溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的作用機(jī)制探討

沈曉婷，張真真，萬貴平，鎖漉萱

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210028；2.江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京 210029)

?

溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的作用機(jī)制探討

沈曉婷1，2，張真真1，2，萬貴平1，2，鎖漉萱1，2

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210028；2.江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京 210029)

目的 探討溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的作用機(jī)制。方法 選擇異位囊腫直徑>3 cm的腎虛血瘀型卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫手術(shù)患者30例作為治療組，于術(shù)前口服溫腎消癥湯治療3個(gè)月；選取卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫手術(shù)患者(未經(jīng)治療)15例作為空白對照組；手術(shù)行子宮肌瘤剝除患者14例作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定不同組腹腔液中TNF-α、TGF-β1的表達(dá)水平并進(jìn)行比較。結(jié)果 治療組、空白對照組中TNF-α、TGF-β1的表達(dá)水平均明顯高于對照組(P均<0.01)，治療組中表達(dá)水平明顯低于空白對照組(P<0.05)；治療組、空白對照組Ⅲ期、Ⅳ期患者TNF-α、TGF-β1表達(dá)水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。結(jié)論 溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫可能的機(jī)制是通過抑制腹腔免疫因子TNF-α和TGF-β1的表達(dá)，阻礙子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展途徑，從而達(dá)到治療效果。

溫腎消癥湯；腎虛血瘀；子宮內(nèi)膜異位癥；免疫調(diào)節(jié)

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)是指具有活性的子宮內(nèi)膜組織(腺體和間質(zhì))出現(xiàn)在子宮體以外的部位而導(dǎo)致的婦科疾病[1]。近年來EMs已成為育齡期婦女的常見病之一，發(fā)病率達(dá)10%～15%[2]，且有逐年升高的趨勢[3]。EMs的發(fā)病機(jī)制目前仍未完全闡明，但相關(guān)研究證實(shí)免疫因素在其發(fā)病中起重要作用，免疫調(diào)節(jié)已經(jīng)成為研究的一大熱點(diǎn)。“溫腎消癥湯”為江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院院內(nèi)處方，此方在臨床應(yīng)用多年，已取得滿意的治療效果[4]，可有效緩解痛經(jīng)和慢性盆腔痛，提高患者妊娠率。本研究從抑制免疫因子表達(dá)的角度探討了溫腎消癥湯對卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的作用機(jī)制，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2014年2月—2015年2月在江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院住院腎虛血瘀型卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者30例作為治療組，異位囊腫直徑>3 cm，西醫(yī)診斷參照“子宮內(nèi)膜異位癥的診斷與治療規(guī)范”[5]及《婦產(chǎn)科學(xué)》[6]，中醫(yī)辨證分型診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》中腎虛血瘀證標(biāo)準(zhǔn)[7]。入選標(biāo)準(zhǔn)：年齡20～45歲，未絕經(jīng)的非妊娠及非哺乳期婦女；3個(gè)月內(nèi)均未使用任何性激素類藥物及避孕藥物；知情同意，志愿受試。排除合并心腦血管、肝、腎及造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病者；原發(fā)性痛經(jīng)，合并子宮腺肌癥、子宮肌瘤、盆腔感染、盆腔惡性腫瘤等婦科疾病者；合并有自身免疫性疾病及傳染性疾病者。終止和脫落標(biāo)準(zhǔn)：依從性差，不能堅(jiān)持完成治療者；觀察中出現(xiàn)過敏、肝腎功能損傷等嚴(yán)重不良反應(yīng)或病情加重，經(jīng)診斷后認(rèn)為必須終止試驗(yàn)者。予溫腎消癥湯口服治療3個(gè)月，后于月經(jīng)周期第7—14天至住院部行手術(shù)治療，排除脫落病例15例(服藥未滿3個(gè)月)，術(shù)后病理確診為卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫13例，其中Ⅲ期7例，Ⅳ期6例，另2例術(shù)后病理為單純性囊腫。同時(shí)選取住院行手術(shù)治療的卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者(未經(jīng)藥物治療)15例作為空白對照組，Ⅲ期9例，Ⅳ期6例。選擇行子宮肌瘤剝除患者14例作為對照組。3組基本情況比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 3組基本情況比較±s)

1.2 研究方法 手術(shù)過程中在腹腔鏡下通過穿刺針抽取子宮直腸陷凹和子宮膀胱陷凹腹腔液5 mL，明顯血液污染的標(biāo)本丟棄，2 000 r/min，4 ℃，離心10 min，取上清液分裝于EP管，-80 ℃冰箱保存待測，避免反復(fù)凍融。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定不同分組腹腔液中TNF-α、TGF-β1的表達(dá)，比較不同分組、不同分期中TNF-α、TGF-β1表達(dá)水平的差異。人TNF-α、TGF-β1ELISA試劑盒為美國eBioscience公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀設(shè)置630 nm為校正波長濾光片，設(shè)置450 nm為檢測波長濾光片(美國thermo公司生產(chǎn))。

2 結(jié) 果

2.1 腹腔液中TNF-α、TGF-β1水平比較 治療組、空白對照組TNF-α、TGF-β1水平均明顯高于對照組(P均<0.05)，治療組明顯低于空白對照組(P均<0.05)。見表2。

表2 腹腔液中TNF-α、TGF-β1水平比較

注：①與對照組比較，P<0.05；②與治療組比較，P<0.05。

2.2 治療組和空白對照組不同期別腹腔液中TNF-α、TGF-β1水平比較 治療組和空白對照組中Ⅲ期、Ⅳ期患者TNF-α、TGF-β1表達(dá)水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表3 治療組和空白對照組腹腔液中TNF-α、TGF-β1水平比較

3 討 論

近年來，眾多中醫(yī)學(xué)者對EMs的病因病機(jī)進(jìn)行了深入的探討，現(xiàn)一致認(rèn)為其基本病機(jī)可歸納為“瘀血內(nèi)阻”。同時(shí)瘀血的形成又與腎虛、氣滯、寒凝、熱灼、氣虛、濕熱、痰濕等因素密切相關(guān)。溫腎消癥湯是我院的經(jīng)驗(yàn)方，該方以“溫腎助陽、活血化瘀”為基本治療大法，以腎虛為本，血瘀為標(biāo)，標(biāo)本兼治。按照中醫(yī)理、法、方、藥的組方原則，精選生蒲黃、五靈脂、血竭、沒藥、黃芪、川斷、延胡索、川楝子八味藥組方而成。前期研究發(fā)現(xiàn)溫腎消癥湯治療腎虛血瘀型卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫，能有效改善患者的痛經(jīng)、中醫(yī)證候，降低血清CA125水平，且無明顯不良反應(yīng)。為探討其可能的作用機(jī)制，本研究檢測了腹腔免疫因子TNF-α和TGF-β1在不同分組患者中的表達(dá)。

TNF-α是由中性粒細(xì)胞、活化的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞分泌的一類多肽類蛋白 ，可介導(dǎo)多向性的炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)，具有殺傷腫瘤細(xì)胞，調(diào)節(jié)免疫、抗感染等功能。TNF-α釋放過多或與其他細(xì)胞因子的關(guān)系失調(diào)時(shí)會(huì)引起機(jī)體的病理損傷[8]。研究發(fā)現(xiàn)TNF-α在EMs患者中高表達(dá)，通過介導(dǎo)免疫及炎癥反應(yīng)，能促進(jìn)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的分泌，有助于異位內(nèi)膜的種植、生長及浸潤[9]。同時(shí)作為重要的血管生成因子，能促進(jìn)新生血管的生成[10]，從而在EMs的種植、血管生成等多個(gè)方面起重要作用[11]。本研究中TNF-α在治療組、空白對照組中的表達(dá)水平均明顯高于對照組，同時(shí)在治療組中的表達(dá)水平明顯又低于空白對照組，與現(xiàn)有的研究理論相似。

TGF-β是一類多功能的多肽類抑制因子[12]，在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、調(diào)控細(xì)胞周期、血管形成、細(xì)胞遷移及免疫應(yīng)答等方面起著重要的調(diào)節(jié)作用[13]。研究表明TGF-β在異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)顯著高于在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜，提示TGF-β可能通過有效抑制NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活性，有利于EMs的局部種植[14]。同時(shí)研究證實(shí)TGF-β與盆腔粘連密切相關(guān)[15]。本研究中TGF-β1在治療組、空白對照組中的表達(dá)水平均明顯高于對照組，同時(shí)在治療組中的表達(dá)水平明顯又低于空白對照組，與現(xiàn)有的研究理論相符合。同時(shí)有報(bào)道顯示，TGF-β1水平與EMs的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[16]，但此次實(shí)驗(yàn)中TGF-β1的表達(dá)與EMs的分期無明顯相關(guān)，大樣本的實(shí)驗(yàn)有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，免疫因子TNF-α、TGF-β1在EMs的發(fā)展過程中具有一定作用，其可能是通過抑制腹腔免疫因子TNF-α和TGF-β1的表達(dá)，阻礙其發(fā)展途徑從而達(dá)到治療效果。但對溫腎消癥湯的作用機(jī)制和分子機(jī)制的研究仍待進(jìn)一步深入。

[1] Bazot M,Darai E,Hourani R,et al.Deep pelvic Endometriosis MR imaging for diagnosis and prediction of extension of disease[J].Radiology,2004,232(2):379-389

[2] Vlahos NF,Kalampokas T,Fotiou S.Endometriosis and ovariancancer:a review[J].Gynecol Endoerinol,2010,26(3):213-219

[3] Schreinemacher MH,Backes WH,Slenter JM,et al.Towards endometriosis diagnosis by gadofosveset-trisodium enhanced magnetic resonance imaging[J].PLoS One,2012,7(3):e33241

[4] 荀愛華,萬貴平,邢玉霞,等.溫腎消癥湯聯(lián)合米非司酮治療子宮內(nèi)膜異位癥的臨床療效觀察[J].四川中醫(yī),2013,31(10):83-86

[5] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科學(xué)分會(huì).子宮內(nèi)膜異位癥協(xié)作組.子宮內(nèi)膜異位癥的診斷與治療規(guī)范[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2007,42(9):645-648

[6] 謝幸,茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].8版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2013：271

[7] 國家中醫(yī)藥管理局.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則[S].北京:中國醫(yī)藥出版社,2002:240-241

[8] Lu D,Song H,Shi G.Anti-TNF-α treatment for pelvic pain associated with Endometriosis[J].Cochrane Library,2010,11(3):231-232

[9] Barrier BF.Immunology of endometriosis[J].Clin Obstet Gynecol,2010,53(2):397-402

[10] 杜海燕,宋芳,張琳.TNF-α及VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)研究[J].中國婦幼健康研究,2010,21(6):756

[11] Asante A,Taylor RN.Endometriosis:the role of neuroangiogenesis[J].Annual Review of Physiology,2011,73(2):163-182

[12] Kim JJ,Choi YM,Choung SH,et al.Analysis of the transforming growth factor b1 gene-509C/T polymorphism in patients with advanced-stage endometriosis[J].Fertility and Sterility,2010,93(7):2121-2124

[13] Ariaans M,Oude Munnink TH,Timmer-Basscha H,et al.Transforming growth factor(TGF)-β expression and activation mechanisms as potential targets for anti-tumor therapy and tumor imaging[J].Pharmacol Ther,2012,135(2):123-132

[14] 馮春蝶,王福玲,袁芳.等.IL-17、IL-6和TGF-β在子宮內(nèi)膜異位癥患者組織的表達(dá)[J].中國免疫學(xué)雜志,2013,29(3):243-246

[15] Lian R,Chen Y,Xu Z,et al.Soluble transforming growth fa-ctor-beta1 receptor Ⅱmight inhibit transforming growth factor-beta-induced myofibroblast differentiation and improve ischemic cardiac function after myocardial infarction in rats[J].Coron Artery Dis,2010,21(6):369-377

[16] 周圍,佘立平,紀(jì)亞忠,等.MCP-1、HGF、TGF-β1在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義[J].同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2015,36(1):63-66

萬貴平，E-mail：wanguiping@263.net

江蘇省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(BK20131457)；中國中醫(yī)科學(xué)院江蘇分院院級課題(JSBY1309)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.32.013

R711.7

B

1008-8849(2016)32-3575-03

2016-04-10