RRM1和ERCC1在乳腺癌組織中的表達及臨床意義

楊 列，張建平

(1. 江蘇省溧陽市人民醫(yī)院，江蘇 溧陽 213300；2. 復旦大學附屬華山醫(yī)院，上海 200040)

?

RRM1和ERCC1在乳腺癌組織中的表達及臨床意義

楊 列1，張建平2

(1. 江蘇省溧陽市人民醫(yī)院，江蘇 溧陽 213300；2. 復旦大學附屬華山醫(yī)院，上海 200040)

目的 觀察RRM1和ERCC1在乳腺癌組織中的表達及相關(guān)性，并探討其臨床意義。方法 將50例乳腺癌患者納入研究。采用免疫組織化學方法檢測患者乳腺癌組織和癌旁組織中RRM1和ERCC1的表達情況并進行評分，進一步分析兩者之間的相關(guān)性以及與乳腺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 乳腺癌組織中RRM1和ERCC1的表達顯著高于癌旁組織(P均<0.05)，RRM1和ERCC1蛋白表達與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，且RRMl與ERCC1的陽性表達呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 RRM1和ERCC1在乳腺癌組織中高表達，且與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，兩者在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。

乳腺癌；ERCC1；RRM1；免疫組織化學

乳腺癌是婦女常見的惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已位居女性惡性腫瘤的首位[1]。目前，手術(shù)、放療、化療仍然是乳腺癌的主要治療手段。其中化療以其在手術(shù)前控制和縮小病灶、手術(shù)后防止復發(fā)轉(zhuǎn)移等特殊作用而在乳腺癌綜合治療中占有不可替代的地位。但是幾乎不可避免的化療耐藥一直是有效控制乳腺癌的瓶頸[2-3]。而多數(shù)腫瘤的發(fā)生和耐藥與DNA修復基因的修復能力密切相關(guān)，核苷酸還原酶M1亞基(ribonucleotide reduetase subunit MI,RRMl)和核苷酸切除修復交叉互補基因1(excision repair cross complementing, ERCCl)是DNA損傷修復系統(tǒng)中的兩個關(guān)鍵物質(zhì)。既往多項研究表明其蛋白表達水平與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，并可影響其對化療方案的敏感性[4-6]。迪吉等[7]研究表明RRM1和ERCC1同樣可預測晚期乳腺癌患者采用吉西他濱聯(lián)合順鉑化療方案的敏感性，提示其與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究擬檢測乳腺癌組織中RRM1和ERCC1的表達水平的變化，以探討兩者在乳腺癌組織中表達的差異性及其臨床意義。

1 臨床資料

1.1 標本來源 將2013年4月—2014年10月于復旦大學附屬華山醫(yī)院診治的50例乳腺癌患者納入研究?；颊呔惺中g(shù)切除治療，術(shù)后病理證實為乳腺癌。排除標準：合并有其他惡性腫瘤或一般情況差者；術(shù)后3個月內(nèi)死亡者。患者均為女性，年齡31～71(54.2±11.3)歲；其中TNM分期Ⅰ～Ⅱ期26例，Ⅲ～Ⅳ期24例。采集患者包括癌組織、癌旁組織的術(shù)后標本。

1.2 方法 采用Envision二步免疫組化染色法。RRMl 和ERCC1單克隆抗體及Envision二步法免疫組化檢測試劑盒(PV-6000)和DAB酶底物顯色試劑盒等相關(guān)試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。按Envision二步法免疫組化檢測試劑盒(PV-6000)說明操作，DAB顯色，蘇木精復染，已知的陽性對照片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。所有切片均采用同一批試劑完成。

1.3 結(jié)果判斷標準 在隨機雙盲的條件下，2名高年資病理科醫(yī)師對切片進行觀察，每張切片隨機選擇5個高倍鏡下視野(×400)，每個高倍鏡下視野計數(shù)200個細胞，共1 000個細胞，并取其平均數(shù)。根據(jù)目前應用較為廣泛的免疫組化計分標準判讀。①染色強度：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；②陽性細胞數(shù)：陽性細胞數(shù)≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。根據(jù)兩項得分的平均值判定，其中>1分判定為陽性，≤1分判定為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 20.0軟件進行分析，計數(shù)資料采用百分率(%)表示，2組間比較采用四格表2檢驗， RRM1與ERCC1表達的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 癌組織與癌旁組織中RRM1和ERCC1蛋白的表達情況癌組織中RRM1陽性26例(52%)，陰性24例(48%)；ERCC1陽性27例(54%)，陰性23例(46%)。癌旁組織中RRM1陽性8例(16%)，陰性42例(84%)；ERCC1陽性9例，陰性41例(82%)。癌組織中ERCC1和RRM1陽性表達率均明顯高于癌旁組織(P均<0.05)。

2.2 RRM1和ERCC1蛋白表達與乳腺癌患者臨床病理關(guān)系 RRM1和ERCC1蛋白在乳腺癌組織中的表達與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P均<0.05)。TNM分期越高，RRM1和ERCC1蛋白表達越高；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者，RRM1和ERCC1蛋白表達也增高。見表1。

2.3 RRM1和ERCC1蛋白在乳腺癌組織中表達的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,乳腺癌組織中RRM1與ERCC1的陽性表達呈正相關(guān)(P<0.05)。見表2。

3 討 論

DNA損傷在腫瘤的進展過程中扮演重要的角色， DNA損傷后可促使機體損傷修復系統(tǒng)的激活。DNA損傷修復主要是通過核苷酸切除修復途徑實現(xiàn)，ERCC1是核苷酸剪切修復家族中的重要成員之一，研究表明ERCC1高表達可使腫瘤停滯在G2/M期，從而使細胞的損傷DNA在短時間內(nèi)得到修復，并導致其對順鉑等藥物耐藥[8]。RRM1是核苷酸還原酶的亞結(jié)構(gòu)，而核糖核苷酸還原成脫氧核糖核苷酸是DNA合成的重要環(huán)節(jié)，同時RRM1常被認為可代表核苷酸切除修復途徑的功能狀況。RRM1提供的核苷酸可及時填補其他基因?qū)⒉糠质軗p的DNA切除后留下的空缺[9-10]。

表1 RRM1和ERCC1蛋白與乳腺癌患者的臨床病理關(guān)系 例(%)

表2 RRM1和ERCC1蛋白在乳腺癌組織中表達的相關(guān)性 例

本研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌組織中ERCC1和RRM1表達水平均顯著高于癌旁正常組織，與既往研究所得結(jié)果十分一致[7]。然而相較于前述研究，筆者進一步發(fā)現(xiàn)ERCC1和RRM1在TNM分期更高的癌組織中和出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中均有明顯的高表達，且兩種蛋白之間的表達呈明顯的正相關(guān)。分析出現(xiàn)這一現(xiàn)象可能與如下原因有關(guān)：①ERCC1或RRM1的高表達可能提示其腫瘤細胞具有更強的侵襲能力，如RRM1就被證明參與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[11]。而TNM分期越高、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織，其腫瘤的侵襲能力則越強，故ERCC1或RRM1呈高表達。②既往由于各種檢測手段均在蛋白水平檢測，而較少在DNA水平檢測，因此如出現(xiàn)TNM分期變高或者淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移往往意味著其DNA水平表達的明顯增強，進而在核酸水平影響ERCC1或RRM1蛋白的表達，提高檢測的陽性率。

本研究結(jié)果表明ERCC1或RRM1蛋白在乳腺癌組織中的表達的與乳腺癌的進展有一定的關(guān)聯(lián)。但本研究仍有以下不足之處：①本研究樣本數(shù)較少，且僅限于手術(shù)后標本；②本研究未能在mRNA水平上分析基因表達的差異，因此基因表達的差異是否一致不得而知；③本研究暫未對患者行追蹤隨訪并行生存分析，其對預后的影響是否存在相同的差異并不明朗。由于存在上述的不足之處，以后的研究有必要進一步擴大樣本量，并進行完善的生存分析，使研究結(jié)果更加可信，更好地指導臨床。

[1] 袁磊,李伯和,時冉冉,等. 沉默JAG1基因?qū)θ巳橄侔㎝DA-MB-231細胞增殖和凋亡的影響[J]. 中國病理生理雜志,2014,30(2):262-267

[2] Leng XF,Chen MW,Xian L,et al. Combined analysis of mRNA expression of ERCC1,BAG-1,BRCA1,RRM1 and TUBB3 to predict prognosis in patients with non-small cell lung cancer who received adjuvant chemotherapy[J]. J Exp Clin Cancer Res,2012,23(31):23-25

[3] Roth JA,Carlson JJ. Prognostic Role of ERCC1 in Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer:A Systematic Review and Meta-Analysis[J]. Clin Lung Cancer,2011,12(6):393-401

[4] 陳佳，何松，張曉東，等. 依據(jù) ERCC1及RRM1對晚期非小細胞肺癌實施個體化治療的隨機對照臨床研究[J]. 實用臨床醫(yī)藥雜志，2012，16(9)：21-24

[5] 李培，康曉征，陳克能,等. ERCC1、RRM1和TS在非小細胞肺癌中的臨床意義[J]. 中國肺癌雜志，2014，17(6)：496-500

[6] 郭珺，王哲海，劉琳,等. 非小細胞肺癌組織ERCC1和RRM1基因表達及其對預后影響探討[J]. 中華腫瘤防治雜志，2014，21(20)：1594-1597

[7] 迪吉,趙君慧,李國元,等. 晚期乳腺癌患者ERCC1、RRM1表達與吉西他濱聯(lián)合順鉑化療療效[J]. 青海醫(yī)學院學報,2012,33(3):182-185

[8] 冷雪峰，王革平. ERCC1、RRM1在非小細胞肺癌臨床中的應用進展[J/CD]. 中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2013，7(20)：9269-9271

[9] 劉芷寧，劉馨. 非小細胞肺癌RRM1、ERCC1的表達及對含鉑化療方案預后的影響[J]. 重慶醫(yī)學，2014，43(9)：1072-1074

[10] Gong W,Zhang X,Wu J,et al. RRM1 expression and clinical outcome of gemcitabine-conta-ining chemotherapy for advanced non-small-cell lung cancer:A meta-analysis[J]. Lung Cancer,2 012,75(3):374-380

[11] Olaussen KA,Dunant A,Fouret P,et al. DNA repair by ERCC1in non-small-cell lung cancer and cisplatin-based adjuvantchemotherapy[J]. N Engl J Med,2006,355(10):983-991

上海市衛(wèi)生局青年科研項目(2011144)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.33.014

R737.9

B

1008-8849(2016)33-3689-02

2016-03-05