組織因子及其抑制物在妊娠期高血壓疾病患者胎盤中的表達(dá)及臨床意義

王曉丹，韓翠欣，班 玲，劉雅麗，劇蘊(yùn)慧，梁 霞，田 甜

(河北省石家莊市第二醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

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組織因子及其抑制物在妊娠期高血壓疾病患者胎盤中的表達(dá)及臨床意義

王曉丹，韓翠欣，班 玲，劉雅麗，劇蘊(yùn)慧，梁 霞，田 甜

(河北省石家莊市第二醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

目的 探討妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中組織因子(TF)及其抑制物——組織因子途徑抑制物(TFPI)的表達(dá)變化，探討妊娠期高血壓疾病的發(fā)生機(jī)制。方法 采用免疫組化法檢測(cè)妊娠期高血壓患者、子癇前期患者及正常妊娠婦女胎盤組織中TF和TFPI的水平。結(jié)果 與正常妊娠組相比，妊娠期高血壓組胎盤表達(dá)TF有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比，子癇前期組胎盤表達(dá)TF明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。妊娠期高血壓組與正常妊娠組相比，TFPI表達(dá)有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；子癇前期組胎盤表達(dá)TFPI明顯下降，與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論 TF、TFPI值的變化及其比例失調(diào)導(dǎo)致了胎盤內(nèi)凝血功能的異常，可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

妊娠期高血壓疾?。唤M織因子；組織因子途徑抑制物

妊娠期高血壓疾病是妊娠期特有的疾病，主要表現(xiàn)為不同程度的血壓升高和蛋白尿。臨床發(fā)病率為5%～12%，子癇前期和子癇嚴(yán)重影響母嬰健康，是孕產(chǎn)婦和圍生兒死亡的主要原因之一。組織因子(TF)和組織因子途徑抑制物(TFPI)是體內(nèi)重要的凝血和抗凝血因子，妊娠期間，胎盤、子宮蛻膜層大量表達(dá)TF，在孕早期胚胎著床以及產(chǎn)后止血等方面發(fā)揮著重要的作用；TFPI為內(nèi)源性血漿抗凝蛋白，可通過(guò)抑制凝血因子Xa(FXa)和FVⅡa抑制凝血功能，國(guó)內(nèi)外研究認(rèn)為，胎盤凝血功能異常與產(chǎn)科多種并發(fā)癥如子癇前期、早產(chǎn)、胎兒生長(zhǎng)受限和胎膜早破等密切相關(guān)[1-4]。本研究用免疫組化方法探討不同類型妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中TF和TFPI的變化，從胎盤角度探討妊娠期高血壓疾病的發(fā)生機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2012年1月—2014年12月在我院分娩的妊娠期高血壓疾病患者87例，其中妊娠期高血壓組45例，子癇前期組42例，診斷標(biāo)準(zhǔn)按《婦產(chǎn)科學(xué)》[5]標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。同時(shí)選取在我院足月分娩的孕婦48例作為正常妊娠組，采集標(biāo)本和實(shí)驗(yàn)過(guò)程均征得患者同意并簽署知情同意書。3組均排除有慢性高血壓疾病史、心血管疾病病史、糖尿病、癌癥、胎膜早破、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病、出血性疾病者。3組年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，見表1。

1.2 標(biāo)本采集 胎盤娩出5 min內(nèi)，在母面近臍帶根部切取約1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小，無(wú)鈣化、出血的組織。經(jīng)生理鹽水沖凈后置4%多聚甲醛溶液中4 ℃固定，固定組織常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片,供免疫組織化學(xué)檢測(cè)用。

表1 正常妊娠組、妊娠期高血壓組和子癇前期組臨床特征

注：①與正常妊娠組比較，P<0.05；②與正常妊娠組和妊娠期高血壓組比較,P<0.05。

1.3 試驗(yàn)方法 采用免疫組化法檢測(cè)正常產(chǎn)婦、妊娠期高血壓患者和子癇前期患者胎盤組織中TF、TFPI的水平。兔抗人TF多克隆抗體、鼠抗人TFPI單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)圣克魯斯生物技術(shù)公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定 顯微鏡下觀察切片中滋養(yǎng)細(xì)胞免疫染色情況，TF和TFPI染色陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞有棕黃色顆粒沉著。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞顯色強(qiáng)度進(jìn)行分級(jí)：0分為細(xì)胞內(nèi)無(wú)染色或染色不清或呈均勻一致淡黃色，與背景一致(陰性)；1分為少量淡黃色顆粒，明顯高于背景(弱陽(yáng)性)；2分為較多深棕色顆粒(陽(yáng)性)；3分為大量深棕色或褐色顆粒(強(qiáng)陽(yáng)性)。同時(shí)，根據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞百分率進(jìn)行分級(jí)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)0～1%=0、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1%～10%=1、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%～50%=2、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50%～80%=3、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)80%～100%=4。IHS=陽(yáng)性細(xì)胞顯色強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞百分率[6]。

2 結(jié) 果

2.1 妊娠期高血壓組、子癇前期組和正常妊娠組胎盤TF比較 妊娠期高血壓組與正常妊娠組相比，胎盤TF表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比子癇前期組胎盤TF表達(dá)明顯增加(P均<0.05)。見圖1～3。

圖1 TF在正常妊娠組胎盤中的表達(dá)

2.2 妊娠期高血壓組、子癇前期組和正常妊娠組胎盤TFPI比較 妊娠期高血壓組與正常妊娠組相比，胎盤TFPI的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。子癇前期組胎盤表達(dá)TFPI降低，與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見圖4～6及表2。

圖2 TF在妊娠期高血壓組胎盤中的表達(dá)

圖3 TF在子癇前期組胎盤中的表達(dá)

圖4 TFPI在正常妊娠組胎盤中的表達(dá)

圖5 TFPI在妊娠期高血壓組胎盤中的表達(dá)

圖6 TFPI在子癇前期組胎盤中的表達(dá)

項(xiàng)目正常妊娠組妊娠期高血壓組子癇前期組TF評(píng)分3.64±0.32①4.21±0.68①8.79±1.89TFPI評(píng)分4.87±0.76①3.36±0.59①1.88±0.13

注：①與子癇前期組比較，P<0.05。

3 討 論

妊娠期高血壓疾病以高血壓、蛋白尿、抽搐、昏迷、心腎功能衰竭、胎盤早剝、早產(chǎn)，甚至發(fā)生母嬰死亡為臨床特點(diǎn)。該病病因不清，公認(rèn)的兩階段病因?qū)W說(shuō)認(rèn)為：第一階段，在遺傳易感性及免疫耐受失調(diào)等多因素作用背景下，滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲不足，胎盤淺著床，導(dǎo)致胎盤缺氧、缺血，釋放多種胎盤因子；第二階段：胎盤源性因子大量異常釋放入母血，引起母體血管內(nèi)皮功能紊亂、全身性炎癥應(yīng)答加強(qiáng)，繼而出現(xiàn)高血壓、蛋白尿等子癇前期癥狀。而隨著妊娠終止，胎盤娩出，母體癥狀及實(shí)驗(yàn)室改變迅速恢復(fù)正常，故學(xué)者普遍認(rèn)為妊娠期高血壓疾病可能是一個(gè)胎盤源性疾病。大量研究發(fā)現(xiàn)：和正常孕婦相比，妊娠期高血壓疾病患者體內(nèi)處于異常高凝狀態(tài)，患者胎盤以及母體血管中大量微血栓形成，所以推斷：凝血功能異常和血管內(nèi)皮功能紊亂可能參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展。一般認(rèn)為：外源性凝血途徑在體內(nèi)生理性凝血反應(yīng)的啟動(dòng)中起關(guān)鍵作用。TF又稱組織凝血活酶或凝血因子Ⅲ，是外源性凝血途徑的起始因子，通過(guò)與凝血因子Ⅶ結(jié)合并使其激活，形成TF-FⅦ/ FⅦa復(fù)合物，同時(shí)激活凝血因子Ⅸ、Ⅹ而啟動(dòng)血液凝固級(jí)聯(lián)反應(yīng)。在生理性止血及多種血栓性疾病中發(fā)揮著重要的作用，廣泛表達(dá)于胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞、蛻膜等組織中，在孕早期胚胎形成、血管形成、胎盤植入以及產(chǎn)后止血等方面發(fā)揮著重要的作用[7-8]。TFPI為內(nèi)源性血漿抗凝蛋白和目前唯一已知的組織因子依賴性凝血途徑調(diào)節(jié)劑，其抗凝的主要機(jī)制為形成FXa-TFPI-TF-FⅦa四元復(fù)合物，抑制TF-FⅦa復(fù)合物的催化活性并阻止進(jìn)一步激活FX[9]。主要由微血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，滋養(yǎng)細(xì)胞以及絨毛血管內(nèi)皮可表達(dá)TFPI[10]。

本文HE染色發(fā)現(xiàn)：子癇前期患者胎盤血管中有大量微血栓形成，證實(shí)了子癇前期患者血液呈高凝狀態(tài)；免疫組化方法發(fā)現(xiàn)：TF主要表達(dá)于滋養(yǎng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞；與正常妊娠組相比，妊娠期高血壓組TF表達(dá)雖有升高但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而子癇前期組與正常妊娠組和妊娠期高血壓組相比，TF表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TFPI主要表達(dá)于絨毛血管內(nèi)皮細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞，妊娠期高血壓組與正常妊娠組相比，TFPI表達(dá)雖有下降但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而子癇前期組TFPI表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中TF表達(dá)升高，使凝血功能增強(qiáng)，而表達(dá)下降的TFPI不足以抑制TF的功能，從而可能導(dǎo)致了凝血功能的異常和胎盤中大量微血栓形成。本研究發(fā)現(xiàn)：隨著妊娠期高血壓疾病的進(jìn)展，TF表達(dá)量上升，而TFPI表達(dá)量下降，說(shuō)明TF和TFPI的表達(dá)水平可能在反映妊娠期高血壓疾病的輕重及疾病的進(jìn)展上有一定的意義。

Chris等[11]和Lara等[12]發(fā)現(xiàn)：胎盤可釋放TF、TFPI入血，由此推斷胎盤TF、TFPI的表達(dá)變化可影響血漿中TF、TFPI的量。之前筆者研究發(fā)現(xiàn)妊娠期高血壓疾病患者血漿中TF、TFPI變化和胎盤基本一致。血漿中TF、TFPI的變化除了與血管內(nèi)皮表達(dá)異常有關(guān)外[13]，也可能與胎盤源性因子異常釋放入母血有關(guān)?？傊?，胎盤內(nèi)TF、TFPI的變化及其比例失調(diào)可導(dǎo)致凝血功能的異常，在妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的作用。

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Expression and clinical significance of placental tissue factor and tissue factor pathway inhibitor in pregnant women with hypertensive disorders

WANG Xiaodan,HAN Cuixin,BAN Ling,LIU Yali,JU Yunhui,LIANG Xia,TIAN Tian

(The Second Hospital of Shijiazhuang,Shijiazhuang 050051,Hebei,China)

Objective It is to explore whether hypertensive disorders complicating pregnancy was associated with changes of the maternal placental concentrations as well as its inhibitor-tissue factor pathway inhibitor (TFPI).Methods Placental tissue factor(TF) and TFPI expression from gestational hypertension patients,preeclampsia patients and healthy pregnant controls were determined by immunohystochemistry.Results Comparing to healthy pregnant women，TF placental levels in gestational hypertension patients increased but had no difference.TF placental levels were significantly higher in preeclampsia patients than that in gestational hypertension patients and the healthy controls.Comparing to gestational hypertension patients and healthy pregnant women,TFPI placental levels in preeclampsia patients were significantly lower，but the difference between the gestational hypertension patients and the healthy controls was not significantly.Conclusion The changes of plasma TF and TFPI contribute to coagulation disorders in placental which may lead to hypertensive disorders complicating pregnancy.

hypertensive disorders complicating pregnancy;tissue factor;tissue factor pathway inhibitor

王曉丹，女，碩士，主治醫(yī)師，從事產(chǎn)科臨床工作。

韓翠欣，E-mail：hcx3162@sina.com

石家莊市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(131462583)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.32.003

R714.246

A

1008-8849(2016)32-3541-03

2016-05-30