山東地區(qū)1 225例男性尖銳濕疣患者HPV感染亞型分析

田欣欣王 睿姜玲波李雅文祁德波

1. 山東省濟(jì)南金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心PCR實(shí)驗(yàn)室（濟(jì)南 250101）；2. 山東省濟(jì)南金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心病理室

山東地區(qū)1 225例男性尖銳濕疣患者HPV感染亞型分析

田欣欣1王 睿1姜玲波1李雅文1祁德波2*

1. 山東省濟(jì)南金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心PCR實(shí)驗(yàn)室（濟(jì)南 250101）；2. 山東省濟(jì)南金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心病理室

目的 探討山東地區(qū)男性尖銳濕疣患者人乳頭狀瘤病毒（HPV）不同亞型感染的分布情況。方法 采用基因芯片技術(shù)，對(duì)1 225例男性尖銳濕疣皮損拭子或組織進(jìn)行23 HPV基因型檢測(cè)。結(jié)果 708例患者HPV檢測(cè)陽(yáng)性，總陽(yáng)性率為57.8%，其中低危亞型以HPV6（40.8%）和HPV11（40.5%）最常見(jiàn)；高危亞型以HPV16（14.1%）最常見(jiàn)。在708例陽(yáng)性患者中，單一亞型感染367例，占51.8%，其中未檢測(cè)出HPV45和HPV73；在341例混合感染病例中，23種HPV型別均檢測(cè)到，多重感染以低危和高危HPV混合感染為主（P＜0.05）。不同年齡組以21歲～年齡組感染率最高（48.5%），不同地區(qū)以魯中（36.9%）和魯東（36.6%）地區(qū)感染率較高。結(jié)論 山東地區(qū)男性尖銳濕疣患者HPV感染主要以6、11型為主，HPV不同亞型的分布受到年齡、地域以及感染重?cái)?shù)的影響。

男性； 尖銳濕疣； 乳頭狀瘤病毒感染； 山東

人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus， HPV）具有強(qiáng)烈嗜上皮性，感染后可導(dǎo)致人類(lèi)皮膚和黏膜多種良性和惡性病變。HPV感染在人群中較普遍，主要是通過(guò)性活動(dòng)傳播。根據(jù)HPV亞型致癌危險(xiǎn)性大小不同，分為低危型、高危型兩大類(lèi)。低危型HPV，包括6、11、42、43、81型等，主要導(dǎo)致肛門(mén)和外生殖器等部位尖銳濕疣［1-3］；高危型HPV包括16、18、31、33、35、45、51、52、56、58、61型等，除可引起生殖器疣外，更是女性子宮頸癌以及男女性外生殖器癌、肛門(mén)癌和喉癌等的致癌因素［4-6］。

鑒于HPV在尖銳濕疣，以及大部分宮頸癌、外生殖器癌、肛門(mén)癌和喉癌等的發(fā)病中扮演了重要角色，因此只要阻斷HPV感染，就可以預(yù)防這些疾病的發(fā)生。目前，全球已有兩種針對(duì)女性HPV感染的疫苗成功應(yīng)用于臨床，分別是默沙東（Merck）藥廠(chǎng)研制的加衛(wèi)（Gardasil，HPV16/18）疫苗，以及葛蘭素史克的卉妍康（Cervarix，HPV6/11/16/18）疫苗，使女性尖銳濕疣和宮頸癌的發(fā)病率分別下降了70%以上［6］。可以預(yù)見(jiàn)，在不久的將來(lái)，針對(duì)男性的HPV疫苗也將應(yīng)用于臨床。因此，了解和掌握男性HPV的分布特征就具有重要意義。為了解山東地區(qū)男性尖銳濕疣患者HPV感染及分布情況，筆者采用基因芯片技術(shù)對(duì)1225例男性尖銳濕疣皮損拭子或組織進(jìn)行23 HPV基因型檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

資料與方法

一、標(biāo)本來(lái)源

2011年12月至2014年11月間，我們對(duì)送檢濟(jì)南金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心的（采集于山東省各市醫(yī)院性病門(mén)診男性尖銳濕疣患者）1 225例標(biāo)本的HPV檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了回顧分析。這些標(biāo)本來(lái)自于男性患者尖銳濕疣皮損部位的拭子或組織，分別取自男性包皮、冠狀溝、尿道口、肛周等處。采集的標(biāo)本放入深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供的HPV23分型專(zhuān)用采集管中，冷藏保存并送往濟(jì)南金域進(jìn)行HPV檢測(cè)。

二、儀器與試劑

PCR擴(kuò)增儀由杭州博日有限公司生產(chǎn)。全自動(dòng)核酸分子雜交儀（YN-H18）、HPV DNA基因分型檢測(cè)試劑盒由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供。

三、檢測(cè)方法

亞能提供的HPV DNA基因分型檢測(cè)試劑盒能同時(shí)檢測(cè)23種HPV亞型（包括18種高危亞型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82和83；5種低危亞型：6、11、42、43和81）。其技術(shù)原理是：采用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的DNA芯片技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。采用HPV基因組中晚期區(qū)（L區(qū)）相對(duì)保守區(qū)的引物，對(duì)待測(cè)樣品中可能存在的HPV基因型進(jìn)行PCR擴(kuò)增并進(jìn)行生物素標(biāo)記，再將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜芯片上的基因型特異性的探針進(jìn)行雜交，最后通過(guò)化學(xué)顯色判讀結(jié)果。具體步驟如下：

按檢測(cè)試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行DNA提取，以提取好的核酸為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)總體系25μL。反應(yīng)條件：50℃ 15min；95℃ 10min；94℃ 10s，42℃90s，72℃ 30s，共10個(gè)循環(huán)；94℃ 10s，46℃ 60s，72℃ 20s，共30個(gè)循環(huán)；72℃ 5min。擴(kuò)增結(jié)束后95℃10min變性。變性產(chǎn)物通過(guò)冰盒轉(zhuǎn)移到全自動(dòng)核酸分子雜交儀上進(jìn)行雜交、孵育和顯色。按亞能生物全自動(dòng)核酸分子雜交儀操作指南進(jìn)行雜交顯色及判讀結(jié)果，每組實(shí)驗(yàn)均設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照，陰性和陽(yáng)性對(duì)照均由廠(chǎng)家提供。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)分析采用SPSS11.0軟件，組間比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、研究人群基本信息

本次研究共收到1 225份標(biāo)本，其中708例患者HPV檢測(cè)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為57.8%?；颊吣挲g范圍為17～77歲，≤20歲者30例，21～50歲者640例，＞50歲者38例。

二、HPV各亞型檢出率

HPV不同亞型分布如圖1所示，檢出的HPV亞型所占比率依次為HPV6（40.8%，289/708），HPV11（40.5%，287/708），HPV16（14.1%，100/708），HPV42（9.3%，66/708），HPV43（9.3%，66/708）。這其中，HPV6/11感染最常見(jiàn)，占75.4%（534/708）。

圖1　708例男性患者HPV23亞型分布情況

三、單一感染與多重混合感染

在708例HPV DNA陽(yáng)性標(biāo)本中， 367例為單一感染，占51.8%。在這367例單一感染病例中，共發(fā)現(xiàn)21種HPV亞型。排名前五位的依次為：HPV6（38.2%，140/367），HPV11（31.9%，117/367），HPV16（7.1%，26/367），HPV43（4.6%，17/367），HPV42（1.9%，7/167），而HPV45和HPV73未有檢出。

341例二重及以上混合感染分布情況見(jiàn)表1。

表1　34例HPV DNAV陽(yáng)性多重感染男性患者分布情況（n，%）

這其中23種HPV亞型均被檢測(cè)到，HPV6型檢出率最高（149/341，43.7%），HPV82型檢出率最低（3/341，0.9%）。HPV亞型以高低?；旌细腥緸橹?，占80.7%（275/341），單純低危感染占10.0%（34/341），單純高危感染占9.4%（32/341）。依據(jù)感染重?cái)?shù)分為6組，HPV型別分布按單純低危、單純高危、高低?；旌细腥?種情況，進(jìn)行6組間感染重?cái)?shù)與HPV型別分布關(guān)系的分析，結(jié)果顯示高低?；旌细腥緮?shù)高于單純高危和單純低危，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），隨著感染重?cái)?shù)增多，HPV型別中高低?；旌细腥纠龜?shù)增多。

四、HPV感染型別與年齡及地區(qū)分布趨勢(shì)

將708例HPV陽(yáng)性患者按年齡分為5組，HPV感染型別分布按單純高危、單純低危和高低?；旌细腥?種情況進(jìn)行分析。如表2所示，這5組人群中HPV感染型別分布的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=8.34，P＞0.05），但是21歲～年齡組感染率最高。

表2　708例HPVDNA陽(yáng)性患者的年齡分布（n，%）

山東省按傳統(tǒng)分為魯中（濟(jì)南，淄博，萊蕪，泰安）、魯東（煙臺(tái)，青島，威海，濰坊）、魯南（臨沂，日照，濟(jì)寧，棗莊）、魯西（聊城，菏澤）、魯北（東營(yíng)，濱州，德州）5個(gè)地區(qū)。這5個(gè)地區(qū)間HPV感染情況分布如表3所示，不同地區(qū)的HPV感染情況分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=23.53，P＜0.05），魯中和魯東感染率高于魯西、魯南和魯北地區(qū)。

表3　708例HPVDNAP陽(yáng)性患者的地區(qū)分布（n，%）

討 論

目前，研究熱點(diǎn)主要集中于HPV與女性宮頸癌的發(fā)生、篩查和預(yù)防上，而對(duì)于男性HPV感染相關(guān)的研究較少，目前尚缺乏相關(guān)的流行病學(xué)研究資料。近年來(lái)，男性尖銳濕疣發(fā)病率逐年增加，部分研究顯示HPV亞臨床感染在不同人群和地域的分布非常復(fù)雜［7-9］。為探討山東地區(qū)男性尖銳濕疣患者HPV感染的分布情況，筆者采用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的DNA基因芯片技術(shù)，對(duì)尖銳濕疣皮損拭子或組織進(jìn)行了HPV亞型檢測(cè)和分析。此項(xiàng)技術(shù)能具體分型及診斷多重感染，敏感性和特異性均高，且穩(wěn)定性好，有很好的重復(fù)性。

本研究中708例HPV陽(yáng)性患者中檢測(cè)出了23種HPV亞型感染，最常見(jiàn)的HPV亞型依次為6、11、16、42和43，與其他幾個(gè)研究的結(jié)果不一致。Chan等［10］在中國(guó)香港的研究結(jié)果顯示，最常見(jiàn)的HPV亞型依次為6、11、16、52和84；薛耀華等［11］在廣州地區(qū)的研究結(jié)果顯示，最常見(jiàn)的為6、11、16、52和58，這提示HPV感染存在明顯的地域差異性。

本研究結(jié)果顯示，708例HPV陽(yáng)性患者中，HPV單一亞型感染占51.8%（367/708），以低危型HPV6（38.2%）和HPV11（31.9%）最常見(jiàn)，單一高危亞型以HPV16最常見(jiàn)（7.1%），這與目前國(guó)內(nèi)外的研究相一致［12］。75.4%（534/708）的患者至少有HPV6/11其中一項(xiàng)感染，這也為未來(lái)針對(duì)男性HPV疫苗的開(kāi)發(fā)提供了數(shù)據(jù)支持，僅HPV6/11疫苗就有可能使男性尖銳濕疣的發(fā)病率下降70%以上。本研究的數(shù)據(jù)還顯示，二重及以上混合感染占48.2%，最多達(dá)到十重感染，且七重感染以上均為高低?；旌细腥?，統(tǒng)計(jì)分析也顯示感染的重?cái)?shù)會(huì)影響不同亞型的分布，這進(jìn)一步說(shuō)明了HPV感染在男性患者中的復(fù)雜性。

本研究還發(fā)現(xiàn)在21歲～年齡組男性患者中，HPV感染率較高，與國(guó)內(nèi)有關(guān)研究相一致［13-15］。我們近期的研究結(jié)果也顯示，山東省女性HPV感染的高峰年齡也在30歲以下［16］。可能原因在于，此年齡段男性為性活躍人群，接觸性伴多，而免疫系統(tǒng)未被致敏，導(dǎo)致這些人群感染率偏高，其檢測(cè)的型別感染也偏多，這還導(dǎo)致這部分人群HPV傳染給性伴的危險(xiǎn)性增加。HPV高危亞型是否與尖銳濕疣形成有關(guān)，還是單純的病毒沾染，還有待于進(jìn)一步證實(shí)。Schiffman等［17］認(rèn)為大部分高危亞型感染會(huì)自然消失。

本研究發(fā)現(xiàn)HPV型別感染情況存在地區(qū)差異，魯中和魯東HPV感染率，較魯西、魯南和魯北相比要明顯高些。HPV陽(yáng)性率的不同地區(qū)差異還可能與各地不同的教育水平、生活習(xí)慣、經(jīng)濟(jì)及社會(huì)發(fā)展、思想開(kāi)放程度等不一致有關(guān)。山東的經(jīng)濟(jì)發(fā)展明顯不均衡，魯東和魯中的經(jīng)濟(jì)明顯要比魯西、魯南和魯北更發(fā)達(dá)。

綜前所述，山東地區(qū)男性尖銳濕疣患者HPV感染主要以6、11型為主，好發(fā)于青年人，多重HPV混合感染比例高，高低?；旌细腥据^常見(jiàn)。本研究結(jié)果有助于掌握山東男性HPV感染的流行病學(xué)特征，為未來(lái)開(kāi)發(fā)男性HPV疫苗提供科學(xué)依據(jù)。

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17 Schiffman M， Castle PE， Jeronimo J， et al. Human papillomavirus and cervical cancer. Lancet 2007；370（9590）： 890-907

（2016-04-18收稿）

Analysis of human papillomavirus genotype distribution in 1225 male patients with condyloma acuminatum in Shandong Province

Tian Xinxin1， Wang Rui1， Jiang Lingbo1， Li Yawen1， Qi Debo2*
1. Laboratory of PCR， Jinan Kingmed Center For Clinical Laboratory， Jinan 250101， Shandong， China；2. Department of Pathology， Jinan Kingmed Center For Clinical Laboratory
Corresponding author： Qi Debo， E-mail： bobo8369@163.com； Tel： 0531-88689998

Objectivee To investigate human papillomavirus （HPV） genotype distribution in male patients with condyloma acuminatum （CA） in Shandong Province. Metthhooddss Swabs or tissue samples were obtained from 1225 male CA patients. 23 HPV types in samples were tested by a HPV genotyping chip. Ressuullttss A total of 708 cases were HPV-positive and the positive rate was 57.8%. HPV6 （40.8%） and HPV11 （40.5%） were the most common low-risk HPV genotypes， and HPV 16 （14.1%） was the most common high-risk HPV genotype. Of these 708 HPV-positive patients， 367 （51.8%） had single HPV infection， and HPV 45 and 73 were not detected. Among 341 patients with multiple HPV infections， all 23 HPV genotypes were detected， and mixed low-risk and high-risk HPV infections were most common （P＜0.05）. Patients in 21～30 age group had the highest HPV infection rate （48.5%）. The HPV positive rates in central area （36.9% ） and east area （36.6%）were much higher than that in other areas in Shandong. Concluussiioonn HPV6 and 11 are the major HPV genotypes in male CA patients. Different ages， regions and number of co-infections may infl uence the distribution of HPV genotypes signifi cantly.

males； condylomata acuminata； papillomavirus infections； Shandong

10.3969/j.issn.1008-0848.2016.07.009

R 752.53

E-mail：bobo8369@163.com；Tel：0531-88689998