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    慢性硬膜下血腫外膜中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的表達(dá)及臨床意義

    2016-11-27 00:32:42馬京庫(kù)左毅李寶明陳尚軍王輝惠軍謝國(guó)強(qiáng)張彬吳東飛董克辛于清宇
    關(guān)鍵詞:外膜硬膜纖維細(xì)胞

    馬京庫(kù) 左毅 李寶明 陳尚軍 王輝 惠軍 謝國(guó)強(qiáng) 張彬 吳東飛 董克辛 于清宇

    (1陜西省核工業(yè)215醫(yī)院神經(jīng)外二科,陜西 咸陽(yáng) 712000; 2大連市友誼醫(yī)院神經(jīng)外科,遼寧 大連 116000; 3綏化市第一醫(yī)院神經(jīng)外科,黑龍江 綏化 152000)

    ·論著·

    慢性硬膜下血腫外膜中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的表達(dá)及臨床意義

    馬京庫(kù)1,2左毅1李寶明1陳尚軍1王輝1惠軍1謝國(guó)強(qiáng)1張彬1吳東飛1董克辛2*于清宇3

    (1陜西省核工業(yè)215醫(yī)院神經(jīng)外二科,陜西 咸陽(yáng) 712000;2大連市友誼醫(yī)院神經(jīng)外科,遼寧 大連 116000;3綏化市第一醫(yī)院神經(jīng)外科,黑龍江 綏化 152000)

    目的檢測(cè)慢性硬膜下血腫(CSDH)外膜中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的表達(dá)情況。方法應(yīng)用免疫組化檢測(cè)32名慢性硬膜下血腫患者血腫外膜中TGF-β1的表達(dá)情況。在5個(gè)高倍視野下每張切片中的成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、炎細(xì)胞數(shù)大于500個(gè)為富于細(xì)胞組,共16例,在100~500之間為較豐富細(xì)胞組,共12例,小于100個(gè)為缺乏細(xì)胞組,共4例。結(jié)果TGF-β1在富于細(xì)胞組表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性,在較豐富細(xì)胞組表達(dá)呈陽(yáng)性。結(jié)論TGF-β1促進(jìn)血腫外膜新生血管生成,促進(jìn)血腫外膜纖維化。

    慢性硬膜下血腫; 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1; 血腫外膜; 新生血管生成; 纖維化

    目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為慢性硬膜下血腫(chronic subdural hematoma,CSDH)發(fā)病機(jī)制與血腫外膜新生血管生成及其通透性增加有關(guān)[1]。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一種多功能細(xì)胞因子,能促進(jìn)新生血管生成,促進(jìn)組織纖維化[2]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)CSDH患者血腫外膜中TGF-β1的表達(dá)情況,進(jìn)一步證明CSDH發(fā)病機(jī)制與血腫外膜新生血管生成及其通透性增加有關(guān)。

    對(duì)象與方法

    一、一般資料

    2010年1月至2012年12月我科收治32名CSDH患者,其中男性患者20例,女性患者12例。年齡在45~89歲之間,平均年齡(65.3±11.2)歲。有6例患者無(wú)明顯的頭部外傷史,均為老年患者;26例患者發(fā)病前均有不同程度的頭部外傷史,外傷時(shí)間1~5個(gè)月。32名患者中病程最短24 d,最長(zhǎng)1年,平均(40±3)d。GCS 9~12分3例,13~15分29例。

    二、臨床表現(xiàn)

    頭痛、頭暈27例,惡心、嘔吐4例,肢體乏力14例,一側(cè)巴賓斯基征陽(yáng)性6例,智力減退及精神障礙2例,癲癇2例,感覺(jué)障礙3例,失語(yǔ)1例,小便失禁1例。

    三、影像學(xué)表現(xiàn)

    全部患者均行頭顱計(jì)算機(jī)斷層攝影(computed tomography,CT)檢查,CT示等密度14例,混合密度8例,低密度10例,單側(cè)血腫29例,雙側(cè)血腫3例。6例患者經(jīng)頭部磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)檢查確診,MRI檢查示長(zhǎng)T1、長(zhǎng)T2。5例患者在全麻下行鉆孔引流術(shù),均為老年患者;27例患者在局麻下行鉆孔引流術(shù)。3例雙側(cè)CSDH患者中有1名患者分期行雙側(cè)鉆孔引流術(shù),其余2名患者在血腫量多的一側(cè)行鉆孔引流術(shù),術(shù)后另一側(cè)血腫經(jīng)保守治療后均逐漸吸收。

    四、取材方法

    術(shù)中在血腫最厚的部位鉆孔,用尖刀“十”字切開硬腦膜,小心保護(hù)硬膜下血腫外膜的完整,沿鉆孔邊緣環(huán)形切開血腫外膜,取材大小約0.5 cm×0.5 cm的血腫外膜留作病理。

    五、主要試劑與方法

    免疫組化技術(shù)采用(streptavidin-perosidase,SP)法。兔抗人多克隆抗體TGF-β1(即用型),SP試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)酶底物顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新公司。

    六、分組方法

    5個(gè)高倍視野下計(jì)數(shù)每張切片中的成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、炎細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)≥500個(gè),為富于細(xì)胞組,共16例。細(xì)胞數(shù)在100~500個(gè),為較豐富細(xì)胞組,共12例。細(xì)胞數(shù)≤100個(gè),為缺乏細(xì)胞組,共4例。

    七、結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

    在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性染色的標(biāo)本陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度差異不大,因此免疫組織化學(xué)染色結(jié)果評(píng)價(jià)主要根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占所有靶細(xì)胞的比例。以細(xì)胞質(zhì)著棕黃色為陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。5個(gè)高倍視野觀察每張切片,TGF-β1陽(yáng)性率≤10%為陰性(-),10%~25%為弱陽(yáng)性(+),25%~50%為陽(yáng)性(++),gt;50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

    八、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    所有數(shù)據(jù)均在計(jì)算機(jī)軟件SPSS 16.0上進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析處理。

    結(jié) 果

    一、CSDH外膜組織中TGF-β1的表達(dá)情況

    CSDH外膜組織經(jīng)TGF-β1免疫組化染色后,高倍顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)著棕黃色,TGF-β1表達(dá)呈陽(yáng)性,主要表達(dá)在成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎細(xì)胞的胞漿中(表1,2)。

    表1 CSDH外膜組織中TGF-β1表達(dá)的陽(yáng)性率(例數(shù),%)
    Tab 1 Positive expression rate of TGF-beta 1 in the outer membrane of CSDH (n,%)

    GroupnTGF?β1(+)Positiverate(%) Cellabundancegroup1616a84.77% Cellrichgroup121236.50% Celldeficiencygroup400

    aPlt;0.05,vsthe cell deficiency group.

    表2 CSDH外膜組織中TGF-β1表達(dá)的陽(yáng)性強(qiáng)度(例數(shù))
    Tab 2 Positive expression intensity of TGF-beta 1 in the outer membrane of CSDH (n)

    GroupnTGF?β1(+)Theintensityofpositive Cellabundancegroup1616a+++ Cellrichgroup1212++ Celldeficiencygroup40?

    aPlt;0.05,vscell deficiency group.

    Note:+ represents positive; -represents negative.

    二、蘇木精-伊紅HE (hematoxylin-eosin staining )染色增生的纖維和血管

    CSDH外膜類似炎性肉芽組織,有大量的新生毛細(xì)血管,可見成纖維細(xì)胞、纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、炎細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和膠原纖維(圖1~3)。

    圖1 HE染色增生的纖維細(xì)血管(HE,×40)
    Fig 1 Fiber thin blood vessels by HE staining (HE,×40)

    圖2 HE染色增生的纖維細(xì)血管(HE,×100)
    Fig 2 Fiber thin blood vessels by HE staining (HE,×100)

    圖3 HE染色增生的纖維細(xì)血管(HE,×400)
    Fig 3 Fiber thin blood vessels by HE staining (HE,×400)

    圖4 富于細(xì)胞組TGF-β1表達(dá)呈(+++)
    Fig 4 Positive expression of TGF-beta 1 in cell abundance group

    圖5 較豐富細(xì)胞組TGF-β1表達(dá)呈(++)
    Fig 5 Positive expression of TGF-β1 in cell rich group

    圖6 缺乏細(xì)胞組TGF-β1表達(dá)呈(-)
    Fig 6 Negative expression of TGF-β1 in cell deficiency group

    三、免疫組織化學(xué)染色

    在富于細(xì)胞組及較豐富細(xì)胞組,CSDH外膜中可見到成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎細(xì)胞的胞漿著棕黃色。TGF-β1在富于細(xì)胞組的陽(yáng)性率為84.77%,表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。TGF-β1在較豐富細(xì)胞組中陽(yáng)性率為36.50%,表達(dá)強(qiáng)度呈陽(yáng)性(++)。而在缺乏細(xì)胞組中,未見到著黃色的細(xì)胞,TGF-β1表達(dá)呈陰性(-)(圖4~6)。

    討 論

    CSDH是一種神經(jīng)外科常見的疾病,約占顱內(nèi)血腫的10%[3]。目前關(guān)于CSDH的發(fā)病機(jī)制研究較多,其中“血腫外膜新生血管生成、出血”機(jī)制是研究的熱點(diǎn)[4]。電鏡下觀察慢性硬膜下血腫外膜可見到大量的新生毛細(xì)血管,血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙增寬,內(nèi)皮細(xì)胞之間的間隙有紅細(xì)胞及血漿成分滲出。血腫外膜新生血管基底膜部分缺如,血管壁通透性較高,易引起血腫外膜反復(fù)出血,導(dǎo)致CSDH不斷擴(kuò)大[5]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一種促進(jìn)血管生成的細(xì)胞因子,可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂和遷移,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,增加血管的通透性[6]。CSDH患者的血腫外膜中VEGF表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性[7]。Shono等[8]檢測(cè)CSDH患者的血腫液與外周靜脈血中的VEGF濃度時(shí),發(fā)現(xiàn)血腫液中VEGF濃度是外周血中的28倍。血腫外膜新生血管生成及其通透性增加促進(jìn)CSDH不斷擴(kuò)大[9]。

    TGF-β1是一種多肽細(xì)胞因子,由T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及纖維母細(xì)胞分泌,在人血小板及骨中含量最高,能促進(jìn)新生血管生成及新生血管的成熟進(jìn)程,并與人體多種器官及組織的纖維化疾病密切相關(guān)[10~12]。TGF-β1調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的趨化性遷移、增生和分化。在組織損傷早期,TGF-β1刺激巨噬細(xì)胞分泌血管發(fā)生因子,使內(nèi)皮細(xì)胞分裂增生、趨化,向無(wú)血管或血管少的區(qū)域遷移,逐漸形成毛細(xì)血管芽,形成新生的毛細(xì)血管[13]。TGF-β1促進(jìn)血管外膜成纖維細(xì)胞(adventitia fibroblasts,AF)的增殖、遷移,參與AF相關(guān)的血管重塑[14]。TGF-β1刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞大量分泌VEGF,VEGF促進(jìn)新生血管生成[15]。

    本實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)CSDH外膜類似炎性肉芽組織,有大量的新生血管,有成纖維細(xì)胞、纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、炎細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和膠原纖維。血管內(nèi)皮細(xì)胞肥大。三組病例中,富于細(xì)胞組16例,病程平均為45 d,平均年齡70歲,病情重,TGF-β1陽(yáng)性率為84.77%,表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。較豐富細(xì)胞組12例,病程平均為30 d,平均年齡65歲,病情較重,TGF-β1陽(yáng)性率為36.50%,表達(dá)呈陽(yáng)性(++)。缺乏細(xì)胞組4例,TGF-β1陽(yáng)性率為0,病程平均為26 d,平均年齡為60歲,病情輕,表達(dá)呈陰性(-)。標(biāo)本細(xì)胞數(shù)的多少與其病程,年齡,病情輕重呈正相關(guān)。富于細(xì)胞組及較豐富的細(xì)胞組TGF-β1表達(dá)呈陽(yáng)性,主要表達(dá)在成纖維細(xì)胞,血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎細(xì)胞的胞漿。缺乏細(xì)胞組TGF-β1表達(dá)呈陰性,出現(xiàn)陰性結(jié)果的標(biāo)本細(xì)胞數(shù)少,膠原纖維多,玻璃樣變性顯著。實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞貧富差異可能與取材的部位、大小、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和組織變性有關(guān),在電刀切片的過(guò)程中部分細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)被破壞及發(fā)生熱變性。不除外與CSDH患者的病程、年齡及病情輕重等有關(guān),由于本實(shí)驗(yàn)病例數(shù)較少,其臨床意義有待進(jìn)一步研究。

    綜上所述,TGF-β1是一種促進(jìn)新生血管生成多肽類細(xì)胞因子[16],CSDH的發(fā)病機(jī)制與血腫外膜新生血管生成有關(guān)[4],本實(shí)驗(yàn)證明了TGF-β1在CSDH外膜中表達(dá)呈陽(yáng)性,因此TGF-β1與CSDH形成機(jī)制有關(guān)。

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    Expressionoftransforminggrowthfactor-beta1inoutermembraneofchronicsubduralhematomaanditsclinicalsignificance

    MAJingku1,2,ZUOYi1,LIBaoming1,CHENShangjun1,WANGHui1,HUIJun1,XIEGuoqiang1,ZHANGBin1,WUDongfei1,DONGKexin2,YUQingyu3

    1DepartmentofNeurosurgery,The215HospitalofShanxiProvinceNuclearIndustry,Xianyang712000;2DepartmentofNeurosurgery,DalianFriendshipHospital,Dalian116000;3DepartmentofNeurosurgery,FirstHospitalofSuihua,Suihua152000,China

    ObjectiveThe expression of transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta 1) in the outer membrane of chronic subdural hematoma (CSDH) was detected.MethodsThe expression of TGF-beta 1 was detected in the outer membrane of 32 patients with chronic subdural hematoma by using immunohistochemical technique. At high magnification ×5,the number of fibroblasts,endothelial cells,and inflammatory cells in each section more than 500 was divided into cell abundance group (16 cases),the number between 100 and 500 was the cell rich group (12 cases),and the number less than 100 was cell deficiency group (4 cases).ResultsTGF-beta 1 was strong positively expressed in cell abundance group,and was positively expressed in the cell rich group.ConclusionTGF-beta 1 promotes the angiogenesis in outer membrane of hematoma and the fibrosis of outer membrane of hematoma.

    Chronic subdural hematoma; Transforming growth factor-beta1; The hematoma outer membrane; New blood vessels to generate; Fibrosis

    1671-2897(2016)15-342-04

    R 739.4

    A

    馬京庫(kù),醫(yī)師,碩士研究生,E-mail:majingku2013@163.com

    *通訊作者:董克辛,主任醫(yī)師,碩士生導(dǎo)師,E-mail:xin_ke_dong@163.com

    2015-03-30;

    2015-11-20)

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