HPLC法測定蝦康健中虎杖苷的含量

張 波 王志萍 米惠廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001南寧市明秀東路179號(hào)

馮 橋 廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)藥研究院530001

王 勤 王孝勛 廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001

·中藥方劑·

HPLC法測定蝦康健中虎杖苷的含量

張 波 王志萍*米惠廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001南寧市明秀東路179號(hào)

馮 橋 廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)藥研究院530001

王 勤 王孝勛 廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001

目的：建立蝦康健中虎杖苷的含量測定方法。方法：采用HPLC法，以島津InertsilODS－3柱為色譜柱（5μm，4.6mm×250mm），流動(dòng)相為乙腈∶水（22∶78），體積流量為1ml／min，檢測波長為306nm，柱溫為30℃。結(jié)果：虎杖苷進(jìn)樣量在0.015～1.600 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，Y＝3×106X－69 226，r2＝0.99952；平均加樣回收率為98.95%，RSD＝1.23%（n＝6）；三批蝦康健的虎杖苷含量分別為0.7991mg／g、0.7943mg／g、0.7911mg／g。結(jié)論：本研究建立的HPLC法可用于蝦康健中虎杖苷的含量測定及質(zhì)量控制。

HPLC；蝦康??；虎杖苷；含量測定

蝦康健是本課題組研究開發(fā)的中藥新制劑，由板藍(lán)根、虎杖、茵陳、羅漢果等組成，試用于南美白對蝦的人工養(yǎng)殖，結(jié)果能顯著提高南美白對蝦的存活率，同時(shí)能促進(jìn)對蝦生長。由于湯劑使用不便，本課題組對方中的中藥進(jìn)行提純并制成粉劑。虎杖為方中的主要藥材之一，其主要成分虎杖苷具有活血定痛、清利濕熱、抗菌、抗炎、促進(jìn)微循環(huán)作用［1－4］。因此，本研究選擇虎杖苷作為含量測定指標(biāo)，參考相關(guān)文獻(xiàn)［5－6］，采用HPLC法測定蝦康健中虎杖苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Waters e2695高效液相色譜儀（沃特世公司）；EL104電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）。

1.2 試藥蝦康健由廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)分別為20150722、20150723、20150724；虎杖苷標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為111575－200502，純度≥98%；乙腈色譜純?yōu)槟斯煞輧珊瞎井a(chǎn)品；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱為島津Inertsil ODS－3色譜柱（5 μm，4.6 mm× 250mm），流動(dòng)相為乙腈∶水（22∶78），體積流量為1 ml／min，檢測波長為306 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10 μl；理論板數(shù)按虎杖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24 h的虎杖苷對照品適量，精密稱定，置于10 ml棕色量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，制備對照品儲(chǔ)備溶液，然后稀釋成0.0150 mg／ml虎杖苷對照品溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備取蝦康健約1 g，精密稱定，置于25 ml具塞錐形瓶中，加甲醇溶解，稱重，超聲處理（300 W，40 kHz）使充分溶解，放冷，加甲醇補(bǔ)足減失重量，過0.45 μm濾膜，取續(xù)濾液，即得。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 陰性對照溶液的制備按蝦康健處方比例稱取缺虎杖的其他藥材，根據(jù)蝦康健生產(chǎn)工藝制備成缺虎杖藥材的陰性對照制劑。再按2.3項(xiàng)供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μl進(jìn)樣測定，色譜圖見圖1?；⒄溶张c相鄰峰完全分離，分離度均大于1.5，保留時(shí)間為9.1 min左右，陰性無干擾，理論塔板數(shù)不低于3 000。

2.5 線性關(guān)系考察取對照品溶液及對照品儲(chǔ)備溶液適量，分別制備0.0015 mg／ml、0.0030 mg／ml、0.0060 mg／ml、0.0120 mg／ml、0.0225 mg／ml、0.0300 mg／ml、0.0800 mg／ml、0.1600 mg／ml的對照品溶液。按照2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測定，各個(gè)濃度對照品溶液分別進(jìn)樣10 μl進(jìn)行測定，以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y＝3×106X－69 226，r2＝0.99952。結(jié)果表明，虎杖苷進(jìn)樣量在0.015～1.600 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)分別按照2.3項(xiàng)方法制備6份供試品溶液，按2.1項(xiàng)方法進(jìn)樣10 μl測定含量，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中虎杖苷的含量為0.0381 mg／ml，RSD＝0.92%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)對同一供試品溶液分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h分別進(jìn)樣，按2.1項(xiàng)方法進(jìn)樣10 μl，結(jié)果虎杖苷平均峰面積為885 446，RSD＝1.43%（n＝8），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)取已知虎杖苷含量的蝦康健樣品（批號(hào)：20150722）6份，每份約4 g，精密稱定，再分別精密量取虎杖苷對照品儲(chǔ)備液適量，按2.3項(xiàng)方法制備供試品溶液，再按2.1項(xiàng)方法進(jìn)行測定，計(jì)算出平均回收率為98.95%，RSD＝1.23%（n＝6），結(jié)果見表1。表明本方法的準(zhǔn)確度符合要求。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.9 樣品含量測定按2.3項(xiàng)方法制備3批蝦康健供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件各進(jìn)樣10 μl測定，每批平行測定2次，計(jì)算3批蝦康健制劑中虎杖苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 虎杖苷含量測定結(jié)果（n＝2）

3 討論

本研究參照文獻(xiàn)［7－12］的方法建立蝦康健制劑中虎杖苷的含量測定方法，曾擬定流動(dòng)相為乙腈∶水（23∶77），結(jié)果所出峰形有拖尾現(xiàn)象。通過反復(fù)對比與調(diào)整，當(dāng)乙腈∶水比例為22∶78時(shí)，峰形對稱，分離效果好，出峰時(shí)間適宜，陰性無干擾。因此，確定流動(dòng)相比例為乙腈∶水（22∶78）。

本研究建立的HPLC法可用于測定蝦康健中虎杖苷的含量，方法穩(wěn)定、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，可為蝦康健的定量分析提供一種科學(xué)方法。

［1］郭潔云，朱文慶，趙維中，等.虎杖苷對實(shí)驗(yàn)性急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17（11）：2183－2184.

［2］公衍玲，王宏波，趙文英，等.虎杖及配伍醇提液不同極性提取物的抑菌活性［J］.青島科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，29（5）：419－421.

［3］樊慧婷，丁世蘭，林洪生.中藥虎杖的藥理研究進(jìn)展［J］.中國中藥雜志，2013，38（15）：2545－2548.

［4］王瑜，薛劍，孫曉東，等.虎杖苷降低急性血瘀模型大鼠血液粘度的研究［J］.中國藥房，2004，15（5）：275－276.

［5］蘇青，黃瑞松，程鈺琪.壯藥制劑武打?qū)④婔⒄溶蘸偷てし雍繙y定方法建立［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，32（4）：668－672.

［6］王云霞，王梅.乙肝清熱解毒膠囊中虎杖苷的含量測定［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2008，28（4）：65－66.

［7］衣洪福.虎杖質(zhì)量研究［D］.上海：第二軍醫(yī)大學(xué)，2003.

［8］張明昶，彭小冰，王玉明，等.HPLC法同時(shí)測定虎杖中多組分的含量［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（24）：13086－13089.

［9］歐陽軍.高效液相色譜法測定護(hù)肝寧膠囊中虎杖苷的含量［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2013，29（15）：9－10.

［10］于秀華，張敏，王明星.HPLC法測定前列達(dá)康片中虎杖苷與大黃素的含量［J］.中國藥師，2007，10（11）：1142－1144.

［11］劉艷.HPLC測定乙肝扶正膠囊中虎杖苷的含量［J］.中成藥，2008，30（10）：24－26.

［12］陳剛.高效液相色譜法測定清肝利膽排石丸中虎杖苷含量［J］.中國藥業(yè)，2015，14（1）：46－47.

（2016－05－06收稿/編輯陳明偉）

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