尋常型銀屑病患者外周血中白介素-35的檢測

林 玲 張麗丹 劉煒鈺 李 薇 龔葉青 羅 權(quán)

尋常型銀屑病患者外周血中白介素-35的檢測

林 玲 張麗丹 劉煒鈺 李 薇 龔葉青 羅 權(quán)

目的: 檢測尋常型銀屑病患者外周血中白細胞介素35(IL-35)水平。方法: 應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測30例尋常型銀屑病患者外周血清中IL-35的水平。結(jié)果: 與正常人對照組相比，尋常型銀屑病患者血漿IL-35水平顯著降低，進行期患者組顯著低于靜止期患者組(P＜0.05)。IL-35血清水平與尋常型銀屑病嚴重程度指數(shù)呈負相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論: IL-35在尋常型銀屑病的發(fā)病中可能起重要作用。

銀屑?。?白細胞介素35

銀屑病是多基因遺傳背景下T細胞失常的免疫性疾病，目前其發(fā)病機制尚不清楚。有研究表明T細胞活化在銀屑病發(fā)病的免疫過程中起重要作用，在T細胞的調(diào)控中，調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)的作用是研究的熱點之一[1]。IL-35是2007年發(fā)現(xiàn)的IL-12家族的一個新成員，是由EB病毒誘導(dǎo)基因3(epstein-barr virus-induced gene 3，EBI3)亞基和p35亞基結(jié)合而成的異二聚體[2，3]。研究表明IL-35是與Treg有密切關(guān)系的新型免疫調(diào)控分子，具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能。本研究通過對尋常型銀屑病患者血清中IL-35表達水平進行分析，探討IL-35在尋常型銀屑病發(fā)病中的可能作用及其臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2012年12月至2013年10月在我所門診就診的尋常型銀屑病患者共30例。病例篩選標準:根據(jù)《臨床皮膚病學(xué)》[4]診斷標準臨床確診者，其中有20例經(jīng)病理活檢明確診斷；所有銀屑病患者近2個月內(nèi)未系統(tǒng)應(yīng)用維A酸、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等藥物；2周內(nèi)未使用任何外用藥物。病例中男20例，女10例，年齡25～70歲，平均40歲。根據(jù)《臨床皮膚病學(xué)》[4]分期標準患者進行期18例，靜止期12例，病程6個月～10余年。銀屑病患者的皮損面積和嚴重程度PASI評分為7.6～30.4分，平均(12.06 ±3.48)分。另取30名正常人血清作為對照組，無免疫性疾病及系統(tǒng)性疾病，無銀屑病家族史。正常人對照組與銀屑病患者組在性別及年齡上無統(tǒng)計學(xué)差異。

1.2 標本收集 患者自肘靜脈抽血5 mL，置于高壓消毒的試管中，2000 r/min離心15 min，小心吸取上層血清置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩φ战M取正常人血清按同樣條件保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測方法 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)方法，具體操作嚴格按說明書進行。IL-35試劑盒購自武漢博士德生物工程公司。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計學(xué)處理利用SPSS 11.0軟件包進行分析，各組間均數(shù)比較采用t檢驗。銀屑病患者血清IL-35與尋常型銀屑病嚴重指數(shù)PASI評分之間相互關(guān)系采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清IL-35濃度 尋常型銀屑病患者血清IL-35的水平低于對照組(P＜0.01)。進行期與靜止期的尋常型銀屑病患者血清IL-35水平差異有顯著性(P＜0.05)，見表1。

表1 各組血清中IL-35水平比較 (ng/mL)

2.2 血清IL-35水平與銀屑病皮損面積和嚴重程度PASI評分的關(guān)系 尋常型銀屑病患者血清中IL-35水平與銀屑病嚴重程度PASI評分呈負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為:0.437(P＜0.05)。

3 討論

-35血清濃度低于靜止期組患者(P＜0.05)，提示IL-35作為一種抑制性細胞因子，可能在銀屑病發(fā)病過程中起了抗炎作用。隨病情控制，銀屑病靜止期患者組IL-35水平逐漸上升至正常，提示IL-35水平隨著銀屑病病情的緩解而恢復(fù)。相關(guān)性分析顯示尋常型銀屑病患者血清中IL-35水平與銀屑病嚴重程度評分PASI呈負相關(guān)，提示尋常型銀屑病患者血清中IL -35水平與銀屑病病情輕重有關(guān)，這一結(jié)果可望成為評估尋常型銀屑病嚴重程度的指標。我們的研究結(jié)果提示IL-35可能參與了尋常型銀屑病的發(fā)病機制，在尋常型銀屑病的發(fā)病中可能發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，具體作用機制還有待進一步研究。

[1]Boissier MC，Assier E，F(xiàn)algarone G，et al.Shifting the imbalance from Thl/Th2 to Thl7/treg:the changing rheumatoid arthritis paradigm[J].Joint Bone Spine，2008，75(4):373-375.

[2]NiedbalaW，Wei XQ，Cai B，et al.IL-35 is a novel cytokine with therapeutic effects against collagen-induced arthritis through the expansion of regulatory T cells and suppression of Th17 cells[J].Eur J Immunol，2007，37(11):3021-3029.

[3]Collison LW，Workman CJ，Kuo TT，et al.The inhibitory cytokine IL-35 contributes to regulatory T-cell function[J]. Nature，2007，450:566-569.

[4]趙辨.臨床皮膚病學(xué)[M].3版.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001.171，764-765.

[5]何玉清，張錫寶，吳志華，等.銀屑病患者外周血Th1細胞分化偏態(tài)性分析[J].嶺南皮膚性病科雜志，2002，9(1):1 -4.

[6]Chen L，Shen Z，Wang G，etal.Dynamic frequency of CD4+ CD25+Foxp3+Treg cells in Psoriasis vuigaris[J].JDermatol Sci，2008，51(3):200-203.

[7]Afzali B，LombardiG，Lechler RI，et al.The role of T helper 17(Th17)and regulatory T cells(Treg)in human organ transplantation and autoimmune disease[J].Clin Exp Immunol，2007，148(1):32-46.

[8]Chaturvedi V，Coiiison LW，Guy CS，et al.Cutting edge: Human regulatory T cells require IL-35 tomediate suppression and infectious tolerance[J].J Immunol，2011，186 (12):6661-6666.

(收稿:2016-05-14 修回:2016-07-07)

目前普遍認為銀屑病發(fā)病是一種多基因遺傳多因素作用參與的T細胞免疫介導(dǎo)的多種致炎因子共同參與的炎癥性、增生性皮膚病。既往研究表明，T細胞在銀屑病發(fā)病的免疫過程中起到重要作用，研究發(fā)現(xiàn)Th1細胞分化偏態(tài)性，以IFN-γ為代表的Th1細胞因子在銀屑病發(fā)病機制中起重要作用[5]。近年進一步研究發(fā)現(xiàn)兩種與Th1細胞和Th2細胞不同的獨立T細胞亞群Th17與Treg細胞在銀屑病發(fā)病中亦起著重要作用，介導(dǎo)一系列炎癥反應(yīng)的Th17細胞與介導(dǎo)免疫耐受的Treg都來源于初始T細胞，Th17是產(chǎn)生IL-17的T細胞亞群，Treg則在體內(nèi)執(zhí)行免疫抑制功能，限制過度及錯誤的免疫應(yīng)答，兩者功能和分化過程相互對抗，在正常情況下兩者保持平衡，有利于機體的免疫穩(wěn)定狀態(tài)的維持。Treg細胞作用機制主要包括通過分泌細胞因子IL-10、TGF-β和細胞間直接接觸介導(dǎo)免疫抑制[6]。IL-35是近年來新發(fā)現(xiàn)的具有免疫抑制功能的細胞因子，為白介素-12家族新成員，它與TGF-β、IL-10一樣，為CD4+CD25+Treg細胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用所依賴的細胞因子，在CD4+CD25+Treg細胞參與下通過直接作用于效應(yīng)性T細胞或者通過誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-10誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細胞，對效應(yīng)性T細胞和炎性細胞因子分泌產(chǎn)生抑制作用，同時IL-35能顯著抵制Th17細胞的分化和功能，從而影響IL-17的水平和作用[7，8]。我們研究結(jié)果顯示，尋常型銀屑病患者血清IL-35明顯低于正常對照組(P＜0.01)，說明血清中IL-35水平變化與銀屑病發(fā)病有著密切關(guān)系。我們的實驗結(jié)果還顯示在不同病期IL -35血清濃度差異有顯著性，其中進行期組的患者IL

Detection of interleukin-35 in serum of the patients w ith psoriasis vulgaris

LIN Ling，ZHANG Lidan，LIUWeiyu，LIWei，GONG Yeqing，LUO Quan. Guangzhou Institute ofDermatology，Guangzhou 510095，China Corresponding author:LUO Quan，E-mail:luoquan666@126.com

Objective:To detect serum level of IL-35 in the patients with psoriasis vulgaris.M ethods: Serum level of IL-35 was measured by double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)in 30 patients with psoriasis vulgaris.Results:The serum level of IL-35 was significantly higher than that in normal controls(P＜0.01)，and there was significant difference between the active stage and the resting stage of the disease(P＜0.05).The serum level of IL-35 was negatively correlated to PASI score. Conclusion:The IL-35 may play an important rale in the pathogenesis of psoriasis vulgaris.

psoriasis；IL-35

廣東省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科研基金(編號:A2013545)廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科研項目(編號:20131A011129)

廣州市皮膚病防治所，廣東廣州，510095

羅權(quán)，E-mail:luoquan666@126.com