冷沉淀凝血因子質(zhì)量控制項(xiàng)目的影響因素

許清，徐洪衛(wèi)

（無錫市中心血站：1.質(zhì)管科；2.成分制備科，江蘇214021）

冷沉淀凝血因子質(zhì)量控制項(xiàng)目的影響因素

許清1，徐洪衛(wèi)2

（無錫市中心血站：1.質(zhì)管科；2.成分制備科，江蘇214021）

目的探討能夠影響冷沉淀凝血因子質(zhì)量控制項(xiàng)目的關(guān)鍵因素。方法收集該站2014年及2015年冷沉淀制品的外觀、容量、纖維蛋白原含量、FⅧ因子含量和無菌檢查等5個(gè)項(xiàng)目的抽檢結(jié)果，從冷沉淀制備的每個(gè)環(huán)節(jié)分析影響其最終質(zhì)量的各種因素。結(jié)果冷沉淀制品的不合格項(xiàng)主要集中在FⅧ因子的含量上，容量也偶有不合格現(xiàn)象發(fā)生。結(jié)論個(gè)體差異、采集、融化、制備及檢測過程均可影響冷沉淀凝血因子的最終質(zhì)量。

沉淀；低溫；血液凝固因子；因子Ⅷ；纖維蛋白原；血漿；質(zhì)量控制

冷沉淀凝血因子是將保存期內(nèi)的新鮮冰凍血漿在1～6℃融化后，分離出沉淀在血漿中不溶解的白色沉淀物在1 h內(nèi)速凍而制成的成分血[1]，含有豐富的Ⅷ因子、纖維蛋白原、纖維結(jié)合蛋白、血管性血友病因子及Ⅷ因子[2]?！禛B18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》中規(guī)定，冷沉淀凝血因子的質(zhì)量控制項(xiàng)目有外觀、容量、纖維蛋白原含量、FⅧ因子含量和無菌檢查等[3]。無錫市中心血站從冷沉淀制備及檢測過程的各環(huán)節(jié)著手，對能夠影響其質(zhì)量控制項(xiàng)目的關(guān)鍵因素做出探討，為提高冷沉淀制品的質(zhì)量，充分發(fā)揮其臨床功效做出努力。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1材料來源隨機(jī)抽取無錫市中心血站及江陰宜興分站的合格品庫內(nèi)的冷沉淀凝血因子，每月各4袋。2014年及2015年每年共計(jì)144袋。

1.1.2儀器恒佳DT-502A電子天平（常熟市佳衡天平儀器有限公司），ACL7000全自動(dòng)血凝儀（貝克曼公司），BacT/ALERT 3D細(xì)菌培養(yǎng)儀（生物梅里埃公司）。

1.2方法將抽檢的冷沉淀凝血因子按照《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）》進(jìn)行質(zhì)量檢查。根據(jù)冷沉淀制品的外觀、容量、纖維蛋白原含量、FⅧ因子含量和無菌檢查等5個(gè)項(xiàng)目的抽檢結(jié)果，從冷沉淀制備的每個(gè)環(huán)節(jié)分析影響其最終質(zhì)量的各種因素。

2　結(jié)果

在5個(gè)質(zhì)量控制項(xiàng)目中，外觀、纖維蛋白原含量、無菌檢查的合格率可達(dá)100%；容量的不合格率在3%左右；而FⅧ因子含量的不合格率接近10%。見表1。

表1　2014年及2015年冷沉淀凝血因子抽檢結(jié)果（不合格數(shù)/總數(shù)）

3　討論

近年來，隨著人們對成分輸血認(rèn)識(shí)的不斷提高和對冷沉淀研究的不斷深入，冷沉淀的臨床應(yīng)用也越來越廣泛。現(xiàn)不僅適用于傳統(tǒng)的各種原因引起的凝血因子缺乏的患者如血友病、大出血等，還適用于燒傷、腫瘤、皮膚黏膜疾病、彌散性血管內(nèi)凝血、多發(fā)傷和手術(shù)創(chuàng)傷等領(lǐng)域[4]。臨床上常出現(xiàn)供不應(yīng)求的狀態(tài)。

冷沉淀中含有多種凝血因子，《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》中僅對FⅧ因子及纖維蛋白原的含量做出要求。FⅧ因子參與內(nèi)源性凝血過程，形成內(nèi)源性凝血活酶。纖維蛋白原參與血液凝固，通過多種作用方式與生物組織相結(jié)合，把血凝塊固定于膠原上。纖維蛋白降解產(chǎn)物在一定條件下可重新溶解，使凝固的血塊液化，防止局部持續(xù)性血栓形成[4]。

冷沉淀的標(biāo)示量為（25±5）mL。《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》對其容量的要求為標(biāo)示量的±10%，可以理解為18～33 mL為合格范圍。由于本站冷沉淀的制備還是一個(gè)全手工的過程，制備時(shí)將大部分上層血漿移至空袋，將留下的20～30 mL血漿與沉淀物混合這個(gè)步驟完全是人為控制，以目測為主。每個(gè)操作人員的判斷力會(huì)有差異，因此，裝量有超出標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)象應(yīng)該也可以理解。也有單位制備時(shí)裝量通過稱量來控制，這樣就比較規(guī)范。FⅧ因子和纖維蛋白原的檢測結(jié)果表明，纖維蛋白原較為穩(wěn)定，而且從測定結(jié)果來看，每袋冷沉淀的纖維蛋白原含量的平均值遠(yuǎn)大于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的值。從目前來看，還未發(fā)現(xiàn)一例纖維蛋白原不符合規(guī)定。相對而言，F(xiàn)Ⅷ因子是一種不穩(wěn)定的凝血因子，在體外的半衰期為12～24 h，其含量會(huì)隨著制備時(shí)間的延長而下降，12 h可減少41.17%，24 h可減少42.82%[5]。抽檢結(jié)果的不合格項(xiàng)主要集中在此項(xiàng)目上。

制備冷沉淀的過程實(shí)際是對凝血因子的一種濃縮過程[6]。通過查閱相關(guān)資料及跟蹤查詢，對影響冷沉淀FⅧ因子含量的關(guān)鍵因素分析如下：冷沉淀的制備經(jīng)歷了全血、新鮮冰凍血漿、冷沉淀3個(gè)階段，影響因素很多，任何一個(gè)環(huán)節(jié)的誤差均可影響到冷沉淀制品的質(zhì)量。首先，正常人群中FⅧ因子的水平相差較大，獻(xiàn)血者的個(gè)體存在明顯差異。其次，血液采集過程因素如血流不暢、出現(xiàn)凝塊和溶血都會(huì)影響到全血中的FⅧ因子的含量。第三，融化及制備過程因素。在整個(gè)制備過程中，冷鏈的要求對冷沉淀來說，顯得尤為重要。目前，國內(nèi)冷沉淀的制備常用2種方法：離心法和虹吸法。本站及2個(gè)分站制備冷沉淀凝血因子仍舊采用的是傳統(tǒng)的離心法。將待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿置于（4±2）℃的冰箱中過夜融化，血漿是平鋪在整個(gè)冰箱的不同架盤上。冰箱的不同位置溫度會(huì)有差異，而且這個(gè)融化過程時(shí)間比較長，達(dá)十幾個(gè)小時(shí)。離心時(shí)雖然也要求將溫度控制在（4±2）℃的環(huán)境下，但在實(shí)際操作時(shí)，不可避免溫度會(huì)有變化。在制備后期，整個(gè)操作過程是在室溫環(huán)境中進(jìn)行，環(huán)境溫度不能得到很好的控制。這些因素均可致FⅧ因子衰減較多，從而導(dǎo)致FⅧ因子的回收率降低。此外，速凍是保存FⅧ因子的關(guān)鍵加工步驟。冷凍速率和血漿中心溫度是2個(gè)關(guān)鍵參數(shù)。擬速凍的血袋要逐袋平放，而不應(yīng)重疊堆放。制備好的冷沉淀凝血因子應(yīng)快速凍結(jié)，最好在60 min內(nèi)將中心溫度降至-30℃以下[7]。在冷沉淀的制備過程中，貫穿整個(gè)冷鏈的是人，人是做好冷鏈的第一要素。因此，加強(qiáng)對工作人員的冷鏈培訓(xùn)，增強(qiáng)冷鏈意識(shí)，加強(qiáng)責(zé)任心和風(fēng)險(xiǎn)意識(shí)，使每個(gè)環(huán)節(jié)的人員都能認(rèn)識(shí)到其在冷鏈中的重要作用，冷鏈才能得到保障[8]。有文獻(xiàn)報(bào)道，使用冷沉淀凝血因子制備儀的冷沉淀中，F(xiàn)Ⅷ因子和纖維蛋白原含量明顯高于低溫融化箱制備的，此設(shè)備值得在血站系統(tǒng)推廣應(yīng)用[9]。當(dāng)然，質(zhì)管人員的檢測過程也應(yīng)注意合理安排。檢測時(shí)，通常是將冷沉淀30～37℃水浴融化，融化時(shí)間不超過10min[10]。融化時(shí)血袋應(yīng)垂直放置，血袋連接口的上部應(yīng)高出水面。融化后先去凈化室做無菌檢查，結(jié)束后再進(jìn)行FⅧ因子和纖維蛋白原的含量測定，測定前還需要一個(gè)稀釋樣品和配備相應(yīng)試劑的一個(gè)過程。如果測量前期占用的時(shí)間過長，也會(huì)使FⅧ因子的檢測結(jié)果偏低。因此，檢測人員要盡可能地提高工作效率，縮短樣品置于室溫中的時(shí)間，提高檢測的準(zhǔn)確度。

[1]蘭炯采，贠中橋，陳靜嫻.輸血免疫血液學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：311-313.

[2]劉景漢，汪德清.臨床輸血學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：40-41.

[3]中華人民共和國衛(wèi)生部，國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[4]楊建英，雷萬軍，孫先玲.冷沉淀在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用[J].河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2007，25（4）：318-320.

[5]易中梅，王紅蘋，李晨晨，等.全血手工制備濃縮血小板后的血漿再制備冷沉淀的質(zhì)量評價(jià)[J].中國輸血雜志，2013，26（2）：117-120.

[6]章懌，邱穎婕，近魏名，等.冷沉淀制備時(shí)間對凝血因子的影響[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2013，15（2）：169-170.

[7]中華人民共和國衛(wèi)生部.血站技術(shù)操作規(guī)程[Z].2012-06-01.

[8]楊振宇，譚萍，張褔，等.淺談血站冷鏈的關(guān)鍵控制點(diǎn)[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2014，16（2）：221-223.

[9]肖樂宇.冷沉淀凝血因子制備儀制備冷沉淀的質(zhì)量評價(jià)[J].中國輸血雜志，2016，29（1）：96-97.

[10]魏亞明，呂毅.基礎(chǔ)輸血學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：341-342.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.21.068

C

1009-5519（2016）21-3414-02

（2016-06-01）