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    封閉群子午沙鼠的寄生蟲感染及藥物凈化效果

    2016-11-29 07:34:55徐藝玫王新國史深羅蕓張燕燕順生戴小華趙紅瓊
    中國實驗動物學(xué)報 2016年5期
    關(guān)鍵詞:毛滴蟲沙鼠絳蟲

    徐藝玫,王新國,史深,羅蕓,張燕,燕順生,戴小華,趙紅瓊

    (1. 新疆實驗動物研究中心,烏魯木齊 830002;2. 新疆疾病預(yù)防控制中心,烏魯木齊 830002;3. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué),烏魯木齊 830002)

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    封閉群子午沙鼠的寄生蟲感染及藥物凈化效果

    徐藝玫1,王新國2,史深1,羅蕓1,張燕1,燕順生1,戴小華3,趙紅瓊3

    (1. 新疆實驗動物研究中心,烏魯木齊 830002;2. 新疆疾病預(yù)防控制中心,烏魯木齊 830002;3. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué),烏魯木齊 830002)

    目的 為建立清潔級子午沙鼠種群奠定基礎(chǔ),為制定子午沙鼠寄生蟲檢測標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。方法 對封閉群子午沙鼠寄生蟲感染情況進行調(diào)查研究,選擇胺菊·氯菊酯、吡喹酮、替硝唑三種藥物,分為高、中、低劑量對子午沙鼠用藥,觀察子午沙鼠體內(nèi)外寄生蟲驅(qū)除情況。結(jié)果 在子午沙鼠體內(nèi)檢出鼠三毛滴蟲和短膜殼絳蟲兩種體內(nèi)寄生蟲,體外寄生蟲有鼠肉螨。高、中、低劑量組能不同程度殺死子午沙鼠體表食肉螨,鼠肉螨用1%的胺菊·氯菊酯藥浴子午沙鼠三次即可驅(qū)除子午沙鼠體表的鼠肉螨,有螨動物只數(shù)為零。吡喹酮中劑量組(31 mg/kg)有完全殺死子午沙鼠體內(nèi)短膜殼絳蟲的作用,且為最佳給藥劑量。替硝唑中劑量組(42 mg/kg)為凈化子午沙鼠體內(nèi)鼠三毛滴蟲的最佳劑量。結(jié)論 現(xiàn)有的子午沙鼠體內(nèi)有鼠三毛滴蟲和短膜殼絳蟲感染,體外有鼠肉螨寄生,三種抗寄生蟲藥物具有選擇性驅(qū)除這些寄生蟲的作用。

    子午沙鼠;寄生蟲檢測;藥物凈化;鼠三毛滴蟲;短膜殼絳蟲;鼠肉螨

    子午沙鼠屬嚙齒目(Rodentia),倉鼠科(Cricetidae),沙鼠亞科(Gerbillinae),沙鼠屬(Meriones)動物,抗病力強,繁殖快[1,2、3],在包蟲病動物模型[4]、戊型肝炎野生動物模型[5]等方面明顯優(yōu)于現(xiàn)有實驗動物小鼠,同時該鼠具有耐干旱、有膽囊等特性。趙素元等[6]用人戊型肝炎病毒(HEV)感染子午沙鼠顯示,子午沙鼠能感染HEV,并有與人類相似的病理學(xué)和血清學(xué)改變,是理想的HEV模型動物模型。另外,子午沙鼠(M.meridianus)作為待開發(fā)的新的實驗動物資源,已受到國內(nèi)外研究者的關(guān)注,在腦神經(jīng)外科及寄生蟲學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的前景。新疆實驗動物研究中心自1993年實驗室繁殖子午沙鼠以來,普通級封閉群已達到40代。由于一直未對該種群進行生物凈化,目前該種群尚停留在普通級水平。2001年實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)刪除了普通級大、小鼠標(biāo)準(zhǔn),因此對現(xiàn)有子午沙鼠種群進行生物凈化勢在必行。

    本研究的目的在于了解現(xiàn)有子午沙鼠種群寄生蟲的感染狀況,有針對性的篩選有效藥物及合適劑量驅(qū)除子午沙鼠體內(nèi)外寄生蟲,使子午沙鼠得到凈化,為建立清潔級子午沙鼠種群奠定基礎(chǔ),為制定子午沙鼠寄生蟲等級檢測標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。隨著現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)的不斷發(fā)展,現(xiàn)有為人類利用的實驗動物品種不能滿足業(yè)已存在和不斷增加的疾病種類防治和研究的需要,對應(yīng)用前景好的實驗用動物進行清潔級培育是補充實驗動物新品種和促進資源共享的有效方法。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物

    普通級子午沙鼠92只,雌雄各半,6~8周齡,由新疆自治區(qū)實驗動物研究中心繁育生產(chǎn)【SCXK(新)2011-0001】,飼養(yǎng)于新疆實驗動物研究中心【SCYK(新)2011-0002】。

    1.2 實驗儀器

    電子天平(日本島津儀器有限公司),移液器(中國上海雷勃分析儀器有限公司),HSZ-H光學(xué)顯微鏡(中國重慶光電儀器有限公司)。

    1.3 藥品及試劑

    替硝唑片(中國山西津華暉星制藥有限公司,批號:120204),吡喹酮(中國北京紫竹藥業(yè)有限公司,批號:120224),胺菊·氯菊酯(中國桂林市柏松衛(wèi)生品有限責(zé)任公司,批號:120527),0.9%生理鹽水(中國國藥集團新疆制藥有限公司,批號:12070591),乙醚(中國天津市富宇精細化工有限公司,批號:120619)。

    1.4 實驗方法

    1.4.1 子午沙鼠體內(nèi)外寄生蟲感染情況檢測

    采樣方法及采樣量參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)[7]進行。

    體外寄生蟲檢測方法依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)[8]對子午沙鼠進行體外寄生蟲檢測。采用透明膠紙粘取法,將透明膠帶剪成與載玻片近等長的膠條,貼于載玻片上,取樣使其一端仍粘在載玻片上,拉住另一端在子午沙鼠的耳部、頸部、背部、腹股溝等易感染部位依次按壓,并逆毛方向粘取,拔下少許被毛為宜。然后將膠帶復(fù)位在載玻片上,用光學(xué)顯微鏡對取樣標(biāo)本進行仔細檢查,凡發(fā)現(xiàn)蟲卵、幼蟲、成蟲均為陽性。

    體內(nèi)寄生蟲檢測依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18448.6-2001《實驗動物 蠕蟲檢測方法》和GB/T 18448.10-2001《實驗動物 腸道鞭毛蟲和纖毛蟲檢測方法》對子午沙鼠的糞便、腸道內(nèi)含物作體內(nèi)寄生蟲檢測。采用直接涂片法于載玻片上加一滴生理鹽水,解剖動物后立即用接種環(huán)挑取適量新鮮小腸、盲腸、結(jié)腸內(nèi)容物與生理鹽水混合涂制成均勻的糞膜,蓋上蓋玻片于顯微鏡下鏡檢,糞便用玻棒挑取,凡在顯微鏡下檢查到蟲體或包囊判定為陽性。1.4.2 子午沙鼠體表鼠肉螨(Myobiamusculi)的驅(qū)除

    將28只子午沙鼠按每組7只,隨機分為高劑量組、中劑量組、低劑量組和對照組,分別放入30℃左右含1.5%、1%、0.5%濃度的胺菊·氯菊酯藥液和蒸餾水各藥浴30 s,共藥浴5次,每隔4 d藥浴一次。每次藥浴后,更換經(jīng)高壓滅菌的墊料和新潔爾滅清洗消毒的鼠盒,飲水瓶用高錳酸鉀溶液消毒,同時用1%的胺菊·氯菊酯藥液噴霧滅蟲。次日檢查體外寄生蟲感染情況,凡發(fā)現(xiàn)蟲卵、幼蟲、成蟲均為陽性。

    1.4.3 子午沙鼠體內(nèi)短膜殼絳蟲(Hymenolepisnana)的驅(qū)除

    將32只子午沙鼠按每組8只,隨機分為高劑量組(人體劑量的15倍: 18.75 mg/kg),中劑量組(人體劑量12.5倍: 15.63 mg/kg),低劑量組(人體劑量10倍: 12.50 mg/kg)和生理鹽水對照組,按照吡喹酮給藥劑量每天灌胃一次,連續(xù)7 d,每次灌胃劑量1 mL/50 g。隨時記錄動物異常情況。第8天,乙醚麻醉處死子午沙鼠,用直接涂片法取小腸內(nèi)容物,每次挑取50 mg,加生理鹽水5 mL,搖勻,吸取少量內(nèi)容物渾濁液放入血球計數(shù)板涂片鏡檢計數(shù),置于400倍光學(xué)顯微鏡下觀察,隨機選取5個格進行計數(shù),每格的容積為0.1 mm3,溶解0.001 mg小腸部內(nèi)容物,求出平均值。平均值擴大1000倍即為1 mg小腸內(nèi)容物所含短膜殼絳蟲卵數(shù)量,以此反映短膜殼絳蟲驅(qū)除情況。

    1.4.4 子午沙鼠體內(nèi)鼠三毛滴蟲(Tritrichomonasmuris)的驅(qū)除

    32只子午沙鼠按每組8只,隨機分為高劑量組(人體劑量15倍: 25 mg/kg),中劑量組(人體劑量12.5倍: 20.38 mg/kg),低劑量組(人體劑量10倍: 16.67 mg/kg)和生理鹽水對照組,按照給藥劑量每天替硝唑灌胃一次,連續(xù)7 d,每次灌胃劑量1 mL/50 g。隨時記錄動物異常情況。第8天,乙醚麻醉處死子午沙鼠,采用直接涂片法,取回盲部內(nèi)容物,每次挑取50 mg,加生理鹽水5 mL,搖勻,吸取少量內(nèi)容物渾濁液放入血球計數(shù)板涂片并鏡檢計數(shù),置于400倍光學(xué)顯微鏡下觀察,隨機選取5個格進行計數(shù),每格的容積為0.1 mm3,溶解0.001 mg回盲部內(nèi)容物,求出平均值。平均值擴大1000倍即為1 mg回盲內(nèi)容物所含的鼠三毛滴蟲蟲卵數(shù)量,以此反映鼠三毛滴蟲驅(qū)除情況。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 子午沙鼠寄生蟲感染狀況

    根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18448.1~18448.10-2001《實驗動物寄生蟲學(xué)檢測方法》分別對32只子午沙鼠種群進行寄生蟲學(xué)檢測,檢出體外(體表)寄生蟲1種,經(jīng)鑒定為鼠肉螨,檢出率82.1%(23/28);檢出體內(nèi)(小腸、回盲部)寄生蟲2種,經(jīng)鑒定為短膜殼絳蟲和鼠三毛滴蟲,檢出率分別為78.1% (25/32)和90.6% (29/32)。依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB14922.1-2001《實驗動物寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測》鼠肉螨和短膜殼絳蟲為清潔級實驗大、小鼠寄生蟲學(xué)檢測陰性指標(biāo),鼠三毛滴蟲為SPF級大、小鼠寄生蟲學(xué)檢測陰性指標(biāo)。

    2.2 胺菊·氯菊酯對子午沙鼠體表鼠肉螨殺滅效果

    高、中、低劑量組子午沙鼠有螨動物只數(shù)隨藥浴的次數(shù)增加而減少,能不同程度的殺死子午沙鼠體表螨,有螨動物只數(shù)最終達到零。低劑量組在第5次藥浴后有螨動物只數(shù)達到零,高劑量組和中劑量組在第3次藥浴后有螨數(shù)達到零(見表1)。

    表1 各次藥浴后各組子午沙鼠鼠肉螨檢出陽性只數(shù)(只)

    2.3 吡喹酮對子午沙鼠體內(nèi)短膜殼絳蟲驅(qū)蟲效果

    吡喹酮高、中、低劑量組與對照組比較,對子午沙鼠體內(nèi)短膜殼絳蟲驅(qū)除均有顯著效果(P<0.01),低劑量組雖有顯著差異,但短膜殼絳蟲不能完全驅(qū)除,給藥后為(1.00±0.60),不能達到完全凈化的效果。因此,對于高、中劑量組都能驅(qū)除體內(nèi)短膜殼絳蟲,選擇用中劑量為最佳給藥劑量,使子午沙鼠的給藥傷害降至最低。

    2.4 替硝唑?qū)ψ游缟呈篌w內(nèi)鼠三毛滴蟲驅(qū)除效果

    替硝唑高劑量組、中劑量組、低劑量組與對照組比較,對子午沙鼠體內(nèi)鼠三毛滴蟲的驅(qū)除均有顯著效果(P<0.01),低劑量組雖有顯著效果,但不能完全驅(qū)除子午沙鼠體內(nèi)鼠三毛滴蟲,給藥后為(3.00±0.53),不能達到完全凈化的效果。因此,對于高、中劑量組都能驅(qū)除體內(nèi)鼠三毛滴蟲,選擇中劑量為最佳給藥劑量,使子午沙鼠的給藥傷害降至最低。

    3 結(jié)論

    鼠肉螨是廣泛寄生于鼠體表的寄生蟲,嚴(yán)重影響實驗結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。有人對寄生于不同動物和人體的螨蟲、蠕蟲, 用不同藥物治療[9、10],結(jié)果用滅螨胺藥浴小鼠,效果明顯。胺菊·氯菊酯治療鼠肉螨不但具有療效高、毒性低等特點,而且操作方便、價格便宜、治療時間短、治療費用低的優(yōu)勢[11]。實驗研究發(fā)現(xiàn),用1%的胺菊·氯菊酯溶液藥浴子午沙鼠,能有效的驅(qū)除體表食肉螨。螨病根治困難,復(fù)發(fā)率高[12],藥浴一定時期后,鼠肉螨會再發(fā),反復(fù)用藥滅螨,易使動物產(chǎn)生相應(yīng)的抗體和不良反應(yīng),所以加強飼養(yǎng)管理,及時更換高壓消毒墊料及籠盒和房間滅蟲是降低鼠肉螨感染的關(guān)鍵因素。本實驗結(jié)果顯示,用1%的胺菊·氯菊酯溶液藥浴子午沙鼠,同時更換消毒滅菌的墊料和籠盒,能有效的驅(qū)除其體表食肉螨。

    吡喹酮為廣譜抗吸蟲和絳蟲藥物,適用于各種血吸蟲病、華支睪吸蟲病、肺吸蟲病、姜片蟲病、絳蟲病和囊蟲病,具有驅(qū)蟲效果好和驅(qū)蟲范圍廣等優(yōu)勢。盧致民等[13]在實驗中顯示,吡喹酮對短小膜殼絳蟲的殺傷作用優(yōu)于阿苯達唑、甲苯咪唑,是驅(qū)除短膜殼絳蟲的優(yōu)選藥品。在實驗過程,高劑量組的子午沙鼠出現(xiàn)食欲減退,活動量減少不良反應(yīng),中劑量無明顯異常反應(yīng),低劑量組雖有顯著驅(qū)除效果,但并不能完全殺死寄生于子午沙鼠體內(nèi)的短膜殼絳蟲,不能達到藥物凈化的目的,結(jié)果表明中劑量組(0.31 g/kg)有完全殺死子午沙鼠體內(nèi)短膜殼絳蟲的作用,且實驗過程中無不良反映,為最佳給藥劑量。

    替硝唑(Tinidazole, TNZ)為20世紀(jì)60年代后期由美國Pfizer公司開發(fā)的新硝基咪唑類衍生物,是繼甲硝唑(Metronidazole, MNZ)后療效更高、耐受性更好的抗厭氧菌及抗滴蟲藥品[13]。本實驗低劑量組雖有效果,無不良反應(yīng),但蟲體仍呈陽性指標(biāo),不符合清潔級等級檢測要求;高劑量組子午沙鼠不良反應(yīng)明顯,有食量減少,狀態(tài)萎靡,體重減輕等現(xiàn)象,可能與子午沙鼠對該藥敏感性和耐藥性有關(guān);中劑量組對鼠子午沙鼠鼠三毛滴蟲有很好治療作用,且無不良反應(yīng),適合驅(qū)除子午沙鼠鼠三毛滴蟲的劑量(0.42 mg/g)。因此,驅(qū)蟲過程中,應(yīng)注意掌握子午沙鼠的給藥劑量。

    本文選用三種藥物對子午沙鼠的寄生蟲進行了藥浴驅(qū)除實驗,研究結(jié)果表明用1%的胺菊·氯菊酯溶液藥浴子午沙鼠,能有效的驅(qū)除其體表食肉螨;吡喹酮的中劑量組0.31 g/kg,有完全殺死子午沙鼠體內(nèi)短膜殼絳蟲的作用,能達到大、小鼠寄生蟲學(xué)的檢測指標(biāo),且為最佳藥物凈化的給藥劑量;替硝唑?qū)ψ游缟呈笫笕蜗x驅(qū)除效果顯著,藥物凈化子午沙鼠體內(nèi)鼠三毛滴蟲最佳劑量為0.42 mg/g,為人體劑量的12.5倍。

    在開放式普通環(huán)境條件下,飼養(yǎng)動物容易被空氣、墊料、飼料和飲水等外環(huán)境中的寄生蟲感染,群發(fā)性高;另外,藥物凈化后的動物,如果繼續(xù)生活在普通環(huán)境設(shè)施中,寄生蟲容易再感染,使用這些動物會影響實驗研究結(jié)果。因此剖宮產(chǎn)手術(shù)是實現(xiàn)生物凈化的有效途徑和方法,而且動物的生活環(huán)境起著至關(guān)重要的作用。后期我們會根據(jù)研究要求,結(jié)合研究者徐平[14]、盧領(lǐng)群[15]、張繼恩[16]等的經(jīng)驗對子午沙鼠進行剖腹產(chǎn)生物凈化,并配合上述藥物凈化的方法,建立清潔級以上子午沙鼠種群,以便于子午沙鼠應(yīng)用于更多的科學(xué)研究領(lǐng)域。

    [1] 孟雁, 關(guān)崇謙, 周寶忠. 子午沙鼠實驗室人工飼養(yǎng)繁殖初探 [J]. 中國實驗動物學(xué)雜志,1991, 1(3-4): 281-284.

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    [4] 陳亮, 易成朋, 謝其鑫, 等. 放射治療對子午沙鼠骨棘球蚴囊病理改變的影響[J]. 中華地方病學(xué)雜志,2013, 32(4):389-394.

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    Parasitic infection in a closed group of outbredMerionesmeridianusand results of parasite eradication

    XU Yi-mei1*, WANG Xin-guo2, SHI Shen1, LUO Yun1, ZHANG Yan1,YAN Shun-sheng1,DAI Xiao-hua3, ZHAO Hong-qiong3

    (1. Xinjiang Laboratory Animals Research Center, Urumqi 830002, China;2.Xinjiang Center for Disease Control and Prevention College of Food Science, Xinjiang Agricultural University,Urumqi 830002; 3. Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830002)

    Objective In order to lay the foundation for establishment of a clean gradeMerionesmeridianuspopulation, and provide reference for the formulation ofMerionesmeridianusparasite detection standard. Methods A survey of parasite infection inMerionesmeridianuswas carried out, and three kinds of antiparasitic drugs, tetramethrin/permethrin, praziquantel, and tinidazole were used in high-, medium- and low-doses for eradication of the target parasites. Results Three types of parasites were detected among the animals. The infection rate of surface parasiteMyobiamusculiwas 82.1% (23/28), that of intestinal parasiteHymenolepisnanawas 78.1% (25/32) andTritrichomonasmuriswas 90.6% (29/32). Significant results of parasite eradication were achieved with the antiparasitic drugs. Medicated bath using 1% tetramethrin/permethrin for 30 s every 4 days for 5 times and 1.5% tetramethrin/permethrin for 30 s every 4 days for 3 times completely eradicated the surfaceMyobiamusculiinfection. Praziquantel in a dose of 31 mg/kg by daily gastric gavage for consecutive 7 days was the optimal dosage to completely eradicate the intestinalHymenolepisnana. Tinidazole in a dose of 42 mg/kg administered by gastric gavage daily for consecutive 7 days was the optimal dosage for eradication of intestinalTritrichomonasmurisinfection. Conclusions Three types of parasites are detected inMerionesmeridianusin our laboratory, i.e. surface infection withMyobiamusculi, and intestinal infection withTritrichomonasmurisandHymenolepisnana. Tetramethrin/permethrin, praziquantel and tinidazole can be used to effectively eradicate these three types of parasites, respectively.

    Merionesmeridianus; Parasite detection; Parasite eradication;Tritrichomonasmuris;Hymenolepisnana;Myobiamusculi, Meriones meridianus

    XU Yi-mei. E-mail: xymeimei@163.com

    國家自然基金項目(編號:31460579)。

    徐藝玫(1973-),女,副研究員,研究方向:實驗動物管理與動物模型。Email: xymeimei@163.com

    研究報告

    Q95-33

    A

    1005-4847(2016)05-0499-04

    10.3969/j.issn.1005-4847.2016.05.011

    2016-04-06

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