香蕉炭疽病拮抗菌Bs6602的誘變選育及防病作用研究

杜嬋娟, 付 崗*, 潘連富, 葉云峰, 晏衛(wèi)紅

(1. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所, 南寧 530007; 2. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所, 南寧 530007)

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香蕉炭疽病拮抗菌Bs6602的誘變選育及防病作用研究

杜嬋娟1, 付 崗1*, 潘連富1, 葉云峰2, 晏衛(wèi)紅1

(1. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所, 南寧 530007; 2. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所, 南寧 530007)

為了提高拮抗菌對香蕉炭疽病的抑菌活性,本研究采用紫外線-亞硝酸鈉復(fù)合誘變的方法對枯草芽胞桿菌Bs6602菌株進(jìn)行誘變。結(jié)果表明,該菌株的最佳誘變條件為在距離20 W紫外燈50 cm下照射15 s,然后經(jīng)300 mmol/L NaNO2誘變處理60 min。經(jīng)過2次復(fù)合誘變,最終得到1株抑菌活性最強(qiáng)的6B8-5菌株,其抑菌活性比出發(fā)菌株提高83.80%。咪鮮胺對突變株6B8-5的最低抑菌濃度(MIC)為20.83 μg/mL。連續(xù)轉(zhuǎn)接7代,突變株6B8-5的抑菌活性無明顯降低。6B8-5菌株的抑菌譜測試結(jié)果表明,其對13種植物病原真菌具有較強(qiáng)的抑菌活性,其中對多主棒孢霉的抑菌活性最強(qiáng),抑菌圈直徑達(dá)66.39 mm。對香蕉炭疽病防治的試驗(yàn)結(jié)果表明,香蕉貯藏15 d后,6B8-5菌株的防效明顯高于出發(fā)菌株,為63.94%;6B8-5菌株與43 200倍咪鮮胺稀釋液混用后,其防效最高達(dá)70.27%,與咪鮮胺1 350倍稀釋液防效相當(dāng)。

枯草芽胞桿菌; 香蕉炭疽病; 復(fù)合誘變; 防治效果

香蕉炭疽病由芭蕉炭疽菌(Colletotrichummusae)侵染引起,在香蕉大田生長期間就潛伏在果皮內(nèi),在香蕉采后貯運(yùn)期間隨著果實(shí)成熟逐漸顯現(xiàn)癥狀,造成蕉果嚴(yán)重腐爛,是香蕉采后貯藏、運(yùn)輸過程中發(fā)生的主要病害之一。目前對該病的防治主要還是采用化學(xué)藥劑[1]。然而長期大量使用化學(xué)藥劑,會使病原菌產(chǎn)生抗藥性,也會造成農(nóng)藥殘留,污染環(huán)境,危害人類健康。因此,采用無污染、無公害的采后處理方法防治香蕉炭疽病, 已引起研究人員的廣泛關(guān)注和重視。

枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)是一種大量存在于自然界的重要細(xì)菌,其生長快、營養(yǎng)簡單、并形成抗逆能力較強(qiáng)的芽胞,對多種植物病原真菌具有較好的拮抗作用,因此被廣泛應(yīng)用到農(nóng)業(yè)、環(huán)保等領(lǐng)域。自1945年Johnson[2]發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌產(chǎn)生抗菌物質(zhì)以后,便開始有大量的利用枯草芽胞桿菌防治植物病害的研究報道。Papavizas等[3]曾用枯草芽胞桿菌防治水稻的土傳病害。Hwang等[4]報道枯草芽胞桿菌可防治由Rhizoctonia引起的豌豆根腐病。王雅平等[5]從絲瓜根際土壤分離的枯草芽胞桿菌TG26菌株對小麥赤霉病和西瓜枯萎病有較強(qiáng)的抑制作用。顧真榮等[6]用枯草芽胞桿菌G3防治菜豆和茄子苗期炭疽病和菌核病。尹華群等[7]從煙草青枯病流行區(qū)分離到1株內(nèi)生枯草芽胞桿菌,該菌株的田間防效為82.5%。然而,目前利用枯草芽胞桿菌對香蕉炭疽病進(jìn)行防治的報道仍不多見[8-10]。本研究擬以前期篩選獲得的1株野生優(yōu)良枯草芽胞桿菌Bs6602菌株作為出發(fā)菌株,采用紫外線-亞硝酸鈉復(fù)合誘變法對其進(jìn)行誘變處理,篩選出對香蕉炭疽病抑菌活性更強(qiáng)、傳代穩(wěn)定的正突變菌株,并探討其與化學(xué)藥劑復(fù)配后的抗病效果,以提高其對香蕉炭疽病的防效,旨在為香蕉炭疽病的無害化防治和香蕉病害微生物農(nóng)藥的研制提供可以利用的資源。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株

拮抗菌:枯草芽胞桿菌Bs6602菌株,從香蕉根圍分離篩選得到。

病原菌:芭蕉炭疽菌(Colletotrichummusae)、新月彎孢(Curvularialunata)、喙突臍蠕孢(Exserohilumrostratum)、簇生小竇氏霉(Deightoniellatorulosa)、香蕉鏈格孢(Alternariamusae)、彌澤那擬盤多毛孢(Pestalotiopsismenezesiana)、多主棒孢(Corynesporacassiicola)、香蕉大莖點(diǎn)霉(Macrophomamusae)、串珠鐮孢(Fusariummoniliforme)、尖鐮孢西瓜?；?F.oxysporumf.sp.niveum)、尖鐮孢古巴專化型(F.oxysporumf.sp.cubense)、細(xì)鏈格孢(Alternariaalternata)、膠孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)。 以上菌株均由廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所生物防治研究室分離保存。

1.1.2 培養(yǎng)基

NA培養(yǎng)基:牛肉膏3 g,蛋白胨10 g,NaCl 5 g,瓊脂15 g,水1 000 mL,pH 7.0;以不加瓊脂作為液體培養(yǎng)基。

PSA培養(yǎng)基:馬鈴薯去皮后,取200 g切成小塊煮沸30 min,用紗布過濾,濾汁加入蔗糖20 g,瓊脂15 g,充分溶解后,補(bǔ)水至1 000 mL。

1.1.3 供試香蕉

試驗(yàn)香蕉品種為‘威廉斯B6’,采自廣西南寧市武鳴縣香蕉園,采收前3個月內(nèi)未噴施殺菌劑。

1.2 方法

1.2.1 拮抗菌種子液的制備

將拮抗菌株接入NA液體培養(yǎng)基中,置28℃,120 r/min振蕩培養(yǎng)16 h后,5 000 r/min離心3 min,棄上清液,沉淀用無菌水洗滌3次,制成108cfu/mL的菌懸液,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 拮抗菌發(fā)酵液的制備

將拮抗菌株的種子液按1%(V/V)接種量移入NA液體培養(yǎng)基中,于28℃,120 r/min振蕩培養(yǎng)72 h,即得發(fā)酵液,此時菌液濃度約為109cfu/mL。

1.2.3 拮抗菌株抑菌活性的測定

將香蕉炭疽病菌接入PSA試管斜面上,于28℃下恒溫培養(yǎng)10 d,每管加入5 mL無菌水,輕微振蕩將孢子洗下,收集得到香蕉炭疽病菌的孢子懸浮液(孢子濃度約為106cfu/mL),4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

在9 cm培養(yǎng)皿中加入5 mL熔化的2%水瓊脂,冷凝后在平板上距中央2.5 cm處對稱放置3個滅菌牛津杯。將熔化的PSA培養(yǎng)基冷卻至45℃,加入1%(V/V)香蕉炭疽病菌孢子液,振蕩搖勻,迅速加入到瓊脂平板上,待凝固后取出牛津杯,形成直徑7 mm的小孔,置28℃培養(yǎng)6 h。將待測拮抗菌株的發(fā)酵液于5 000 r/min離心3 min,上清液用細(xì)菌過濾器過濾后,分別取20 μL加入每個小孔,以無菌水為對照,每處理重復(fù)3次,每重復(fù)3個平板。然后置28℃下恒溫培養(yǎng),48 h后測量抑菌圈直徑d(mm)。計(jì)算突變菌株的抑菌活性提高率:

抑菌活性提高率(%)=(d突變菌株-d出發(fā)菌株)/(d出發(fā)菌株-7)×100。

1.2.4 Bs6602菌株紫外誘變條件的確定

20 W紫外燈預(yù)熱20 min后,取15 mL Bs6602菌株的種子液至滅菌的培養(yǎng)皿中(內(nèi)置一滅菌磁力攪拌子),并放置在磁力攪拌器上,調(diào)整照射距離為50 cm,打開皿蓋后,分別攪拌照射5、10、15、20、25、30和35 s;以未經(jīng)紫外照射的菌液為對照,每個處理3個重復(fù)。用無菌水將照射后的菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,分別取100 μL涂布至NA平板上,置28℃下避光培養(yǎng),誘變后所有操作均在紅燈下進(jìn)行。24 h后,對平皿上的單菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算致死率。選擇致死率90%左右的條件為紫外誘變的最適條件。

致死率(%)=(對照活菌數(shù)-誘變后活菌數(shù))/對照活菌數(shù)×100。

1.2.5 Bs6602菌株亞硝酸鈉誘變條件的確定

分別取5 mL Bs6602菌株的種子液,測定亞硝酸鈉誘變的最適濃度時,加入滅菌的3 mol/L NaNO2溶液,使NaNO2濃度分別為25、50、100、150、200、250、300和350 mmol/L,充分混勻后反應(yīng)30 min;而測定亞硝酸鈉誘變的最適時間時,則加入600 μL滅菌的3 mol/L NaNO2溶液和400 μL無菌水,充分混勻后反應(yīng)10、20、30、40、50、60和70 min。最后分別加入300 μL 5.6 mol/L 的Na2HPO4緩沖液(pH 8.6)終止反應(yīng),以未經(jīng)NaNO2處理的菌液為對照,每個處理3個重復(fù)。用無菌水將處理后的菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,各取100 μL涂布至NA平板上,于28℃下培養(yǎng)24 h后,對平皿上的單菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算致死率。致死率計(jì)算同1.2.4。選擇致死率90%左右的條件為亞硝酸鈉誘變的最適條件。

1.2.6 Bs6602菌株的紫外線-亞硝酸鈉復(fù)合誘變

將Bs6602菌株的種子液以紫外誘變的最適條件進(jìn)行誘變反應(yīng),對誘變后平皿上的單菌落進(jìn)行抑菌活性的測定。然后選取抑菌活性最高的5株突變菌株以亞硝酸鈉誘變的最適條件進(jìn)行誘變反應(yīng),對誘變后平皿上的單菌落進(jìn)行抑菌活性的測定,保存抑菌活性最高的5株突變菌株。Bs6602菌株的紫外線-亞硝酸鈉復(fù)合誘變共進(jìn)行2次。

1.2.7 誘變菌株的遺傳穩(wěn)定性測定

將經(jīng)紫外線-亞硝酸鈉復(fù)合誘變得到的抑菌活性最高的誘變菌株,轉(zhuǎn)接到NA試管斜面上,28℃下培養(yǎng)24 h,置4℃冰箱保存,每隔7 d轉(zhuǎn)接1次,連續(xù)轉(zhuǎn)接10代后,參照1.2.3的方法測定各代菌株的抑菌活性。

1.2.8 Bs6602野生菌株和誘變菌株的抑菌譜測試

以Bs6602菌株和抑菌活性最高的誘變菌株作為測試菌株,分別測定其對供試的13種植物病原真菌的抑菌活性。方法參照1.2.7。

1.2.9 咪鮮胺對Bs6602野生菌株和誘變菌株最低抑菌濃度(MIC)的測定

采用試管二倍稀釋法,用NA液體培養(yǎng)基(1 mL/管)將450 g/L咪鮮胺對倍稀釋成系列濃度,使咪鮮胺的稀釋濃度分別為675、1 350、2 700、5 400、10 800、21 600、43 200、86 400、172 800、345 600和691 200倍液,每個濃度3次重復(fù),然后加入0.1 mL供試菌株的種子液。以加菌液但不加咪鮮胺的試管為陽性對照,以不加菌液和咪鮮胺的試管為空白對照。置28℃,120 r/min振蕩培養(yǎng)24 h,以渾濁度為指標(biāo)檢查管中是否有細(xì)菌生長。管內(nèi)無細(xì)菌生長而咪鮮胺濃度最低者,即為咪鮮胺對該試驗(yàn)菌株的MIC。

1.2.10 香蕉炭疽病的防治試驗(yàn)

田間采收八成熟的蕉果,洗凈晾干,并除去傷病的蕉果,落梭后分成每梭5～6個蕉果。共設(shè)置6個處理:處理Ⅰ,Bs6602菌株發(fā)酵液的10倍稀釋液;處理Ⅱ,6B8-5菌株發(fā)酵液的10倍稀釋液;處理Ⅲ,咪鮮胺1 350倍液;處理Ⅳ,咪鮮胺43 200倍液;處理Ⅴ:Bs6602菌株發(fā)酵液的10倍稀釋液(含43 200倍咪鮮胺);處理Ⅵ:6B8-5菌株發(fā)酵液的10倍稀釋液(含43 200倍咪鮮胺);處理Ⅶ:清水對照。將蕉果在以上各處理中浸泡2 min后取出,室溫下晾干,用塑料袋封裝后,放入紙箱,置25℃下,RH 78%放置貯藏。每個處理設(shè)3次重復(fù),每重復(fù)5 kg蕉果。

在蕉果開始發(fā)病時進(jìn)行第1次病情調(diào)查,蕉果完全成熟后進(jìn)行第2次調(diào)查;香蕉炭疽病的病情分級參照Fu等[11]的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

病情指數(shù)=∑(各級病果數(shù)×相對級數(shù)值)/(調(diào)查總果數(shù)×9)×100;

防治效果(%)=(對照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/對照區(qū)病情指數(shù)×100。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

研究所得數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行匯總、平均值計(jì)算和作圖,差異顯著性采用DPS7.05軟件的LSD法進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫外誘變時間對Bs6602菌株致死率的影響

由圖1可知,紫外線對Bs6602菌株的致死率隨著其照射時間的增加而提高。當(dāng)照射時間為15 s時,Bs6602菌株的致死率為91.49%;當(dāng)照射時間大于25 s時,Bs6602菌株的致死率均趨于平緩并接近100%。

圖1 紫外誘變時間對Bs6602菌株致死率的影響Fig.1 Effects of UV mutation time on the lethality of strain Bs6602

2.2 亞硝酸鈉濃度對Bs6602菌株致死率的影響

由圖2可知,NaNO2對Bs6602菌株的致死率隨著其濃度的增加而提高。當(dāng)NaNO2的濃度為300 mmol/L時,其對Bs6602菌株的致死率為87.86%。

圖2 NaNO2濃度對Bs6602菌株致死率的影響Fig.2 Effects of NaNO2 concentration on the lethality of strain Bs6602

2.3 亞硝酸鈉誘變時間對Bs6602菌株致死率的影響

由圖3可知,NaNO2對Bs6602菌株的致死率隨著其誘變時間的增加而提高。當(dāng)NaNO2誘變的時間為60 min時,其對Bs6602菌株的致死率為90.78%。

圖3 NaNO2誘變時間對Bs6602菌株致死率的影響Fig.3 Effects of NaNO2 mutation time on the lethality of strain Bs6602

2.4 Bs6602菌株的紫外線-亞硝酸鈉復(fù)合誘變

通過兩次紫外線-亞硝酸鈉復(fù)合誘變,以Bs6602菌株為出發(fā)菌株共得到143株正突變菌株。經(jīng)過抑菌活性的測定,最終得到5株對香蕉炭疽病抑菌活性最高的突變菌株(圖4)。由表1可知,5株突變菌株的抑菌圈直徑為41.01～ 44.18 mm,其抑菌活性均比Bs6602菌株提高了70.03%以上。其中,6B8-5菌株的抑菌活性最高,提高了83.80%。

圖4 拮抗菌株對香蕉炭疽病菌的抑菌作用Fig.4 Inhibition of antagonistic strains against Colletotrichum musae

此外本研究還發(fā)現(xiàn),紫外線或亞硝酸鈉的單一誘變和紫外-亞硝酸鈉復(fù)合誘變均能提高Bs6602菌株的抑菌活性。與紫外線誘變相比,進(jìn)行復(fù)合誘變后Bs6602菌株的抑菌活性提高了30.91%;而與亞硝酸鈉誘變相比,則提高了18.35%。由此可知,復(fù)合誘變比單一誘變更能提高Bs6602菌株的抑菌活性。

2.5 突變株6B8-5菌株的遺傳穩(wěn)定性

將突變株6B8-5菌株每隔7 d傳代1次,連續(xù)傳代10次,由圖5可知,隨著傳代次數(shù)的增加,該菌株的抑菌活性逐漸降低,但7代內(nèi)其抑菌活性無明顯變化,表明6B8-5菌株在7代內(nèi)具有較好的遺傳穩(wěn)定性。

表1 誘變菌株的抑菌活性Table 1 Antifungal activity of mutant strains

圖5 6B8-5菌株的遺傳穩(wěn)定性Fig.5 Genetic stability of strain 6B8-5

2.6 原始菌株Bs6602及誘變菌株6B8-5抑菌譜的測試

由圖6可知,Bs6602及其突變株6B8-5菌株對13種植物病原真菌均有較強(qiáng)的抑菌活性。Bs6602菌株的抑菌圈直徑在8.44～ 42.14 mm之間,而6B8-5菌株的則在11.93～ 66.39 mm之間。突變株6B8-5菌株的抑菌活性均比出發(fā)菌株Bs6602菌株有所提高,其提高率在6.65%～242.92%之間。其中,6B8-5菌株對多主棒孢霉(Corynesporacassiicola)、簇生小竇氏霉(Deightoniellatorulosa)和喙突臍蠕孢(Exserohilumrostratum)的抑菌作用最強(qiáng),其抑菌圈直徑分別為66.39、53.69和45.18 mm。

圖6 拮抗菌株對植物病原真菌的抑菌作用Fig.6 Inhibition of antagonistic strains against plant pathogenic fungi

2.7 咪鮮胺對Bs6602菌株及其突變株6B8-5菌株的MIC

最低抑菌濃度的測試結(jié)果表明,咪鮮胺對Bs6602菌株及其突變株6B8-5菌株的MIC值相同,均為20.83 μg/mL。當(dāng)咪鮮胺的稀釋倍數(shù)大于43 200倍,即咪鮮胺濃度小于10.42 μg/mL時,其對2株菌株的生長無影響。

2.8 拮抗菌株對香蕉炭疽病的防治效果

由表2可知,香蕉貯藏15 d開始發(fā)病,各處理病情指數(shù)在13.78～55.15之間;突變株6B8-5菌株的防效為63.94%,顯著高于出發(fā)菌Bs6602菌株(51.83%);6B8-5菌株與43 200倍咪鮮胺稀釋液混用后,其防效為70.27%,與咪鮮胺1 350倍稀釋液(75.01%)相當(dāng)。貯藏至17 d 香蕉完全成熟,各處理區(qū)的病情指數(shù)均有增長,在28.48～ 95.71之間;6B8-5菌株與43 200倍咪鮮胺稀釋液混用的處理,其防效(58.85%)與咪鮮胺43 200倍稀釋液(55.59%)差異不顯著。兩次調(diào)查結(jié)果顯示,6B8-5菌株與43 200倍咪鮮胺稀釋液液混用后的防效均高于單獨(dú)使用6B8-5菌株。

表2 拮抗菌株對香蕉炭疽病的防治效果Table 2 Control effect of antagonistic strains against Colletotrichum musae

3 討論

野生型微生物大都存在生長緩慢、代謝物生產(chǎn)能力差、效價低等缺點(diǎn),可采用適宜的誘變技術(shù)對其進(jìn)行菌種改良。復(fù)合誘變是目前微生物育種的重要手段之一。盧燕回等[12]、游玟娟等[13]、司賀龍等[14]采用紫外線-亞硝酸鹽復(fù)合誘變法對枯草芽胞桿菌進(jìn)行誘變,均得到抑菌活性或產(chǎn)酶能力提高的正突變菌株。與他們的研究結(jié)果相似,本研究以野生枯草芽胞桿菌Bs6602菌株作為出發(fā)菌株,經(jīng)過紫外線-亞硝酸鈉復(fù)合誘變,得到1株對香蕉炭疽病菌抑菌活性較高的突變株6B8-5菌株,其抑菌活性比出發(fā)菌株提高了83.80%。

而在誘變劑量的選擇上,通常對野生菌株的篩選趨向于采取較高的致死率,以90%左右的效果較好,雖然負(fù)突變株多,但變異幅度大,高產(chǎn)菌株的出現(xiàn)率較高,更有利于獲得正突變株;對于經(jīng)過長期誘變的微生物,則以70%～ 80%或更低的致死率較好,不會導(dǎo)致太多的負(fù)突變株和形態(tài)突變株,更利于高產(chǎn)菌株的穩(wěn)定。因此本研究對Bs6602菌株進(jìn)行誘變時,選擇致死率為90%左右的誘變條件,提高該菌株的誘變效率,以篩選高抑菌活性的突變菌株。

此外,由于不同誘變因子的作用機(jī)理及特異性作用位點(diǎn)不同,如紫外線主要作用于DNA的嘧啶堿基,而亞硝酸則主要作用于DNA分子的嘌呤堿基,因此與單一誘變相比,采用復(fù)合誘變可以得到更多的突變類型,從而提高誘變效率。梁亮等[15]利用紫外線-亞硝酸鈉對谷氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)進(jìn)行復(fù)合誘變,發(fā)現(xiàn)經(jīng)復(fù)合誘變處理的菌株產(chǎn)L-組氨酸的產(chǎn)量高于單因子誘變。與其研究結(jié)果類似,本研究結(jié)果表明,經(jīng)過復(fù)合誘變后Bs6602菌株的抑菌活性比紫外線誘變提高了30.91%,比亞硝酸鈉誘變提高了18.35%。

本研究中6B8-5菌株對香蕉炭疽病的防治效果顯示,貯藏15 d后,該菌株的防效為63.94%,高于柳鳳等[16]用解淀粉芽胞桿菌防治香蕉炭疽病處理10 d后的結(jié)果(56.67%)。而何紅等[8]用枯草芽胞桿菌BS-2菌株防治香蕉炭疽病,當(dāng)先接種病原菌,24 h后再接種BS-2菌株,15 d后防效為51.16%,低于本研究的結(jié)果;當(dāng)先接種BS-2菌株,24 h再接種病原菌,15 d后防效為100%,高于本研究的結(jié)果。引起這一現(xiàn)象的原因,可能是由于先接種拮抗菌,使其在蕉果表面占領(lǐng)生態(tài)位,并快速繁殖,產(chǎn)生大量的抗菌物質(zhì),因此表現(xiàn)出較高的防治效果。然而,香蕉炭疽病的病菌在香蕉生長期內(nèi)就潛伏在果皮上,在香蕉成熟后才表現(xiàn)癥狀。因此,本研究選用3個月內(nèi)未噴施殺菌劑的蕉果進(jìn)行試驗(yàn),使試驗(yàn)結(jié)果能客觀地反映6B8-5菌株對香蕉炭疽病的防治效果。

本研究結(jié)果表明,突變株6B8-5菌株對香蕉炭疽病的防效高于出發(fā)菌Bs6602菌株,但與生產(chǎn)上所使用的咪鮮胺1 350倍稀釋液相比則存在一定的差距。究其原因,可能是因?yàn)榘l(fā)酵液中起主要作用的活性抗菌物質(zhì)濃度較低,因此可以考慮優(yōu)化發(fā)酵條件,并提取活性物質(zhì),以提高拮抗菌株對香蕉炭疽病的防治效果。此外,6B8-5菌株與咪鮮胺43 200倍稀釋液混用后表現(xiàn)出較好的防治效果,香蕉貯藏15 d后其防效與咪鮮胺1 350倍稀釋液差異不顯著;至17 d,其防效仍與咪鮮胺43 200倍稀釋液相當(dāng)。表明該菌株與低濃度咪鮮胺混用,對香蕉炭疽病的防治具有增效作用,應(yīng)用時可達(dá)到減少農(nóng)藥使用量的目的。而6B8-5菌株對香蕉生產(chǎn)上重要的病原真菌都具有較強(qiáng)的抑制作用,因此利用該菌株開發(fā)高效、對環(huán)境友好的生物農(nóng)藥,對香蕉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。

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(責(zé)任編輯：田 喆)

Mutation breeding and control effect of banana anthracnose antagonistic strain Bs6602

Du Chanjuan1, Fu Gang1, Pan Lianfu1, Ye Yunfeng2, Yan Weihong1

(1. Research Institute of Microbiology, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning 530007, China;2. Horticulture Research Institute, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning 530007, China)

In order to improve the antifungal activity of antagonistic bacteria on banana anthracnose,Bacillussubtilisstrain Bs6602 was mutated by UV-NaNO2compound. The results showed that the best mutation condition was irradiated by 20 W UV for 15 s when the irradiation distance was 50 cm, and then treated with 300 mmol/L NaNO2for 60 min. After mutated twice, the strain 6B8-5 was screened for the strongest antifungal activity. Its antifungal activity was increased by 83.80% compared with the original strain. Minimal inhibitory concentration (MIC) of prochloraz against strain 6B8-5 was 20.83 μg/mL.The antifungal activity of strain 6B8-5 was not reduced significantly after transferred for 7 generations continuously. The results of inhibition spectrum test showed that strain 6B8-5 had strong antifungal activity against 13 plant pathogenic fungi. Its antifungal activity againstCorynesporacassiicolawas the strongest, and the diameter of antifungal circle was 66.39 mm. The results of banana anthracnose control test showed that the control effect of strain 6B8-5 was 63.94%, significantly higher than that of the original strain, after stored for 15 days. When the strain 6B8-5 was mixed with the 43 200 times dilution of prochloraz, the control effect on banana anthracnose was 70.27%, similar to that with 1 350 times dilution of prochloraz.

Bacillussubtilis; banana anthracnose; compound mutation; control effect

2015-10-08

2016-01-08

廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013GXNSFBB053008)；廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(2015YT79, 2015JZ61)

S 436.681

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.05.011

* 通信作者 E-mail：fug110@gxaas.net