氯吡脲人工抗原的合成與鑒定

肖石妹，鄢愛平，肖 芳，萬益群,，郭 嵐,,*

（1.南昌大學(xué)化學(xué)學(xué)院，江西 南昌 330031；2.南昌大學(xué)分析測(cè)試中心，江西 南昌 330047）

氯吡脲人工抗原的合成與鑒定

肖石妹1，鄢愛平2，肖 芳1，萬益群1,2，郭 嵐1,2,*

（1.南昌大學(xué)化學(xué)學(xué)院，江西 南昌 330031；2.南昌大學(xué)分析測(cè)試中心，江西 南昌 330047）

為合成新的、有效的氯吡脲（forchlorfenuron，CPPU）人工抗原，在無水三氯化鋁的催化作用下，采用傅克反應(yīng)對(duì)CPPU小分子進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造。采用碳二亞胺（carbodiimide，EDC）法將半抗原分別與牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）和卵清蛋白（ovalbumin，OVA）進(jìn)行偶聯(lián)，獲得CPPU的免疫抗原（CPPU-BSA)和包被抗原（CPPU-OVA）。采用質(zhì)譜、元素分析和核磁共振氫譜對(duì)CPPU半抗原（CPPU-COOH）的分子結(jié)構(gòu)式進(jìn)行鑒定；采用紫外光譜和高性能基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)偶聯(lián)物的結(jié)構(gòu)和相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示成功合成出CPPU人工抗原，為其抗體的制備和免疫學(xué)方法的構(gòu)建提供了參考。

氯吡脲；半抗原；人工抗原；合成；鑒定

氯吡脲（forchlorfenuron，CPPU）是一種高活性的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑[1]，具有加速細(xì)胞有絲分裂、促進(jìn)細(xì)胞的增大和分化、防止落花落果、促進(jìn)果實(shí)膨大等作用，常用于臍橙、柑橘、獼猴桃、葡萄、西瓜、黃瓜等果蔬的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。殘留于果蔬中的CPPU可能會(huì)對(duì)人類及其他生物造成潛在的威脅，美國環(huán)保署在《農(nóng)藥毒性確認(rèn)和管理》中指出，長(zhǎng)期接觸CPPU會(huì)引起體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的紊亂，造成肺氣腫和體型消瘦。各國對(duì)食品中CPPU的最大殘留限量不同，范圍為0.01～0.1 mg/kg，如澳大利亞規(guī)定獼猴桃中CPPU的最大殘留限量為0.01 mg/kg，美國為0.04 mg/kg，歐盟為0.05 mg/kg，日本為0.1 mg/kg[2-3]。我國規(guī)定食品中CPPU最大殘留限量為黃瓜、西瓜、甜瓜不大于0.1 mg/kg，獼猴桃、葡萄、橙、枇杷不大于0.05 mg/kg[4]。因此，開展食品中CPPU殘留快速檢測(cè)新技術(shù)研究對(duì)食品安全生產(chǎn)、現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)督都有著十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

CPPU殘留檢測(cè)目前主要采用固相萃取-高效液相色譜[5]、液相色譜[6]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用[7]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用[8]等技術(shù)，這些方法的準(zhǔn)確度和精密度較高，但存在檢測(cè)成本高、周期長(zhǎng)及操作繁瑣等缺陷，不適于大規(guī)?，F(xiàn)場(chǎng)篩查。與色譜等分析技術(shù)相比，免疫分析法基于抗原與抗體特異性結(jié)合的測(cè)定原理，具有樣品前處理簡(jiǎn)單、樣品用量少、檢測(cè)成本低、選擇性高及分析速度快等特點(diǎn)。該法已廣泛應(yīng)用于食品中真菌毒素[9]、農(nóng)藥[10-11]、獸藥[12]殘留等危害物的檢測(cè)，但目前鮮見其應(yīng)用于食品中CPPU殘留分析的報(bào)道。

小分子物質(zhì)只有反應(yīng)原性，而不具備免疫原性[13]，要想獲得其抗體，構(gòu)建免疫學(xué)分析方法，必須首先與大分子蛋白載體偶聯(lián)合成全抗原，這要求小分子化合物本身具有或者通過衍生得到活性基團(tuán)（如氨基、羧基、重氮鹽等）才能與載體進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)[14-15]。CPPU本身無活性基團(tuán)，因此，本研究采用傅克反應(yīng)在CPPU的苯環(huán)上引入活性基團(tuán)羧基鏈，然后與載體蛋白交聯(lián)成功制備CPPU的人工抗原。本研究合成方法簡(jiǎn)單、有效，拓寬了可選用的抗原合成方法，為CPPU抗體的進(jìn)一步制備提供了前期研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑

CPPU（純度≥98%）、丁二酸酐 上海百靈威公司；N-羥基琥珀酰亞胺（N-hydroxysuccinimide，NHS）、1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride，EDC）、N,N-二甲基甲酰胺（N,N-dimethyllformamide，DMF，分析純）、無水三氯化鋁、鹽酸 上海生工生物工程股份有限公司；牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、卵清蛋白（ovalbumin，OVA） 美國Sigma公司；1×PBS透析液（0.01 mol/L，pH 7.4）：NaCl 8 g，KCl 0.2 g，KH2PO40.2 g，Na2HPO4·12H2O 2.9 g，蒸餾水定容至1 000 mL；甲醇、乙腈（色譜純，99.9%） 美國Tedia公司；芥子酸（4-hydroxy-3,5-dimethoxycinnamic acid，TFA） 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

AV 600核磁共振波譜儀 瑞士布魯克公司；5800基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀 美國AB Sciex公司；6430三重串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀 美國Agilent公司；EL Ⅲ元素分析儀 德國Elementar公司；MX5微量天平 瑞士Mettler Toledo公司；2501PC紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司；搖床 上海智誠電子有限公司；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；SM2渦旋混合器 德國IKA公司；Milli-Q超純水儀 美國Millipore公司。

1.3 方法

1.3.1 CPPU半抗原的制備

采用傅克反應(yīng)[16-17]合成CPPU半抗原（CPPU-COOH）。采用無水DMF做溶劑，CPPU（2.48 g）、丁二酸酐（1 g）、無水三氯化鋁（13.35 g）按1∶1∶10的物質(zhì)的量比進(jìn)行投料。將DMF（2.2 mL）逐滴加入到裝有無水三氯化鋁的燒瓶中，不斷攪拌使其充分溶解，待瓶口不再有白霧冒出時(shí)放入油浴中。把CPPU和丁二酸酐的混合物加入到燒瓶中，反應(yīng)2 h后，把反應(yīng)液慢慢倒入90 mL冰水中，加6 mL濃度為12 mol/L的濃鹽酸，冷卻靜置后過濾水洗，得到粗品，再用DMF/甲醇對(duì)粗品進(jìn)行重結(jié)晶純化，得到淡粉色固體物質(zhì)。其合成路線見圖1。

圖1 CPPU半抗原合成路線Fig. 1 Synthetic route of CPPU-COOH

1.3.2 CPPU半抗原的結(jié)構(gòu)鑒定

1.3.2.1 元素分析儀對(duì)半抗原的最簡(jiǎn)式鑒定

采用元素分析儀對(duì)純化后的CPPU-COOH進(jìn)行分析測(cè)定。C、H、N 3 種元素的測(cè)定用對(duì)氨基苯磺酸作為標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器，然后再稱取5 mg樣品置于還原管和燃燒管中燃燒，同時(shí)通氦氣（He）和氧氣（O2），He流量為200 mL/min，O2流量為25 mL/min；O元素的測(cè)定用苯甲酸作為標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器，然后再稱取1.5 mg樣品置于燃燒管中燃燒，只通O2，流量為200 mL/min。

1.3.2.2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)半抗原的相對(duì)分子質(zhì)量鑒定

采用三重串聯(lián)四極桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)純化后的CPPU-COOH的分子式進(jìn)行分析。色譜柱為Eclipse XDB-C18Column（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相為100%的色譜純甲醇；流速為0.3 mL/min；進(jìn)樣量為5 μL；設(shè)定掃描范圍為m/z 50～500；霧化氣壓力為40 psi；干燥氣流速為11.0 L/ min；干燥氣溫度為300 ℃；毛細(xì)管電壓為4.0 kV。在電噴霧離子源（electron spray ionization，ESI）離子源的正負(fù)離子模式下同時(shí)檢測(cè)，再以分子離子為母離子做二級(jí)質(zhì)譜正負(fù)離子掃描。

1.3.2.3 核磁共振對(duì)半抗原的分子結(jié)構(gòu)式鑒定

結(jié)合核磁共振對(duì)CPPU原料和CPPU-COOH的氫原子進(jìn)行氫譜鑒定。稱取5 mg樣品置于核磁管中，用氘代試劑二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）充分溶解樣品，再對(duì)充分溶解的樣品進(jìn)行掃描，樣品測(cè)定前的等待時(shí)間為1 s，采集時(shí)間為3.1 s，每個(gè)樣品的掃描次數(shù)為16 次。

1.3.3 EDC法制備人工抗原

1.3.3.1 EDC法制備免疫抗原

[18]的方法，準(zhǔn)確稱取CPPU-COOH 3.48 mg溶于200 μL DMF中，加入NHS 1.38 mg（另溶于200 μL DMF），再加入2.88 mg溶解好的EDC（另溶于300 μL DMF），室溫條件下振蕩反應(yīng)12 h（溶液1）；稱取6.8 mg BSA（CPPU-COOH與BSA的物質(zhì)的量比為100∶1）溶于2 mL 1×PBS中（溶液2）。再將溶液1逐滴加入溶液2中，邊加邊振蕩，冰浴振蕩反應(yīng)12 h。反應(yīng)混合物移入處理好的透析袋中，用超純水透析3 d，每天換3 次透析液，即得到CPPU免疫抗原（CPPU-BSA），合成路線見圖2。

圖2 CPPU免疫抗原的EDC法合成路線Fig. 2 Synthetic route of immunogen by EDC method

1.3.3.2 EDC法制備包被抗原

參考文獻(xiàn)[19]的方法，稱取CPPU-COOH 3.48 mg溶于200 μL DMF中，加入NHS 3.45 mg（溶于200 μL DMF），再直接加入2.88 mg EDC（另溶于300 μL DMF），室溫振蕩反應(yīng)12 h（溶液3）；稱取4.5 mg OVA（CPPU-COOH與OVA的物質(zhì)的量比為100∶1）溶于1.8 mL 1×PBS中（溶液4）。溶液3與溶液4混勻后，冰浴振蕩反應(yīng)12 h。同上透析即得到CPPU免疫抗原（CPPU-OVA），合成路線同圖2。

1.3.4 CPPU人工抗原的鑒定

1.3.4.1 紫外光譜分析

將半抗原（CPPU-COOH）、全抗原（CPPU-OVA，CPPU-BSA）和載體蛋白（BSA、OVA）分別用超純水稀釋至質(zhì)量濃度范圍在0.01～0.1 mg/mL之間，使得物質(zhì)的吸光度在0.2～0.8之間，用超純水做參比溶液，測(cè)定物質(zhì)的吸光度[20-21]。

1.3.4.2 高性能基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）分析

基質(zhì)輔助溶液的配制[22]：將34 μL 0.15% TFA與17 μL的乙腈混合，再加入適量的TFA使溶液達(dá)到過飽和狀態(tài)，超聲20 min，3 000 r/min 離心5 min，取上清液備用。

載體蛋白BSA、OVA以及偶聯(lián)物CPPU-BSA、CPPU-OVA脫鹽后分別與基質(zhì)輔助溶液混合，點(diǎn)到樣品靶上，放入質(zhì)譜儀內(nèi)進(jìn)行激光掃描。通過相對(duì)分子質(zhì)量數(shù)據(jù)的改變說明半抗原與蛋白偶聯(lián)成功與否，并計(jì)算出蛋白與半抗原的偶聯(lián)比[23]，CPPU與載體蛋白的結(jié)合比按以下公式計(jì)算。

式中：MA、MB和MC分別表示半抗原、載體蛋白、全抗原的相對(duì)分子質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 CPPU半抗原的分子結(jié)構(gòu)式鑒定

2.1.1 元素分析儀對(duì)半抗原的測(cè)定結(jié)果

采用元素分析儀對(duì)半抗原合成產(chǎn)物的C、H、O、N 4種元素的含量進(jìn)行測(cè)定，Cl的含量通過差減法求得。通過各個(gè)元素的百分含量推測(cè)物質(zhì)的最簡(jiǎn)式（表1）。由表中數(shù)據(jù)可知合成產(chǎn)物與目標(biāo)化合物（C16H14ClN3O4）具有相同的最簡(jiǎn)式。

表1 元素分析數(shù)據(jù)Table 1 Elemental analysis of the hapten

2.1.2 CPPU-COOH的質(zhì)譜鑒定

圖3 CPPU半抗原的一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖Fig. 3 Mass spectrum and tandem mass spectrum of CPPU-COOH

對(duì)合成的半抗原進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，一級(jí)質(zhì)譜ESI+下出現(xiàn)m/z 348.1離子（圖3a），ESI-下出現(xiàn)m/z 346.1離子（圖3b），分別對(duì)應(yīng)于加合質(zhì)子準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+和[M-H]-，可以判斷該物質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量為347.1，與目標(biāo)產(chǎn)物的理論相對(duì)分子質(zhì)量（347.6）基本相符，這進(jìn)一步驗(yàn)證了元素分析的結(jié)果，說明合成產(chǎn)物與目標(biāo)產(chǎn)物不僅具有相同的最簡(jiǎn)式，而且相對(duì)分子質(zhì)量也基本相同。再對(duì)照目標(biāo)化合物的分子結(jié)構(gòu)式，對(duì)合成產(chǎn)物的一級(jí)質(zhì)譜及二級(jí)質(zhì)譜出現(xiàn)的碎片離子做歸屬分析：一級(jí)質(zhì)譜ESI-下出現(xiàn)的m/z 192.1（圖3b）為目標(biāo)化合物斷裂酰胺鍵之后形成的N-（C6H4）（COC2H4COOH）碎片；二級(jí)質(zhì)譜ESI+-MS2出現(xiàn)的m/z 128.9（圖3c）為斷裂酰胺鍵之后形成的NH2+（C5H3NCl）碎片；二級(jí)質(zhì)譜ESI+-MS2出現(xiàn)m/z 126.9（圖3d）為斷裂酰胺鍵之后形成的N-（C5H3NCl）碎片。

2.1.3 核磁共振氫譜分析

為了進(jìn)一步鑒定合成產(chǎn)物的分子結(jié)構(gòu)式，對(duì)CPPU及純化后的CPPU-COOH分別進(jìn)行1H-NMR（600 MHz，DMSO）分析。由圖4、5可知，CPPU共有10 個(gè)H，分別對(duì)應(yīng)δ 9.179～9.405（2H，2NH）、δ 7.107～7.320（5H，苯環(huán)）、δ 7.436～8.209（3H，雜芳環(huán)）。而CPPU-COOH有14 個(gè)H，分別對(duì)應(yīng)δ 9.389～9.469（2H，2NH）、δ 7.349～7.668（4H，苯環(huán)）、δ 7.967～8.212（3H，雜芳環(huán)）、δ 12.097（1H，COOH）、δ 2.573～3.334（4H，2CH2），其中苯環(huán)上有4 個(gè)H，分為兩類，分別對(duì)應(yīng)δ 7.362（1.84H）、δ 7.668（1.86H）。將兩個(gè)核磁共振氫譜進(jìn)行對(duì)照，可以清楚地看到，CPPU-COOH的1H-NMR譜圖中保留了CPPU中苯環(huán)、酰胺基和氮雜環(huán)的氫譜信息，增加了δ 12.097（1H，COOH）峰和δ 2.573～3.334（4H，CH2CH2）峰，同時(shí)苯環(huán)上的H由5 個(gè)變成4 個(gè)，并且只分為兩類，這說明在苯環(huán)上發(fā)生對(duì)位的單取代反應(yīng)。由此可推測(cè)丁二酸酐開環(huán)與CPPU發(fā)生了苯環(huán)上的對(duì)位取代反應(yīng)，形成一個(gè)含4 個(gè)C原子的取代基，同時(shí)末端的羰基轉(zhuǎn)變成了羧基，為新化合物與蛋白質(zhì)偶聯(lián)創(chuàng)造了條件。

圖5 CPPU-COOH的核磁共振圖譜Fig. 51H-NMR spectrum of CPPU-COOH

由上述元素分析、質(zhì)譜和核磁共振氫譜等技術(shù)手段的分析結(jié)果，可推斷所合成的產(chǎn)物即為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的CPPU-COOH目標(biāo)物，該化合物保留了CPPU中苯環(huán)、雜環(huán)此類具有高免疫活性的特征結(jié)構(gòu)[24]，同時(shí)引入了一個(gè)含3 個(gè)C原子的連接臂和羧基活性基團(tuán)，便于與載體蛋白偶聯(lián)合成抗原，而合適的連接臂（3～6 個(gè)碳原子）的存在可以突出待測(cè)物分子的特征結(jié)構(gòu)，使其不會(huì)被載體蛋白的三維結(jié)構(gòu)掩蓋，從而保證免疫抗體的合成成功[25-26]。

2.2 CPPU人工抗原的鑒定

2.2.1 紫外掃描光譜分析

圖6 人工免疫抗原紫外掃描光譜圖Fig. 6 UV absorption spectrum of artificial immune antigen

按1.3.3節(jié)將CPPU-COOH分別與BSA和OVA進(jìn)行偶聯(lián)得到人工免疫抗原和人工包被原，對(duì)人工抗原、半抗原和載體蛋白分別進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果見圖6和圖7。由圖6可知，BSA在波長(zhǎng)278 nm處有最大吸收峰，CPPUCOOH在298 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，而CPPU全抗原在309 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，說明產(chǎn)物與兩種反應(yīng)物相比，最大吸收峰位發(fā)生了一定的變化，表明CPPU-COOH與BSA可能發(fā)生了偶聯(lián)反應(yīng)。同樣，由圖7可知，OVA與也可能發(fā)生了偶聯(lián)反應(yīng)。

圖7 人工包被抗原紫外掃描光譜圖Fig. 7 UV absorption spectrum of artificial coating antigen

2.2.2 MALDI-TOF-MS測(cè)定全抗原和載體蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量

當(dāng)載體蛋白偶聯(lián)上半抗原分子后，其分子質(zhì)量會(huì)發(fā)生改變，因此可通過MALDI-TOF-MS測(cè)定蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量（圖8），來進(jìn)一步驗(yàn)證載體蛋白是否與半抗原發(fā)生偶聯(lián)，同時(shí)測(cè)定偶聯(lián)比。

圖8 載體蛋白和人工抗原的質(zhì)譜圖Fig. 8 Mass spectra of carrier proteins and artificial antigens

由MALDI-TOF-MS測(cè)定結(jié)果可知，載體蛋白BSA的單電荷離子峰為66 276.241（圖8a），OVA的單電荷離子峰為44 425.687（圖8b），全抗原CPPU-BSA的分子離子峰為74 874.767（圖8c），CPPU-OVA的分子離子峰為47 382.236（圖8d），這些數(shù)據(jù)很好地說明了半抗原小分子成功地與載體蛋白進(jìn)行了偶聯(lián)[27]。已知CPPU-COOH相對(duì)分子質(zhì)量是347，可得出平均每個(gè)載體蛋白BSA分子上偶聯(lián)的CPPU-COOH分子個(gè)數(shù)＝（74 874.767-66 276.241）/347≈24.78 個(gè)。載體蛋白OVA分子上偶聯(lián)的CPPU-COOH分子個(gè)數(shù)＝（47 382.236-44 425.687）/347≈8.52 個(gè)。為獲得相應(yīng)的抗血清，合成的人工抗原一般要求小分子與載體蛋白的偶聯(lián)比在1∶10～1∶25之間，方可有效地刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答[28]，另有文獻(xiàn)報(bào)道每一載體上含有8～25 個(gè)半抗原能得到效價(jià)較高的抗體[29]。因此從偶聯(lián)比結(jié)果來看，用本研究制備的CPPU免疫抗原（CPPU-BSA）免疫小鼠，有可能產(chǎn)生相應(yīng)的應(yīng)答。

3 結(jié) 論

本研究以CPPU和丁二酸酐為反應(yīng)物，采用傅克反應(yīng)制備CPPU-COOH，成功地在CPPU的苯環(huán)上引入一個(gè)含3 個(gè)碳原子的連接臂和活性基團(tuán)羧基，既保留了CPPU的特征結(jié)構(gòu)，又能夠與載體蛋白偶聯(lián)合成抗原，同時(shí)合適的連接臂可以很好地使小分子半抗原充分暴露在載體蛋白的表面，便于抗原遞呈細(xì)胞對(duì)其的識(shí)別，產(chǎn)生免疫應(yīng)答[26]。采用重結(jié)晶法對(duì)合成的CPPU-COOH進(jìn)行了純化，以避免雜質(zhì)與載體蛋白偶聯(lián)而影響免疫效果。在此基礎(chǔ)上，采用EDC法制備了CPPU的免疫抗原及包被抗原。應(yīng)用紫外光譜、質(zhì)譜、核磁共振、元素分析等技術(shù)，對(duì)所制備的CPPU-COOH及其全抗原進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。同時(shí)采用MALDI-TOF-MS分析技術(shù)，測(cè)得免疫原和包被原的偶聯(lián)比分別為24.78∶1和8.52∶1，表明成功合成了CPPU人工抗原，為其抗體的制備和免疫法的構(gòu)建提供了依據(jù)。

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Synthesis and Identification of Artificial Antigens of Forchlorfenuron

XIAO Shimei1, YAN Aiping2, XIAO Fang1, WAN Yiqun1,2, GUO Lan1,2,*
(1. College of Chemistry, Nanchang University, Nanchang 330031, China; 2. Center of Analysis and Testing, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

This work aimed to develop an effective novel method to synthesize artificial antigens of forchlorfenuron (CPPU). Towards this goal, Friedel-Crafts reaction was used to modify the structure of forchlorfenuron with the catalysis of anhydrous aluminum chloride and the hapten was coupled with bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin (OVA) by carbondiimine (EDC) method, respectively, to obtain forchlorfenuron immunogen and coating antigen. The molecular structure of the forchlorfenuron hapten was identified by elemental analysis, mass spectroscopy (MS) and nuclear magnetic resonance spectroscopy (1H-NMR). The artificial antigens were identified by UV spectroscopy and high performance matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectroscopy (MALDI-TOF-MS). The experimental results showed that the artificial antigen of forchlorfenuron has been synthesized successfully and it can lay the foundation for the preparation of antibody and the development of immunoassays.

forchlorfenuron; hapten; artificial antigen; synthesis; identification

10.7506/spkx1002-6630-201621031

TS201.2

A

1002-6630（2016）21-0183-06

肖石妹, 鄢愛平, 肖芳, 等. 氯吡脲人工抗原的合成與鑒定[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(21): 183-188. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201621031. http://www.spkx.net.cn

XIAO Shimei, YAN Aiping, XIAO Fang, et al. Synthesis and identification of artificial antigens of forchlorfenuron[J]. Food Science, 2016, 37(21): 183-188. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201621031. http://www.spkx.net.cn

2016-01-31

江西省科技支撐計(jì)劃重大項(xiàng)目（20143ACG70005；20133ACG70002）；國家自然科學(xué)基金地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目（21465017）

肖石妹（1990—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：1959499683@qq.com

*通信作者：郭嵐（1973—），女，研究員，博士，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：guolan@ncu.edu.cn