxifen therapy

YUYang,YOUWei,LIANGDong,LYUFeng,YANGQinheng,ZHANGBin

(ZhengzhouPeople′sHospital,Zhengzhou450003,China)

Objective To discuss the effects of cytochrome P4502D6 (CYP2D6) gene polymorphism on prognosis of estrogen receptor (ER)-positive breast cancer patients treated with tamoxifen (TAM) therapy. Methods From May 2010 to May 2012, CYP2D6 genotype was detected in 106 cases of ER-positive breast cancer patients treated with TAM therapy by PCR. The relationship between CYP2D6 polymorphism and clinical parameters and prognosis were analyzed byχ2test and Logistic regression model. Results In 106 cases of ER-positive breast cancer patients treated with TAM therapy, 48 cases of Wt/Wt type accounted for 45.3%, 42 cases of Wt/*10 type accounted for 39.6%, and 16 cases of *10/*10 type accounted for 15.1%.χ2test showed CYP2D6 genotype was not significantly correlated with age (χ2=0.391,P=0.822), tumor size (χ2=2.544,P=0.280), histology (χ2=3.600, P=0.165), TNM stage (χ2=2.785,P=0.246) and axillary lymph node metastasis (χ2=2.997,P=0.223). Logistic regression model showed compared with patients with Wt/Wt type and Wt/*10 type, patients with *10/*10 type had higher risk for 3-year, 5-year disease free survival of ER-positive breast cancer patients treated with TAM therapy. Conclusion The prognosis of *10/*10 type ER-positive breast cancer patients treated with TAM therapy is poor, and we can detect CYP2D6 polymorphism before TAM therapy to use drug rationally.

breast carcinoma; cytochrome P4502D6; gene polymorphism; tamoxifen; estrogen receptor

河南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(142300410388)。

于洋(1980-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)槿橄侔┠退幖叭橄傺装Y因子。E-mail： yuyang6081@163.com

簡(jiǎn)介：尤偉(1963-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要研究方向?yàn)槿橄侔┠退幖叭橄傺装Y因子。E-mail: yw@yueh.me

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.42.005

R737.9

A

1002-266X(2016)42-0017-04

2016-07-28)