• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    谷氨酸對(duì)脂多糖刺激斷奶仔豬腸道能量代謝的影響

    2016-12-01 09:31:46王秀英吳歡聽朱惠玲劉玉蘭

    秦 琴 王秀英 吳歡聽 朱惠玲 劉玉蘭

    (武漢輕工大學(xué)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢430023)

    ?

    谷氨酸對(duì)脂多糖刺激斷奶仔豬腸道能量代謝的影響

    秦 琴 王秀英 吳歡聽 朱惠玲 劉玉蘭*

    (武漢輕工大學(xué)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢430023)

    本試驗(yàn)旨在研究谷氨酸(Glu)對(duì)脂多糖(LPS)刺激斷奶仔豬腸道能量代謝的影響。選擇24頭斷奶仔豬分為4個(gè)組,分別為對(duì)照組、LPS組、LPS+1.0% Glu組和LPS+2.0% Glu組,每組6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)1頭豬。于試驗(yàn)第28天,試驗(yàn)組豬注射100 μg/kg BW LPS,對(duì)照組注射等量的生理鹽水,4 h后屠宰,取腸道樣品待測(cè)。結(jié)果表明:1)與對(duì)照組相比,LPS刺激導(dǎo)致斷奶仔豬空腸三磷酸腺苷(ATP)、腺苷酸池(TAN)含量和能荷(EC)顯著降低(P<0.05),一磷酸腺苷(AMP)/ATP值顯著升高(P<0.05);與LPS組相比,LPS+2.0% Glu組顯著提高了空腸ATP、二磷酸腺苷(ADP)和TAN含量(P<0.05)。2)與對(duì)照組相比,LPS刺激導(dǎo)致斷奶仔豬回腸檸檬酸合成酶和α-酮戊二酸脫氫酶系活性極顯著降低(P<0.01),空腸α-酮戊二酸脫氫酶系活性有降低趨勢(shì)(P=0.092);與LPS組相比,除LPS+1.0% Glu組回腸檸檬酸合成酶活性顯著降低(P<0.05)外,Glu對(duì)空腸和回腸三羧酸循環(huán)關(guān)鍵酶活性無顯著影響(P>0.05)。3)與對(duì)照組相比,LPS刺激導(dǎo)致空腸過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PGC1α)及回腸沉默信號(hào)調(diào)控因子1(Sirt1)和PGC1α的mRNA表達(dá)量極顯著降低(P<0.01);與LPS組相比,LPS+2.0% Glu組有提高空腸PGC1α(P=0.067)和回腸Sirt1(P=0.053)mRNA表達(dá)量的趨勢(shì),LPS+1.0% Glu組有提高回腸Sirt1 mRNA表達(dá)量的趨勢(shì)(P=0.070)。由此可見,Glu可以改善LPS刺激導(dǎo)致的腸道能量損耗狀態(tài)。

    谷氨酸;脂多糖;斷奶仔豬;腸道;能量代謝

    腸道是機(jī)體消化吸收的主要場(chǎng)所,也是阻止外界病原體和致癌物等有害物質(zhì)對(duì)機(jī)體造成損害的生理屏障[1]。腸道需要很高的能量來維持其健康和功能[2]。而在應(yīng)激狀態(tài)下,機(jī)體能量代謝紊亂,三磷酸腺苷(ATP)含量明顯降低,細(xì)胞功能障礙或死亡,導(dǎo)致腸道結(jié)構(gòu)功能的損傷[3]。脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌膜結(jié)構(gòu)物質(zhì)。LPS刺激可導(dǎo)致能量供應(yīng)不足,引起腸道損傷[4]。谷氨酸(Glu)是一種酸性非必需氨基酸,對(duì)幼年動(dòng)物的生長發(fā)育十分重要,與腸黏膜的生長代謝息息相關(guān)[5-6]。Stoll等[7]研究發(fā)現(xiàn),飼糧中90% Glu可在豬腸道中被代謝,是腸道主要的能源物質(zhì)。Glu的碳骨架分解后可形成α-酮戊二酸,α-酮戊二酸可以進(jìn)入三羧酸(TCA)循環(huán)氧化分解產(chǎn)生能量[8]。另外,Glu是精氨酸家族氨基酸,可以轉(zhuǎn)化為該家族其他氨基酸,如天冬氨酸、谷氨酰胺和精氨酸等,進(jìn)一步在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮作用[9]。但是,目前關(guān)于Glu在腸道能量代謝方面的研究很少,且其發(fā)揮作用的分子機(jī)理尚不清楚。因此,本試驗(yàn)通過給斷奶仔豬注射LPS建立免疫應(yīng)激模型[10],研究Glu對(duì)斷奶仔豬腸道能量代謝的影響,旨在為Glu緩解LPS刺激導(dǎo)致的斷奶仔豬腸道損傷提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    L-Glu:有效成分>99.1%,武漢阿米諾科技有限公司提供。

    L-丙氨酸:有效成分>99.5%,武漢阿米諾科技有限公司提供。

    LPS:大腸桿菌血清型O55:B5,Sigma公司提供,注射時(shí)用生理鹽水溶解,配成濃度500 μg/mL。注射時(shí)按照0.2 mL/kg BW(即100 μg/kg BW)進(jìn)行處理。

    1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì)

    選擇24頭健康、體況相近[平均體重(7.02±0.21) kg]的杜×長×大斷奶仔豬,按體重相近原則隨機(jī)分為4組,每組6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)1頭豬。試驗(yàn)采用單因子設(shè)計(jì),4個(gè)組分別為:1)對(duì)照組(生理鹽水+基礎(chǔ)飼糧);2)LPS組(LPS+基礎(chǔ)飼糧);3)LPS+1.0% Glu組(LPS+基礎(chǔ)飼糧+1.0% Glu);4)LPS+2.0% Glu組(LPS+基礎(chǔ)飼糧+2.0% Glu)。參照NRC(1998)仔豬營養(yǎng)需要量配制基礎(chǔ)飼糧,其組成及營養(yǎng)水平見表1。各組的飼糧用丙氨酸進(jìn)行等氮處理。試驗(yàn)期為28 d。在正式試驗(yàn)第28天,試驗(yàn)組豬注射100 μg/kg BW LPS,對(duì)照組豬注射等量的生理鹽水。

    1.3 飼養(yǎng)管理

    試驗(yàn)在動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。每個(gè)豬欄的大小為1.20 m×1.10 m。豬舍的室內(nèi)溫度維持在25~27 ℃。試驗(yàn)采用粉料飼喂,飼養(yǎng)過程中讓仔豬自由采食和飲水,并定期進(jìn)行免疫和驅(qū)蟲。

    1.4 腸道樣品采集與處理

    試驗(yàn)第28天,注射LPS或生理鹽水4 h后,屠宰仔豬,剖開腹腔從腸系膜處取下小腸。在空腸和回腸各段中部各取10 cm左右的一段,然后立即放入冰塊中。將10 cm腸段用剪刀沿腸系膜縱向剖開,4 ℃生理鹽水輕輕沖洗干凈,然后使用濾紙吸干水分,再用載玻片輕輕刮取腸黏膜,分裝在1.5 mL無菌凍存管中,并立即放入液氮中速凍,后轉(zhuǎn)入-80 ℃冰箱中凍存。

    表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

    1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 Premix provided the following per kg of the diet:VA 12 000 IU,VB11.5 mg,核黃素 riboflavin 4 mg,煙酸 nicotinic acid 40 mg,氯化膽堿 choline chloride 400 mg,葉酸 folic acid 700 μg,VB63 mg,VB1218 μg,VD32 500 IU,VE 30 IU,VK33 mg,泛酸 pantothenic acid 15 mg,生物素 biotin 100 μg,Mn 20 mg,Se 0.36 mg,Zn 80 mg,Cu 25 mg,F(xiàn)e 83 mg,I 0.48 mg。

    2)消化能為計(jì)算值,其余為實(shí)測(cè)值。DE was a calculated value, while the others were measured values.

    1.5 檢測(cè)指標(biāo)及方法

    1.5.1 小腸黏膜腺苷酸含量測(cè)定

    采用反相高效液相色譜法測(cè)定。將腸黏膜從液氮中取出,稱取0.1~0.2 g組織,加入2 mL預(yù)冷的1.5 mol/L高氯酸,冰浴勻漿,4 ℃、3 000 r/min離心5 min。取上清液1 mL,緩慢加入0.4 mL 2 mol/L碳酸鉀溶液中和,4 ℃、3 000 r/min再離心5 min,取上清液-80 ℃凍存待測(cè)。

    采用Waters Breeze高效液相色譜系統(tǒng)。色譜柱采用Waters XTerra MS C18(5 μm×4.6 mm×150 mm);流動(dòng)相:50 mmol/L K2HPO4-KH2PO4緩沖液:色譜級(jí)甲醇(體積比)=77∶23,用磷酸調(diào)至pH=7.0;流速:1.0 mL/min;柱溫:20 ℃;紫外檢測(cè)器,檢測(cè)波長:260 nm;進(jìn)樣量:10 μL。采用外標(biāo)法定量測(cè)定ATP、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)含量。標(biāo)準(zhǔn)品也在相同的色譜條件下測(cè)定。

    腺苷酸池(TAN)=ATP+ADP+AMP;

    能荷(EC)=(ATP+1/2 ADP)/

    (ATP+ADP+AMP)。

    1.5.2 小腸黏膜檸檬酸合酶、α-酮戊二酸脫氫酶系和異檸檬酸脫氫酶活性測(cè)定

    酶活性的測(cè)定參照Pi等[11]的方法,采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法進(jìn)行測(cè)定。豬檸檬酸合酶(#45126)、α-酮戊二酸脫氫酶系(#45157)和異檸檬酸脫氫酶(#45234)ELISA檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)廠家為上海源葉生物科技有限公司。

    1.5.3 小腸黏膜能量代謝相關(guān)信號(hào)分子mRNA表達(dá)量的測(cè)定

    基因mRNA表達(dá)量的測(cè)定參照陳逢[12]的方法,采用實(shí)時(shí)定量PCR(real-time PCR)法測(cè)定,試劑均購自大連寶生物工程有限公司。根據(jù)已發(fā)表的豬的基因序列,利用Primer premier 6.0軟件設(shè)計(jì)real-time PCR引物(表2),并由大連寶生物工程有限公司合成。本試驗(yàn)中,各基因擴(kuò)增效率均接近100%。另外,本試驗(yàn)以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參基因,各基因mRNA表達(dá)量采用2-ΔΔCT相對(duì)定量法計(jì)算[13]。各基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量通過歸一化法,以相對(duì)于對(duì)照組的表達(dá)量表示。

    表2 基因的引物序列

    1.6 統(tǒng)計(jì)分析

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和LSD多重比較。統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。以P≤0.01為差異極顯著標(biāo)準(zhǔn),0.01

    2 結(jié)果與分析

    2.1 Glu對(duì)LPS刺激斷奶仔豬腸道黏膜腺苷酸含量的影響

    由表3可知,與對(duì)照組相比,LPS組空腸ATP、TAN含量和EC顯著降低(P<0.05),AMP/ATP值顯著升高(P<0.05);與LPS組相比,LPS+2.0% Glu組空腸ATP、ADP和TAN含量顯著升高(P<0.05)。

    表3 Glu對(duì)LPS刺激斷奶仔豬腸道黏膜腺苷酸含量的影響

    P1:對(duì)照組vs. LPS組 Control group vs. LPS group;P2:LPS組vs. LPS+1.0% Glu組 LPS group vs. LPS+1.0% Glu group;P3:LPS組vs. LPS+2.0% Glu組 LPS group vs. LPS+2.0% Glu group。下表同 The same as below。

    2.2 Glu對(duì)LPS刺激斷奶仔豬腸道黏膜TCA循環(huán)關(guān)鍵酶活性的影響

    由表4可知,與對(duì)照組相比,LPS組回腸檸檬酸合成酶和α-酮戊二酸脫氫酶系活性極顯著降低(P<0.01),空腸α-酮戊二酸脫氫酶系活性有降

    低趨勢(shì)(P=0.092);與LPS組相比,除LPS+1.0% Glu組回腸檸檬酸合成酶活性顯著降低(P<0.05)外,飼糧添加Glu對(duì)LPS刺激斷奶仔豬空腸和回腸TCA循環(huán)關(guān)鍵酶活性均無顯著影響(P>0.05)。

    表4 Glu對(duì)LPS刺激斷奶仔豬腸道黏膜TCA循環(huán)關(guān)鍵酶活性的影響

    2.3 Glu對(duì)LPS刺激斷奶仔豬腸道能量黏膜代謝相關(guān)信號(hào)分子mRNA表達(dá)量的影響

    由表5可知,與對(duì)照組相比,LPS組空腸過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PGC1α)及回腸沉默信號(hào)調(diào)控因子1(Sirt1)和PGC1α的mRNA表達(dá)量極顯著降低(P<0.01);與LPS組相比,LPS+2.0% Glu組空腸PGC1α(P=0.067)和回腸Sirt1(P=0.053)的mRNA表達(dá)量有升高趨勢(shì),LPS+1.0% Glu組回腸Sirt1的mRNA表達(dá)量有升高趨勢(shì)(P=0.070)。

    表5 Glu對(duì)LPS刺激斷奶仔豬腸道黏膜能量代謝相關(guān)信號(hào)分子mRNA表達(dá)量的影響

    3 討 論

    ATP是一種不穩(wěn)定的高能化合物,它的3個(gè)磷酸基團(tuán)中包含2個(gè)高能分子磷酸酐鍵,水解時(shí)轉(zhuǎn)化成ADP釋放出大量能量,是各種機(jī)體活動(dòng)的直接能量來源,當(dāng)?shù)孜锎x產(chǎn)生ATP的速度未能趕上其利用速度,就會(huì)增加細(xì)胞內(nèi)ADP的濃度,2分子的ADP在腺苷酸激酶作用下轉(zhuǎn)化成1分子ATP和1分子AMP[8]。TAN是一個(gè)能量媒介系統(tǒng),其大小反映了線粒體的氧化呼吸活性和生成高能磷酸化合物的能力,同時(shí)反映了細(xì)胞的能量儲(chǔ)備[14]。EC反映了高能磷酸鍵在ATP、ADP和AMP之間的相互轉(zhuǎn)換,EC的正常維持取決于細(xì)胞高能化合物合成和分解之間的動(dòng)態(tài)平衡,細(xì)胞能量產(chǎn)生不足或消耗增加時(shí),均會(huì)影響EC水平[15]。ATP的產(chǎn)生減少或利用增加,會(huì)使細(xì)胞內(nèi)AMP/ATP值增加,而AMP/ATP值的增加可激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),從而引起一系列反應(yīng)來恢復(fù)細(xì)胞內(nèi)的能量平衡[16]。

    本試驗(yàn)中LPS刺激導(dǎo)致斷奶仔豬空腸ATP、TAN含量和EC顯著降低,AMP/ATP值顯著升高,這與Pi等[11]研究結(jié)果類似。王巖等[17]研究表明,LPS刺激可以影響線粒體內(nèi)細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng),阻礙呼吸鏈的傳遞,導(dǎo)致能量合成代謝障礙,ATP合成減少。本試驗(yàn)中,飼糧中添加2.0% Glu后,空腸ATP、ADP和TAN含量顯著升高。Watford[18]研究表明,Glu的代謝為腸道完整性和功能維持提供了大量的ATP。Blachier等[19]研究表明,Glu在腸上皮細(xì)胞內(nèi)谷氨酸脫氫酶的作用下被氧化,首先與草酰乙酸通過轉(zhuǎn)氨基作用產(chǎn)生α-酮戊二酸和天冬氨酸,α-酮戊二酸進(jìn)入線粒體參加TCA循環(huán),進(jìn)而產(chǎn)生ATP。以上結(jié)果及分析表明,Glu可緩解LPS刺激導(dǎo)致的能量代謝障礙,促進(jìn)能量生成,增加能量代謝能力和儲(chǔ)備能力。

    檸檬酸合成酶、異檸檬酸脫氫酶和α-酮戊二酸脫氫酶系是TCA循環(huán)的3個(gè)限速酶,調(diào)節(jié)著生物體的能量代謝和生物合成等重要生命活動(dòng)[20]。檸檬酸合成酶可決定乙酰輔酶A進(jìn)入TCA循環(huán)的速率,是研究能量代謝狀態(tài)的重要指標(biāo)[21]。異檸檬酸脫氫酶存在于線粒體和胞質(zhì)中,催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸[22]。α-酮戊二酸脫氫酶系存在于線粒體基質(zhì)內(nèi),可催化α-酮戊二酸酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A,同時(shí)生成還原型輔酶Ⅰ(NADH)[23]。

    本試驗(yàn)中LPS刺激導(dǎo)致空腸α-酮戊二酸脫氫酶系活性有降低趨勢(shì),回腸檸檬酸合成酶和α-酮戊二酸脫氫酶系活性極顯著降低,這與石海峰[24]的研究一致。飼糧添加Glu對(duì)檸檬酸合成酶、異檸檬酸脫氫酶和α-酮戊二酸脫氫酶系活性無顯著影響,其原因一方面可能是因?yàn)轱暭Z中添加Glu后腸道ATP含量顯著升高,而這3種TCA循環(huán)限速酶含量受到ATP的抑制[20];另一方面,Glu可能不是通過影響酶活性來提高TCA循環(huán)的反應(yīng)速率,而是通過轉(zhuǎn)化為TCA循環(huán)的中間體α-酮戊二酸,進(jìn)而改善腸道的能量代謝水平。研究表明,α-酮戊二酸可以作為腸黏膜能量代謝底物[25],飼糧添加α-酮戊二酸有助于改善LPS刺激后腸黏膜細(xì)胞的能量代謝[26]。

    AMPK是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,廣泛存在于真核細(xì)胞生物中,能感知細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的改變,維持機(jī)體的能量代謝平衡[27]。當(dāng)ATP的產(chǎn)生減少或利用增加,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)AMP/ATP值增加時(shí),AMPK可被激活,從而有助于ATP再生和抑制ATP消耗,維持能量平衡[28]。此外,AMPK的活化可激活其下游Sirt1活性[29]。Sirt1是一種核蛋白,能通過增強(qiáng)肝臟糖異生、降低脂質(zhì)積累和參與胰腺的胰島素分泌使機(jī)體ATP的含量上升[30]。同時(shí),Sirt1可介導(dǎo)其下游靶點(diǎn)PGC1α發(fā)生去乙?;?,影響PGC1α的活性,最終調(diào)控線粒體和脂質(zhì)代謝基因[31]。而PGClα是一種核轉(zhuǎn)錄輔激活因子,參與調(diào)節(jié)線粒體生物反應(yīng)和葡萄糖脂肪代謝等生物反應(yīng)[32]。

    本試驗(yàn)中,LPS刺激導(dǎo)致斷奶仔豬空腸PGC1α及回腸Sirt1和PGC1α的mRNA表達(dá)量極顯著降低。羅麗麗等[33]研究發(fā)現(xiàn),LPS誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡過程中Sirt1的表達(dá)受到抑制。而Glu緩解了LPS刺激導(dǎo)致的空腸PGC1α和回腸Sirt1的mRNA表達(dá)量的降低,表明Glu可以調(diào)節(jié)腸道能量代謝相關(guān)信號(hào)通路。Glu是精氨酸家族氨基酸,可以轉(zhuǎn)化為該家族其他氨基酸,如天冬氨酸、谷氨酰胺和精氨酸等,進(jìn)一步在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮作用[9]。Kang等[34]研究表明,飼糧添加天冬氨酸可增加肝臟Sirt1的mRNA表達(dá)量。Glu可能可以通過轉(zhuǎn)化為天冬氨酸來提高腸道Sirt1的mRNA表達(dá)量,進(jìn)一步激活下游PGC1α,從而促進(jìn)ATP的產(chǎn)生。本試驗(yàn)中LPS刺激和飼糧添加Glu對(duì)空腸和回腸AMPKα1和AMPKα2的mRNA表達(dá)量均無顯著影響,其原因可能是試驗(yàn)中仔豬腸道能量變化幅度未能達(dá)到AMPK感受范圍。有研究表明,細(xì)胞中ATP的變化水平需達(dá)到一定的閾值才能使AMPK活化[35]。

    4 結(jié) 論

    Glu緩解了LPS刺激導(dǎo)致的斷奶仔豬腸道能量代謝障礙,其可能是通過影響腸道能量代謝相關(guān)調(diào)控因子Sirt1和PGC1α的mRNA表達(dá)量,進(jìn)而促進(jìn)腸黏膜能量的產(chǎn)生。

    [1] 楊鳳娟,王春林,伍少欽,等.仔豬腸道健康的營養(yǎng)調(diào)控技術(shù)及其應(yīng)用[J].中國畜牧雜志,2015,51(18):54-61.

    [2] WANG Y J,LIU W,CHEN C,et al.Irradiation induced injury reduces energy metabolism in small intestine of Tibet minipigs[J].PLoS One,2013,8(3):e58970.

    [3] COYNE V E.The importance of ATP in the immune system of molluscs[J].Invertebrate Survival Journal,2011,8(1):48-55.

    [4] GIANNONE P J,NANKERVIS C A,RICHTER J M,et al.Prenatal lipopolysaccharide increases postnatal intestinal injury in a rat model of necrotizing enterocolitis[J].Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition,2009,48(3):276-282.

    [5] FAN M Z,MATTHEWS J C,ETIENNE N M P,et al.Expression of apical membraneL-glutamate transporters in neonatal porcine epithelial cells along the small intestinal crypt-villus axis[J].American Journal of Physiology:Gastrointestinal and Liver Physiology,2004,287(2):G385-G398.

    [6] WU G Y.Functional amino acids in nutrition and health[J].Amino Acids,2013,45(3):407-411.

    [7] STOLL B,BURRIN D G,HENRY J,et al.Substrate oxidation by the portal drained viscera of fed piglets[J].American Journal of Physiology:Endocrinology and Metabolism,1999,277(1):E168-E175.

    [8] 周順伍.動(dòng)物生物化學(xué)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2008:121-123.

    [9] WU G Y,BAZER F W,DAVIS T A,et al.Important roles for the arginine family of amino acids in swine nutrition and production[J].Livestock Science,2007,112(1/2):8-22.

    [10] LIU Y L,HUANG J J,HOU Y Q,et al.Dietary arginine supplementation alleviates intestinal mucosal disruption induced byEscherichiacolilipopolysaccharide in weaned pigs[J].British Journal of Nutrition,2008,100(3):552-560.

    [11] PI D A,LIU Y L,SHI H F,et al.Dietary supplementation of aspartate enhances intestinal integrity and energy status in weanling piglets after lipopolysaccharide challenge[J].The Journal of Nutritional Biochemistry,2014,25(4):456-462.

    [12] 陳逢.魚油通過TLR4和NOD信號(hào)通路對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的仔豬腸道、肝臟損傷和肌肉蛋白質(zhì)降解的調(diào)控作用[D].碩士學(xué)位論文.武漢:武漢輕工大學(xué),2013.

    [13] LIVAK K J,SCHMITTGEN T D.Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCTmethod[J].Methods,2001,25(4):402-408.

    [14] KADENBACH B.Regulation of respiration and ATP synthesis in higher organisms:hypothesis[J].Journal of Bioenergetics and Biomembranes,1986,18(1):39-54.

    [15] 付大波,王友煒,侯永清,等.α-酮戊二酸對(duì)脂多糖刺激斷奶仔豬肌肉能量代謝的影響[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,44(4):814-822.

    [16] 解雪芬,朱毅.AMPK與代謝綜合征[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2006,26(1):27-34.

    [17] 王巖,石冬梅,向瑞平,等.內(nèi)毒素對(duì)肉雞腸黏膜及肝線粒體復(fù)活體Ⅰ活性的影響及氨基胍的保護(hù)效應(yīng)[J].中國獸醫(yī)雜志,2012,48(7):14-16.

    [18] WATFORD M.Glutamine metabolism and function in relation to proline synthesis and the safety of glutamine and proline supplementation[J].The Journal of Nutrition,2008,138(10):2003S-2007S.

    [19] BLACHIER F,GUIHOT-JOUBREL G,VAUGELADE P,et al.Portal hyperglutamatemia after dietary supplementation with monosodium glutamate in pigs[J].Digestion,1999,60(4):349-357.

    [20] 史紅超,蘇鐵柱.三羧酸循環(huán)及其影響因素對(duì)運(yùn)動(dòng)能力的影響[J].遼寧體育科技,2011,33(3):45-47,50.

    [21] 李望,胡盛壽,魏英杰,等.心肌梗死對(duì)大鼠心肌能量代謝途徑中關(guān)鍵酶的影響及意義[J].中國分子心臟病學(xué)雜志,2008,8(5):277-280.

    [22] 朱國萍,黃恩啟,趙旵軍.NADP-異檸檬酸脫氫酶的結(jié)構(gòu)與功能[J].安徽師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2007,30(3):366-371.

    [23] 陸兆豐.線粒體異檸檬酸脫氫酶和α-酮戊二酸脫氫酶系活性與創(chuàng)傷性腦損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D].博士學(xué)位論文.上海:上海交通大學(xué),2007.

    [24] 石海峰.天冬氨酸對(duì)脂多糖刺激斷奶仔豬腸道損傷的調(diào)控作用[D].碩士學(xué)位論文.武漢:武漢輕工大學(xué),2013.

    [25] PIERZYNOWSKI S G,SJODIN A.Perspectives of glutamine and its derivatives as feed additives for farm animals[J].Journal of Animal and Feed Sciences,1998,7(1):79-91.

    [26] 劉堅(jiān),侯永清,丁斌鷹,等.α-酮戊二酸對(duì)脂多糖應(yīng)激仔豬腸黏膜能量代謝的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2009,21(6):892-896.

    [27] HARDIE D G.Minireview:the AMP-activated protein kinase cascade:the key sensor of cellular energy status[J].Endocrinology,2003,144(12):5179-5183.

    [28] EVANS A M,MUSTARD K J,WYATT C N,et al.Does AMP-activated protein kinase couple inhibition of mitochondrial oxidative phosphorylation by hypoxia to calcium signaling in O2-sensing cells?[J].Journal of Biological Chemistry,2005,280(50):41504-41511.

    [30] 張紅勝,周玥.AMPK,SIRT1與能量代謝[J].國際病理科學(xué)與臨床雜志,2009,29(3):202-206.

    [32] LIANG H Y,WARD W F.PGC-1α:a key regulator of energy metabolism[J].Advances in Physiology Education,2006,30(4):145-151.

    [33] 羅麗麗,劉振華,謝惠芳,等.SIRT1在脂多糖誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡中的作用[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2012,11(4):332-336.

    [34] KANG P,LIU Y L,ZHU H L,et al.The effect of aspartate on the energy metabolism in the liver of weanling pigs challenged with lipopolysaccharide[J].European Journal of Nutrition,2015,54(4):581-588.

    [35] WIJESEKARA N,TUNG A,THONG F,et al.Muscle cell depolarization induces a gain in surface GLUT4 via reduced endocytosis independently of AMPK[J].American Journal of Physiology,2006,290(6):E1276-E1286.

    *Corresponding author, professor, E-mail: yulanflower@126.com

    (責(zé)任編輯 田艷明)

    Effects of Glutamate on Intestinal Energy Metabolism in the Lipopolysaccharide-Challenged Weaned Piglets

    QIN Qin WANG Xiuying WU Huanting ZHU Huiling LIU Yulan*

    (Hubei Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science, Wuhan Polytechnic University, Wuhan 430023, China)

    This study was aimed to investigate the effects of glutamate (Glu) on intestinal energy metabolism in the lipopolysaccharide (LPS)-challenged weaned piglets. Twenty-four weaned pigs were assigned to four groups as control group, LPS group, LPS+1.0% Glu group and LPS+2.0% Glu group with 6 replicates each and 1 pig in per replicate. On the 28thday of the trial, the piglets in the experimental groups were injected with 100 μg/kg BW LPS, and the piglets in the control group were injected with the same amount of 0.9% NaCl solution. At 4 h post-injection, pigs were slaughtered and intestinal samples were collected for further analysis. The results showed as follows: 1) LPS challenge significantly decreased ATP and total adenine nucleotide (TAN) contents and energy charge (P<0.05), but significantly increased the ratio of AMP to ATP (P<0.05) in jejunum compared with the control group; LPS+2.0% Glu group significantly increased the contents of ATP, ADP and TAN (P<0.05) in jejunum compared with LPS group. 2) Compared with the control group, LPS challenge had a tendency to decrease the alpha-oxoglutarate dehydrogenase complex activity (P=0.092) in jejunum and extremely significantly decreased the activities of citrate synthase and alpha-oxoglutarate dehydrogenase complex (P<0.01) in ileum; compared with LPS group, Glu had no significant effects on the activities of tricarboxylic acid cycle key enzymes (P>0.05) in jejunum and ileum, except for the citrate synthase activity in ileum was significantly reduced in LPS+1.0% Glu group (P<0.05). 3) LPS challenge extremely significantly decreased the mRNA expressions of peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α (PGC1α) in jejunum and silent information regulator 1 (Sirt1) andPGC1αin ileum (P<0.01) compared with the control group; compared with LPS group, LPS+2.0% Glu group had a tendency to increase the mRNA expressions ofPGC1αin jejunum (P=0.067) andSirt1 in ileum (P=0.053), while LPS+1.0% Glu group had a tendency to increase theSirt1 mRNA expression in ileum (P=0.070). These results indicate that dietary supplementation of Glu can improve energy loss status in LPS injured intestine.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(11):3618-3625]

    glutamate; lipopolysaccharide; weaned piglets; intestine; energy metabolism

    2016-05-03

    湖北省教育廳優(yōu)秀中青年科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(T201508)

    秦 琴(1992—),女,湖北仙桃人,碩士研究生,從事豬營養(yǎng)生理機(jī)能調(diào)控的研究。E-mail: 944103932@qq.com

    *通信作者:劉玉蘭,教授,碩士生導(dǎo)師,E-mail: yulanflower@126.com

    10.3969/j.issn.1006-267x.2016.11.031

    S828

    A

    1006-267X(2016)11-3618-08

    极品教师在线免费播放| 中文字幕人妻丝袜制服| 日韩大码丰满熟妇| 国产男女内射视频| 在线观看舔阴道视频| 国产日韩欧美视频二区| 新久久久久国产一级毛片| a级片在线免费高清观看视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | av线在线观看网站| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 极品教师在线免费播放| 十分钟在线观看高清视频www| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久久久网色| 丁香欧美五月| 欧美激情高清一区二区三区| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产av国产精品国产| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 丝袜人妻中文字幕| www.熟女人妻精品国产| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产不卡一卡二| 中文字幕人妻丝袜制服| 两人在一起打扑克的视频| 青青草视频在线视频观看| 欧美精品亚洲一区二区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 十八禁网站免费在线| 成人亚洲精品一区在线观看| 中国美女看黄片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 最新的欧美精品一区二区| 男人操女人黄网站| 成人国语在线视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲伊人色综图| 精品人妻在线不人妻| 国产精品一区二区在线观看99| 成人手机av| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产av又大| 国产男女内射视频| 女同久久另类99精品国产91| av欧美777| 亚洲av电影在线进入| 亚洲精品自拍成人| 伦理电影免费视频| 国产视频一区二区在线看| 国产精品久久久av美女十八| 色94色欧美一区二区| 视频在线观看一区二区三区| 欧美黄色淫秽网站| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 18禁观看日本| 岛国毛片在线播放| bbb黄色大片| 免费在线观看日本一区| 久久久久久人人人人人| 久久中文看片网| 中国美女看黄片| 精品欧美一区二区三区在线| 热99国产精品久久久久久7| 97在线人人人人妻| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 99久久精品国产亚洲精品| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产黄色免费在线视频| 日日爽夜夜爽网站| 妹子高潮喷水视频| 成人免费观看视频高清| 十分钟在线观看高清视频www| 久久人妻av系列| 日韩中文字幕欧美一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 日本av免费视频播放| 久久青草综合色| 亚洲全国av大片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 三级毛片av免费| 亚洲av片天天在线观看| 精品亚洲成国产av| 母亲3免费完整高清在线观看| 午夜久久久在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 18禁美女被吸乳视频| av网站在线播放免费| 不卡av一区二区三区| 无遮挡黄片免费观看| 日本a在线网址| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 中文字幕av电影在线播放| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产在线免费精品| 国产97色在线日韩免费| 女性被躁到高潮视频| 一区福利在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| av国产精品久久久久影院| 亚洲全国av大片| 久久中文字幕一级| 成人18禁在线播放| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久9热在线精品视频| 美女福利国产在线| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲五月婷婷丁香| 精品国产乱子伦一区二区三区| 动漫黄色视频在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 极品少妇高潮喷水抽搐| 欧美激情高清一区二区三区| 精品第一国产精品| www.自偷自拍.com| 国产男女超爽视频在线观看| 成人影院久久| 乱人伦中国视频| 亚洲人成77777在线视频| aaaaa片日本免费| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 在线观看免费视频网站a站| 1024视频免费在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩人妻精品一区2区三区| 免费av中文字幕在线| 亚洲中文字幕日韩| 久久中文字幕人妻熟女| 久久午夜综合久久蜜桃| 男人舔女人的私密视频| 大陆偷拍与自拍| 老司机午夜福利在线观看视频 | 一夜夜www| 多毛熟女@视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产午夜精品久久久久久| 两人在一起打扑克的视频| 欧美日韩精品网址| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 午夜福利一区二区在线看| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲国产看品久久| tocl精华| www日本在线高清视频| 午夜福利乱码中文字幕| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 精品久久久精品久久久| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美日韩福利视频一区二区| 少妇 在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 99国产精品一区二区三区| 亚洲第一青青草原| 精品久久久久久电影网| 女同久久另类99精品国产91| 国产伦人伦偷精品视频| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 免费观看a级毛片全部| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久天堂一区二区三区四区| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 成人黄色视频免费在线看| 一区二区三区乱码不卡18| 一区二区日韩欧美中文字幕| 在线观看免费午夜福利视频| 在线观看免费视频日本深夜| 黄频高清免费视频| 免费av中文字幕在线| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久精品91无色码中文字幕| 日日爽夜夜爽网站| h视频一区二区三区| av福利片在线| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 成年版毛片免费区| 久久国产精品大桥未久av| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲七黄色美女视频| 9色porny在线观看| 亚洲第一av免费看| 无人区码免费观看不卡 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 精品国产国语对白av| av欧美777| 免费在线观看黄色视频的| av电影中文网址| 久热这里只有精品99| 午夜老司机福利片| 欧美日韩黄片免| 亚洲av日韩在线播放| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品一品国产午夜福利视频| 日韩大片免费观看网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产野战对白在线观看| 午夜福利在线观看吧| 午夜福利视频精品| 亚洲久久久国产精品| 亚洲精品乱久久久久久| 999久久久国产精品视频| 男女免费视频国产| 搡老熟女国产l中国老女人| 他把我摸到了高潮在线观看 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| 精品一区二区三卡| 桃花免费在线播放| 中文亚洲av片在线观看爽 | 国产一区二区在线观看av| 曰老女人黄片| 色94色欧美一区二区| 国产成人啪精品午夜网站| 丝瓜视频免费看黄片| 久久久久久久精品吃奶| 咕卡用的链子| 午夜福利一区二区在线看| 99久久国产精品久久久| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲少妇的诱惑av| 十八禁网站免费在线| 亚洲avbb在线观看| 精品亚洲成国产av| 一区二区av电影网| 一区二区三区激情视频| 亚洲黑人精品在线| 一本综合久久免费| 国产免费现黄频在线看| 国产精品久久电影中文字幕 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 中文字幕人妻熟女乱码| 水蜜桃什么品种好| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 在线播放国产精品三级| 免费少妇av软件| 免费在线观看黄色视频的| 欧美日韩av久久| 露出奶头的视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 性色avwww在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲国产欧美人成| 亚洲在线自拍视频| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲人与动物交配视频| 成人av一区二区三区在线看| 国产成人精品无人区| 国产精品野战在线观看| 天堂动漫精品| 成熟少妇高潮喷水视频| 日本五十路高清| 两性夫妻黄色片| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲男人的天堂狠狠| 91字幕亚洲| 免费观看的影片在线观看| www日本在线高清视频| or卡值多少钱| 国产伦精品一区二区三区四那| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 最近视频中文字幕2019在线8| 男女那种视频在线观看| 国产精品,欧美在线| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精华霜和精华液先用哪个| 免费在线观看亚洲国产| 午夜福利高清视频| 好男人在线观看高清免费视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美性猛交黑人性爽| 两个人看的免费小视频| 亚洲激情在线av| 免费看日本二区| 国产三级中文精品| 欧美日韩一级在线毛片| ponron亚洲| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 又大又爽又粗| 婷婷精品国产亚洲av| 午夜亚洲福利在线播放| 中文字幕av在线有码专区| 长腿黑丝高跟| 91老司机精品| www.999成人在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| av中文乱码字幕在线| 久久午夜亚洲精品久久| 婷婷精品国产亚洲av| а√天堂www在线а√下载| 美女被艹到高潮喷水动态| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲精品456在线播放app | 国产久久久一区二区三区| 丁香欧美五月| 久久久国产成人精品二区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 麻豆成人午夜福利视频| 国内精品美女久久久久久| 高清毛片免费观看视频网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 这个男人来自地球电影免费观看| 黄色成人免费大全| 夜夜爽天天搞| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| av欧美777| 成人三级做爰电影| 午夜a级毛片| 两人在一起打扑克的视频| 97碰自拍视频| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美日韩福利视频一区二区| 又粗又爽又猛毛片免费看| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲专区中文字幕在线| 三级毛片av免费| 1000部很黄的大片| 成人性生交大片免费视频hd| 成人国产一区最新在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产爱豆传媒在线观看| 99久久国产精品久久久| 91字幕亚洲| 可以在线观看的亚洲视频| 老汉色∧v一级毛片| 久久久色成人| 18禁观看日本| 国产视频内射| 搡老岳熟女国产| 首页视频小说图片口味搜索| 午夜免费成人在线视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品人妻1区二区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产欧美日韩一区二区精品| 两个人的视频大全免费| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久久久亚洲av毛片大全| 日韩有码中文字幕| 亚洲成人久久性| 国产精华一区二区三区| 亚洲精品在线美女| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲电影在线观看av| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲熟女毛片儿| 美女cb高潮喷水在线观看 | 长腿黑丝高跟| 免费观看精品视频网站| 国产精品一区二区三区四区久久| 怎么达到女性高潮| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品野战在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产1区2区3区精品| 国产成人福利小说| 久久精品国产综合久久久| 亚洲av电影在线进入| 91九色精品人成在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 搞女人的毛片| 国产成人精品无人区| 精品福利观看| 国产成人影院久久av| 久久精品91蜜桃| 久久久久国内视频| 日本黄色视频三级网站网址| 青草久久国产| 国产高清视频在线播放一区| 国产亚洲精品久久久com| av在线蜜桃| 亚洲国产色片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 99久久国产精品久久久| 一区二区三区高清视频在线| 三级毛片av免费| 久久精品人妻少妇| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美在线黄色| 色尼玛亚洲综合影院| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 在线播放国产精品三级| 丰满人妻一区二区三区视频av | 搞女人的毛片| 最近最新免费中文字幕在线| 国产视频一区二区在线看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 精品欧美国产一区二区三| 12—13女人毛片做爰片一| av女优亚洲男人天堂 | 成熟少妇高潮喷水视频| 婷婷六月久久综合丁香| 高清在线国产一区| 岛国视频午夜一区免费看| 两个人看的免费小视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 少妇的逼水好多| 成在线人永久免费视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品 国内视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 最近在线观看免费完整版| 久久精品人妻少妇| 91麻豆av在线| 黄片小视频在线播放| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久久国产a免费观看| 欧美高清成人免费视频www| 日本a在线网址| 黄色成人免费大全| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲专区中文字幕在线| 精品久久蜜臀av无| 黄色女人牲交| 亚洲在线观看片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产精品,欧美在线| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 久久国产乱子伦精品免费另类| av片东京热男人的天堂| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲精品美女久久av网站| 91九色精品人成在线观看| av视频在线观看入口| 国产视频一区二区在线看| 国产真实乱freesex| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产亚洲欧美98| 搡老岳熟女国产| 中文字幕最新亚洲高清| 变态另类丝袜制服| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 18美女黄网站色大片免费观看| 一区二区三区激情视频| 久久这里只有精品19| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产精品永久免费网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 黑人操中国人逼视频| 日本a在线网址| 国产亚洲av高清不卡| av女优亚洲男人天堂 | 高清在线国产一区| www.999成人在线观看| 中文资源天堂在线| 免费看十八禁软件| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日本黄色片子视频| 久久天堂一区二区三区四区| 中文字幕av在线有码专区| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美三级亚洲精品| 久久久久性生活片| 色综合亚洲欧美另类图片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品av久久久久免费| 激情在线观看视频在线高清| 99riav亚洲国产免费| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美一级a爱片免费观看看| a级毛片a级免费在线| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 成人无遮挡网站| 好男人电影高清在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 免费av毛片视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 露出奶头的视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品 国内视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 桃色一区二区三区在线观看| 99久久精品热视频| 中文字幕高清在线视频| a级毛片在线看网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产v大片淫在线免费观看| 99热只有精品国产| 99久久99久久久精品蜜桃| 精品久久久久久久末码| 日韩精品青青久久久久久| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美黄色片欧美黄色片| 中文资源天堂在线| 俺也久久电影网| 免费看a级黄色片| 日本三级黄在线观看| 免费高清视频大片| 欧美乱色亚洲激情| 性色avwww在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 午夜成年电影在线免费观看| 九色成人免费人妻av| 又黄又爽又免费观看的视频| 一本一本综合久久| 美女大奶头视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美三级亚洲精品| www国产在线视频色| 18禁国产床啪视频网站| 国产伦一二天堂av在线观看| a在线观看视频网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲av电影不卡..在线观看| 九色成人免费人妻av| 手机成人av网站| bbb黄色大片| 草草在线视频免费看| 亚洲中文日韩欧美视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日韩免费av在线播放| 特大巨黑吊av在线直播| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品国产高清国产av| 国产亚洲精品久久久com| 国产成人系列免费观看| 看免费av毛片| 久久亚洲真实| 18禁观看日本| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 极品教师在线免费播放| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 免费在线观看成人毛片| 97超视频在线观看视频| 无限看片的www在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 午夜福利在线观看吧| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产高清videossex| 久久中文字幕一级| 三级国产精品欧美在线观看 | 国产成年人精品一区二区| 无限看片的www在线观看| 麻豆国产av国片精品| 在线观看一区二区三区| 窝窝影院91人妻| 免费人成视频x8x8入口观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 久久久国产精品麻豆| 九九在线视频观看精品| 国产69精品久久久久777片 | 无限看片的www在线观看| 国产精品永久免费网站| 淫秽高清视频在线观看| 一级黄色大片毛片| 在线看三级毛片| 国产成年人精品一区二区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 午夜激情福利司机影院| 97超视频在线观看视频| 日韩精品中文字幕看吧| 熟女人妻精品中文字幕| 久久99热这里只有精品18| 99久久99久久久精品蜜桃| 成年人黄色毛片网站| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲国产欧美网| 日本一二三区视频观看| 丁香欧美五月| 国产精品电影一区二区三区| 夜夜爽天天搞| 97碰自拍视频| 欧美大码av| 岛国在线免费视频观看| 成人国产一区最新在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲精品色激情综合| 老司机在亚洲福利影院| 国产97色在线日韩免费| 国产午夜精品久久久久久| 国产黄片美女视频| 99久久精品国产亚洲精品| 久久精品影院6| 国产精品一区二区三区四区免费观看 |