麻疹患兒外周血輔助性T細胞17及其效應因子白介素-17的表達及臨床意義

付強,于會娜, 王婷, 吳屏, 劉劍峰,晏霞, 屈悅, 唐臨飛, 余孔貴

長江大學第二臨床醫(yī)學院荊州市中心醫(yī)院兒科，湖北 荊州 434020

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麻疹患兒外周血輔助性T細胞17及其效應因子白介素-17的表達及臨床意義

付強,于會娜, 王婷, 吳屏, 劉劍峰,晏霞, 屈悅, 唐臨飛, 余孔貴

長江大學第二臨床醫(yī)學院荊州市中心醫(yī)院兒科，湖北 荊州 434020

目的：探討麻疹患兒外周血輔助性T細胞17(Th17)及其效應因子白介素(IL)-17的表達及臨床意義。方法：采用流式細胞儀(FCM)檢測20例普通麻疹患兒(無并發(fā)癥)、15例麻疹并發(fā)細菌性肺炎患兒、20例健康對照組兒童外周血Th17細胞的百分率；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清IL-17、IL-6的水平；并分析了Th17百分率與血清C反應蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)的水平的關系。結果：麻疹并發(fā)細菌性肺炎組Th17細胞百分率均值為(4.15±0.76)%、高于普通麻疹患兒(1.71±0.63)%及對照組(1.59±0.58)%(P<0.05)。IL-17、IL-6、CRP、PCT在麻疹合并細菌性肺炎組分別為：(78.04±12.67)、(35.23±10.36)pg/mL、(3.97±0.56)ng/mL和(37.05±9.27)mg/L；在普通麻疹組的均值分別為：(50.21±10.55)、(13.18±6.93)pg/mL、(0.10±0.02)ng/mL和(0.76±0.11)mg/L；在健康對照組均值分別為：(45.95±9.33)、(11.07±6.52)pg/mL、(0.06±0.01)ng/mL和(0.45±0.08)mg/L。麻疹并發(fā)細菌性肺炎組各指標均明顯高于普通麻疹患兒及健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；普通麻疹患兒與對照組間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。麻疹并發(fā)細菌性肺炎患兒外周血Th17比率與CRP、PCT水平呈正相關(r=0.63、0.67，P<0.05)。結論：麻疹患兒外周血Th17細胞及其效應因子IL-17表達升高可能與繼發(fā)細菌感染有關，可作為監(jiān)測病情的實驗室指標之一

麻疹；輔助性T細胞17；白介素-17； 細菌感染；兒童

麻疹是由副黏病毒引起的小兒常見的急性呼吸道傳染病，通過空氣飛沫傳播，以發(fā)熱、咳嗽、流涕、結膜炎、口腔麻疹黏膜斑及皮膚特殊性斑丘疹為主要臨床表現(xiàn)，部分患兒可繼發(fā)嚴重肺炎危及生命[1,2]。輔助性T細胞17(T helper 17 cells, Th17)是一種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細胞亞群，在自身免疫性疾病和機體防御反應中均有重要意義[3,4]。Th17細胞的主要效應因子白介素17(Interleukin-17, IL-17)具有強大的招募中性粒細胞的功能，能夠促進多種細胞釋放炎性因子，可使氣道黏液腺分泌大量黏液，增加氣道的高反應性[5,6]。Th17細胞及IL-17在麻疹并發(fā)細菌性肺炎中有何作用目前尚不清楚。本研究觀察了普通麻疹患兒及麻疹并發(fā)細菌性肺炎患兒外周血Th17細胞及IL-17的變化，探討Th17細胞及IL-17在麻疹繼發(fā)細菌感染中可能的作用及臨床意義。

1 對象與方法

1.1 對象

選擇2015年1月至2016年2月在我院感染科住院的麻疹患兒35例，診斷符合《諸福棠實用兒科學》第7版的標準[7]，麻疹患兒均為發(fā)病后3～6d入院，具有典型麻疹的臨床表現(xiàn)，血清經(jīng)荊州市疾病預防與控制中心檢測，麻疹病毒IgM抗體陽性，均排除其他感染性疾病和免疫性疾病。其中20例為普通麻疹患兒，無明顯并發(fā)癥出現(xiàn)，男15例，女5例；年齡6個月～15個月，中位年齡8個月。15例為麻疹并發(fā)細菌性肺炎患兒，男9例，女6例；年齡6個月～18個月，中位年齡8個月。麻疹并發(fā)細菌性肺炎的診斷除符合上述麻疹的診斷標準外，還需符合下述條件中的4條以上：①咳嗽，咳黃膿痰。②退疹時仍高熱或下降后再升高。③胸片示：肺部感染性病變。④血常規(guī)示：白細胞及中性粒細胞比例升高。⑤痰培養(yǎng)陽性[8]。平均熱程(7.0±2.5)d。21例有心肌受損(血清肌酸激酶同工酶升高或心電圖ST-T改變)，5例有肝功能受損(丙氨酸轉氨酶升高)，2例行機械通氣輔助呼吸治療，所有患兒均治愈出院，隨訪3個月無明顯異常。另選取20名同期到我院行健康體檢的兒童做為健康對照組，近期均無感染性疾病史，留取清晨空腹血進行檢測，其中男13例，女7例；年齡5個月～17個月，中位年齡8個月。3組患者年齡、性別無統(tǒng)計學差異。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。所有研究對象的家長均知情同意。

1.2 方法

1)標本采集。采集麻疹患兒急性期清晨空腹靜脈血3mL，乙二胺四乙酸(EDTA)鉀鹽抗凝。

2)流式細胞儀(Flow cytometry, FCM)檢測Th17細胞比率。取外周抗凝血50μL，與50μL RPMI1640培養(yǎng)液混勻，加入4μL刺激劑，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)刺激5h。取出刺激后的細胞，混勻，加入CD4-異硫氰酸熒光素(FITC)20μL，室溫避光孵育30min，加入破膜劑100μL，混勻，室溫放置5min，加抗人IL-17-藻紅蛋白(PE) 20μL于實驗管，對照管加入同型熒光標記的鼠抗人IgG 20μL，室溫孵育30min。洗滌、重懸、然后上機檢測Th17細胞占外周血單個核細胞比率。

3)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中IL-17及白介素6(Interleukin-6, IL-6)的水平。取全血1mL置于普通試管中，離心(3000r/min，15min，離心半徑15.2cm)后收集血清，采用ELISA法分別測定血清中IL-17及IL-6的水平，操作步驟嚴格按試劑說明進行。

4)免疫比濁法檢測血清中降鈣素(Procalcitonin, PCT)及C反應蛋白(C-reactive protein, CRP)的水平。半自動免疫比濁儀(r)PLUS、CRP及PCT測定試劑盒均購自ORION公司。采用散色比濁法，反應杯中加入配制好的反應液0.5mL(30mL緩沖液加入0.5mL試劑)，室溫(20～25℃)，反應25～35min，然后用免疫比濁儀測定。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 各組間Th17細胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT的比較

各組間Th17細胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT水平比較見表1，其中各組間外周血Th17細胞和IL-17、IL-6、PCT及CRP水平表達的差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩兩比較顯示，麻疹并發(fā)細菌性肺炎組的外周血Th17細胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT水平與普通麻疹組和對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；普通麻疹組與健康對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 各組間Th17細胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT的比較

注：健康對照組相比，aP<0.05；與麻疹并發(fā)細菌性肺炎組相比,bP<0.05。

2.2 麻疹并發(fā)肺炎組外周血Th17細胞表達與CRP及PCT的相關性

麻疹并發(fā)細菌性肺炎組的外周血Th17細胞表達與血清CRP及PCT均成正相關(r=0.63、0.67，P<0.05)。

3 討論

雖然麻疹在我國已經(jīng)得到了很好的控制，近年來無大規(guī)模流行，但有些地區(qū)仍有不少病例發(fā)生，甚至有小的流行或暴發(fā)。感染麻疹病毒后，機體發(fā)生暫時性的免疫抑制，表現(xiàn)為抗細菌免疫反應低下，部分患兒可并發(fā)嚴重肺炎危及生命[9]。本研究顯示，麻疹并發(fā)細菌性肺炎患兒的外周血Th17細胞和IL-17水平明顯高于普通麻疹患兒和對照組，同時，IL-6水平也是明顯升高的，而普通麻疹患兒與對照組間比較無明顯差異，這表明Th17細胞及IL-17參與了麻疹并發(fā)細菌性肺炎的發(fā)病過程。由此推測，當呼吸道粘膜受到外來細菌侵襲時，樹突狀細胞分泌產(chǎn)生大量的IL-6，誘導Th0細胞分化成大量的Th17細胞，并使Th17細胞活化和增殖[10]，產(chǎn)生IL-17。IL-17募集大量中性粒細胞到氣道，對細菌進行吞噬、清除，并且誘導一系列抗菌肽的產(chǎn)生，如防御素-2β及來自氣管上皮細胞的S100家族中的成員等[11-12]。因此，Th17細胞及IL-17對麻疹并發(fā)肺炎的呼吸道存在一定的保護作用。

此外，本實驗還顯示，麻疹并發(fā)肺炎患兒血清CRP及PCT均明顯升高。CRP和PCT是目前被認為是膿毒血癥和細菌感染的診斷指標。CRP是一種急性時相反應蛋白，與炎性反應程度密切相關[13,14]。PCT在健康人體中含量極低，病毒感染狀態(tài)下，血清PCT通常不升高，而在細菌毒素刺激下增高明顯，尤其是在嚴重感染狀態(tài)下升高得非常快[15]。麻疹并發(fā)肺炎患兒外周血Th17細胞表達與CRP及PCT均呈正相關，表明當麻疹患兒外周血Th17細胞比率及IL-17水平升高時，一定程度上提示著機體可能并發(fā)細菌感染，并且其升高的水平與炎癥輕重程度一致。

同時，值得注意的是，雖然IL-17具有一定的保護機制，但當麻疹患兒炎癥過重，IL-17產(chǎn)生過多，亦或由于麻疹病毒導致的免疫功能紊亂，致使大量炎癥因子“瀑布式”釋放入血，產(chǎn)生全身炎癥反應綜合征(SARS)，此時，血CRP、PCT及IL-6會異常升高，機體有可能發(fā)生全身多器官功能衰竭、感染性休克、彌漫性血管內凝血(DIC)而危及生命，此時IL-17已經(jīng)不再是一種保護作用。

綜上所述，麻疹患兒外周血Th17細胞及其效應因子IL-17表達升高可能與繼發(fā)細菌感染有關，可作為監(jiān)測病情的指標之一，但尚需擴大樣本量進行更為深入細致的研究。

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[編輯] 劉陽

2016-07-11

荊州市醫(yī)療衛(wèi)生科技計劃項目(2014051)。

付強(1977-)，男，主治醫(yī)師，博士，主要從事兒科疾病研究；通信作者：余孔貴，fuqiang5918@163.com。

R725.1

A

1673-1409(2016)30-0001-03

[引著格式]付強， 于會娜， 王婷，等. 麻疹患兒外周血輔助性T細胞17及其效應因子白介素-17的表達及臨床意義[J]. 長江大學學報(自科版),2016,13(30):1～3,11.