聚維酮碘對凡納濱對蝦偷死綜合征的防治研究

吳崗，周啟良，郭秀玲，季晨，莫澤權(quán)，但學(xué)明

（1.深圳市安多福動物藥業(yè)有限公司，廣東深圳 518083；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院，廣東廣州 510642）

聚維酮碘對凡納濱對蝦偷死綜合征的防治研究

吳崗1，周啟良2，郭秀玲1，季晨1，莫澤權(quán)2，但學(xué)明2

（1.深圳市安多福動物藥業(yè)有限公司，廣東深圳 518083；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院，廣東廣州 510642）

對蝦偷死綜合征對凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重危害，但是目前還無有效的防控措施。本實(shí)驗(yàn)開展了聚維酮碘的體外殺菌實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)和生物安全性實(shí)驗(yàn)，對聚維酮碘防控凡納濱對蝦偷死綜合征的作用進(jìn)行了系統(tǒng)的評估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，聚維酮碘能有效殺滅常見水產(chǎn)致病菌如副溶血弧菌、擬態(tài)弧菌、無乳鏈球菌；投喂含不同濃度聚維酮碘的飼料均未對凡納濱對蝦肝胰腺造成組織損傷；拌料投喂和全塘潑灑聚維酮碘可以讓偷死病的死亡量明顯下降；全塘潑灑聚維酮碘后水泥養(yǎng)蝦池浮游動物和藻類的密度會顯著升高。

聚維酮碘；凡納濱對蝦；偷死綜合征

凡納濱對蝦因其耐溫、耐鹽廣，生長速度快，含肉率高，肉質(zhì)鮮美等特點(diǎn)，已逐漸成為我國重要的養(yǎng)殖蝦品種，并與中國對蝦和斑節(jié)對蝦一起被列為世界上養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的三大蝦類[1]。然而隨著集約化養(yǎng)殖規(guī)模越來越大，養(yǎng)殖密度不斷攀升，凡納濱對蝦在養(yǎng)殖過程中也出現(xiàn)了各種疾病，對對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p失，其中因大部分對蝦死亡前無明顯征兆，且死蝦外表無明顯發(fā)病癥狀，故被稱為“偷死綜合征”或“偷死病”[2-7]。

現(xiàn)在對偷死綜合征產(chǎn)生的原因仍存在爭議，顧水江[8]認(rèn)為偷死病的發(fā)生一方面是由于水體中條件性致病菌在水質(zhì)富營養(yǎng)化和天氣驟變等條件下大量繁殖，使得塘底缺氧，甚至感染健康的對蝦，最終導(dǎo)致大量的死亡；另一方面惡劣的天氣對蝦長期處于應(yīng)激的狀態(tài)，抵抗力下降，既而得病。然而也有報道指出在發(fā)生大規(guī)模的急性偷死癥的蝦塘并沒有檢出病毒或細(xì)菌等病原；另外在一些連續(xù)降雨的月份也并未出現(xiàn)大規(guī)模的急性死亡現(xiàn)象[9]。而近年來也有學(xué)者提出該病主要是由一種偷死野田村病毒（CMNV）所引起的[10]，雖然現(xiàn)在該病的發(fā)病原因還沒有定論，但都認(rèn)為水質(zhì)惡化是導(dǎo)致該病發(fā)生的主要條件。

聚維酮碘是聚乙烯吡咯烷酮與碘的絡(luò)合物，對細(xì)菌、病毒乃至寄生蟲都有很好的消毒殺菌效果，作為一種高效低毒的消毒劑在水產(chǎn)中已經(jīng)得到廣泛地使用[11-14]。本實(shí)驗(yàn)選取出現(xiàn)偷死現(xiàn)象的蝦塘，通過拌料投喂和潑灑聚維酮碘進(jìn)行大塘試驗(yàn)，研究聚維酮碘能否對該病的防控起到作用，旨在為該病的防治提供對策。此外，筆者對潑灑聚維酮碘的蝦塘水質(zhì)及浮游生物分別進(jìn)行了檢測和統(tǒng)計，分析該藥對水質(zhì)及生物群落產(chǎn)生的影響，有助于進(jìn)一步闡明聚維酮碘有效防控凡納濱對蝦偷死病的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)所用的凡納濱對蝦購自正大水產(chǎn)（珠海）有限公司斗門蝦苗場，體質(zhì)量為（6.9±1.2）g，體長為（10.8±0.8）cm。先使用50 mg/L聚維酮碘對蝦消毒0.5 h，然后在循環(huán)水系統(tǒng)中暫養(yǎng)7 d，海水鹽度為8，水溫29℃。每天早晚各投喂蝦體質(zhì)量2%的蝦料，1 h后吸污，每天換20%的海水。

實(shí)驗(yàn)藥物為深圳安多福動物藥業(yè)公司生產(chǎn)的“漁多?！本劬S酮碘溶液（口服），有效碘濃度為5%，實(shí)驗(yàn)中將此藥液作為原藥按要求配制成不同的濃度，所有實(shí)驗(yàn)使用的藥液均在使用前配制。

實(shí)驗(yàn)使用的水產(chǎn)動物致病菌包括副溶血弧菌、擬態(tài)弧菌和無乳鏈球菌，均為華南農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)動物病害防控實(shí)驗(yàn)室保存菌株。

1.2 方法

1.2.1 聚維酮碘體外殺菌實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)室保種的副溶血弧菌、擬態(tài)弧菌、無乳鏈球菌分別接種于TCBS培養(yǎng)基、lB培養(yǎng)基、BHI培養(yǎng)基上進(jìn)行劃板，各挑一單菌落于lB液體培養(yǎng)基，30℃，150 rpm培養(yǎng)12 h，混勻后取100 μL菌液梯度稀釋至105cfu/ mL。加入聚維酮碘溶液于上述稀釋后的菌液中，使其終濃度分別為0、2、4、6、8、10、20、50 mg/L，孵育15 min后分別涂布于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12 h后進(jìn)行菌落計數(shù)。

1.2.2 投喂聚維酮碘對凡納濱對蝦肝胰腺的影響使用噴灑的方式配制5種含不同聚維酮碘濃度的飼料：0 mL藥液/kg飼料、2.5 mL藥液/kg飼料、5 mL藥液/kg飼料、10 mL藥液/kg飼料、25 mL藥液/ kg飼料；實(shí)驗(yàn)蝦分為5組，每組30尾蝦，每天早晚分別投喂上述飼料，投喂量為蝦體質(zhì)量2%，連續(xù)投喂15 d，然后取各組對蝦的肝胰腺使用Bouin氏液固定24 h，水洗后經(jīng)70%、80%、95%、100%酒精逐級脫水各1 h，使用二甲苯透明15 min，浸入熱石蠟2 h后進(jìn)行包埋，經(jīng)4 μm切片后使用HE染色，封片觀察。

1.2.3 聚維酮碘拌料投喂和全池潑灑對偷死病的防治實(shí)驗(yàn)于廣州番禺區(qū)三民島某凡納濱對蝦養(yǎng)殖場進(jìn)行，共6個實(shí)驗(yàn)塘，每個塘面積均為667 m2，水深1.2 m，放苗時間為2015年3月31號，于5月8號，出現(xiàn)零星死亡，早期并不嚴(yán)重，隨后死亡數(shù)量逐漸增加，每天從增氧機(jī)下面能撈到2～3 kg的死蝦。對蝦死亡前無明顯征兆，且死蝦外表無明顯發(fā)病癥狀，與偷死現(xiàn)象符合。于5月18號開始實(shí)驗(yàn)，6號塘不用藥作為陰性對照，1～5號塘均使用含聚維酮碘藥液10 mL/kg的飼料進(jìn)行投喂，另外1～3塘每個塘潑灑500 mL聚維酮碘藥液，4～5號塘每個塘潑灑250 mL聚維酮碘藥液，每天1次，連續(xù)3 d，然后每天記錄各塘死亡情況。

1.2.4 潑灑聚維酮碘對對蝦養(yǎng)殖水體的影響本實(shí)驗(yàn)分別在養(yǎng)殖凡納濱對蝦的土池和水泥池中進(jìn)行，面積均為667 m2，水深1.2 m。在潑灑聚維酮碘前，連續(xù)5 d于10：00采取水面下40 cm處水樣檢測氨態(tài)氮、亞硝酸鹽氮、溶氧、水溫、pH值等水質(zhì)指標(biāo)及浮游動植物密度。第6天和第12天土池和水泥池各潑灑500 mL聚維酮碘，潑藥當(dāng)天分別于潑藥后0、4、8 h采集水樣檢測水質(zhì)指標(biāo)和浮游生物密度，其余時間每天10：00采取水樣檢測。

2 結(jié)果

2.1 聚維酮碘體外殺菌效果

不同濃度藥物處理后，對每種細(xì)菌菌落計數(shù)，結(jié)果折算為相對存活率（見圖1）。結(jié)果顯示聚維酮碘對副溶血弧菌、擬態(tài)弧菌和無乳鏈球菌均有顯著的殺菌作用。

2.2 投喂聚維酮碘對凡納濱對蝦肝胰腺的影響

組織切片顯示（見圖2），與空白組相比，投喂不同濃度聚維酮碘的凡納濱對蝦肝胰腺并未出現(xiàn)明顯組織變化。各組的肝胰腺都保持完整的肝小管結(jié)構(gòu)，呈四角或五角星形且輪廓清晰。4種肝胰腺的主要細(xì)胞：吸收細(xì)胞、分泌細(xì)胞、纖維細(xì)胞和胚細(xì)胞均未見異常。

2.3 拌料和潑灑聚維酮碘對偷死病的防治作用

各拌料和潑灑聚維酮碘組及對照組死亡情況如圖3所示?？梢园l(fā)現(xiàn)對照組依然每天有近3 kg的對蝦死亡，而各實(shí)驗(yàn)組對蝦的死亡情況在用藥后2～3天就明顯得到改善，其中1～3號塘效果最為明顯。

2.4 潑灑聚維酮碘對對蝦養(yǎng)殖水體的影響

實(shí)驗(yàn)期間各池均未發(fā)現(xiàn)對蝦大量死亡的現(xiàn)象，水泥池水溫29.7～32.2℃，溶氧>4.50 mg/L，pH值6.3～8.7，亞硝酸鹽濃度<0.8 mg/L；土池水溫為29.5～31.7℃，溶氧>4.50 mg/L，pH值6.7～8.4，亞硝酸鹽濃度<0.8 mg/L。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示潑灑聚維酮碘后水泥池藻類和浮游動物的密度顯著升高（見圖4—6）。

3 討論

圖1 聚維酮碘體外殺菌效果

圖2 對蝦肝胰腺切片

圖3 用藥后對蝦的死亡情況

圖4 用藥后亞硝酸鹽含量的變化

圖5 用藥后藻類密度的變化

圖6 用藥后浮游動物密度的變化

聚維酮碘通過緩慢釋放碘離子，可直接作用于病毒、細(xì)菌等病原，破壞其蛋白活性達(dá)到消毒效果[15-17]。此外，聚維酮碘是一種低毒安全的消毒劑，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中得到廣泛的應(yīng)用。張萍等[18]報道了聚維酮碘對凡納濱對蝦無節(jié)幼體急性毒性試驗(yàn)，認(rèn)為其24、48 h的半數(shù)致死濃度和安全濃度分別為8.737、6.512、和0.650 mg/L。而熊斌[19]則認(rèn)為聚維酮碘對凡納濱對蝦仔蝦（體質(zhì)量為7.7 mg）24、48 h的半數(shù)致死濃度和安全濃度分別為4.293、3.162、0.515 mg/ L。高曉華[20]也報道了聚維酮碘對凡納濱對蝦成蝦的96的半數(shù)致死濃度和安全濃度分別為7.781和0.78 mg/L。綜上所述，聚維酮碘對不同時期對蝦無論是半數(shù)致死濃度還是安全濃度都有所差異。本實(shí)驗(yàn)中投喂不同濃度的聚維酮碘并未引起對蝦的死亡，且切片結(jié)果顯示投喂不同濃度的聚維酮碘并未引起對蝦肝胰腺的病理變化。因此筆者認(rèn)為使用深圳安多福動物藥業(yè)公司生產(chǎn)的聚維酮碘拌飼投喂凡納濱對蝦成蝦是安全的，該方法可以應(yīng)用到生產(chǎn)當(dāng)中。并且該公司的聚維酮碘（口服）已經(jīng)獲得了國家的新獸藥證書，是目前中國唯一的口服類聚維酮碘。

聚維酮碘對偷死病防治的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相對于對照組，5個試驗(yàn)塘的對蝦死亡量顯著下降，偷死現(xiàn)象得到有效控制。另外，潑灑500 mL聚維酮碘藥液的1—3號塘效果尤為顯著，潑灑250 mL聚維酮碘藥液的4、5號塘也在潑灑后的第3、4天得到控制。因此，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)拌飼投喂和全池潑灑聚維酮碘相結(jié)合的方式可以顯著降低偷死病的病死率。

雖然使用聚維酮碘能一定程度上控制偷死病的發(fā)生，但對其產(chǎn)生機(jī)制尚未得到充分研究。筆者認(rèn)為聚維酮碘主要是通過改變水質(zhì)和直接、持續(xù)地殺滅病原來完成的。首先，體外的殺菌結(jié)果顯示聚維酮碘能高效殺滅水體的致病菌。其次，高曉華[20]指出在一定濃度下，聚維酮碘可促進(jìn)小球藻的生長，而益生菌對其的最小耐藥濃度較高；此外聚維酮碘對大型蚤的半數(shù)致死濃度也比常用的消毒藥物如溴氯海因、二氯異氰尿酸、三氯異氰尿酸等高23～48倍；最后聚維酮碘還可降低水體氨氮和亞硝酸鹽等有害因子。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了聚維酮碘的確不會影響浮游動物和藻類的生長，在水泥池中還能促進(jìn)浮游生物的繁殖。

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The prevention of povidone iodine to Litopenaeus vannamei AHNS

Wu Gang，Zhou Qiliang，Guo Xiuling1，Ji Chen1，Mo Zequan2，Dan Xueming2
（1.ADF Animal Pharmaceutical Co.ltd.，Shenzhen 518083，China；2.College of Animal Science，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China）

Acute hepatopancreas necrosis syndrome(AHNS)had caused destructive economic losses in the breeding of Litopenaeus vannamei，and there was no effective way to control it so far.In this experiment，we evaluated the disinfectant effect and bio-safety test of povidone iodine(PVP-I).Afterwards，a pond trial was conducted to observe whether the shrimp with AHNS could be controlled by feeding PVP-I feed as well as PVP-I splashing.The results showed that the PVP-I had a strong disinfectant effect and was able to kill the common aquatic pathogenic bacteria such as Vibrio parahaemolyticus，Vibrio mimicus and Streptococcus agalactiae.The different concentrations of PVP-I feed couldn't cause pathological change of the L.vannamei's liver and pancreas.The mortality was significantly decreased after feeding PVP-I feed and PVP-I splashing.The zooplankton and phytoplankton were increased in cement tank after PVP-I splashing.

Povidone iodine；Litopenaeus vannamei；AHNS

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.10.005

S948

A

1004-2091（2016）10-0023-06

2016-03-16）

吳崗（1973-），男，研究方向：藥理學(xué).E-mail：45090854@qq.com

但學(xué)明（1972－），男，教授，研究方向：水產(chǎn)病害防控.E-mail：dxm72@scau.edu.cn