牛蒡子水提物中牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠體內(nèi)的代謝和排泄研究

袁媛 張建奎 姜泓 劉麗 康廷國

摘要：目的對(duì)牛蒡子水提物中牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠體內(nèi)的代謝和排泄物進(jìn)行了研究，獲得藥物在大鼠體內(nèi)的代謝和排泄情況。方法建立一種高效液相色譜方法，同時(shí)測(cè)定了牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠排泄物中的含量。結(jié)果尿液排泄為牛蒡苷和牛蒡苷元的主要排泄途徑。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、可靠。

關(guān)鍵詞：牛蒡子；代謝；排泄

中圖分類號(hào)：R2855文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（201.6）04-0057-04

牛蒡子為常用中藥?！吨腥A人民共和國藥典》201.5年版收載為菊科植物牛蒡（Arctium lappa L）的干燥成熟果實(shí)[1]。從該藥材中提取得到的化學(xué)物質(zhì)主要有木脂素類成分、萜類成分和揮發(fā)油類成分等[2-4]。查閱相關(guān)文獻(xiàn)，尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)其代謝和排泄的相關(guān)研究，本文建立了一種高效液相色譜方法，同時(shí)測(cè)定了牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠排泄物中的含量[5-6]。

1儀器與試藥[HTSS][HJ24mm]

1.1儀器Agilent 1.100高效液相色譜儀；DZTW調(diào)溫電熱套；XS105電子天平；XW-80A微型旋渦混合儀；Anke-1.8C-C高速臺(tái)式離心機(jī)。

1.2試藥所用試劑均為分析純和色譜純。牛蒡苷購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為81.9-9401；牛蒡苷元購自上海融禾醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)為070928；牛蒡子藥材購于遼寧省中醫(yī)藥研究院藥局，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)康廷國教授鑒定為菊科植物牛蒡Arctium lappa L的干燥成熟果實(shí)；健康昆明種大鼠，體重400 g，由沈陽醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：XCXK（遼）-2003-001.6

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜條件色譜柱：Hypersil ODS柱（46 mm×200 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇∶[KG-2]05%磷酸水（48∶[KG-2]52）；流速：08 mL/min；檢測(cè)波長：280 nm；柱溫：28℃；進(jìn)樣量：20μl

2.2灌胃樣品制備稱取牛蒡子藥材78 g，第1次加入10倍量的水回流提取1 h，第2次加入8倍量的水回流提取1 h，2次濾液合并，濃縮成0624 g/mL的藥液（按牛蒡子藥材量計(jì)算），于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3給藥方案與樣品采集健康昆明種大鼠6只，給藥前禁食1.6小時(shí)，自由飲水，灌胃給予牛蒡子水提物，劑量為臨床等效劑量的1.6倍，分別于3、6、24 h取大鼠的尿液，于3、24 h取大鼠的糞便。

2.4代謝和排泄樣品的預(yù)處理取尿液，糞便液（用生理鹽水研磨）以1.3900 r/min高速離心10 min，取上清液100 μL，加入高氯酸80 μL，充分渦旋混合3 min，再以1.3900 r/min高速離心10 min，取上清液，再一次以1.3900 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液50 μL，注入高效液相色譜儀分析，記錄色譜圖。

2.5對(duì)照品溶液制備精密稱取減壓干燥至恒重的牛蒡苷對(duì)照品1.65 mg，置于5 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，加甲醇至刻度制成濃度為033 mg/mL的牛蒡苷標(biāo)準(zhǔn)溶液貯備液。

精密稱取減壓干燥至恒重的牛蒡苷元對(duì)照品1.44mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，加甲醇至刻度制成濃度為01.44 mg/mL的牛蒡苷元標(biāo)準(zhǔn)溶液貯備液。

2.6分析方法確證

2.6.1方法的專屬性取大鼠空白尿、糞便勻漿液，按“組織樣品的預(yù)處理”項(xiàng)下的方法操作，獲得空白尿、糞便勻漿液樣品色譜圖1（A）、（B）；將一定濃度的牛蒡苷及牛蒡苷元對(duì)照品溶液加入到空白尿、分辨勻漿液中，依同法操作，得色譜圖2（A）、（B）；同法操作得到大鼠給藥后的尿、糞便勻漿液樣品色譜圖3（A）、（B）。結(jié)果表明，空白血清中的內(nèi)源性物質(zhì)和代謝物不干擾牛蒡苷和牛蒡苷元的測(cè)定。

2.6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線取空白大鼠尿、糞便勻漿上層液，分別加入適量牛蒡苷和牛蒡苷元標(biāo)準(zhǔn)溶液，使得空白大鼠尿勻漿液中牛蒡苷和牛蒡苷元的濃度分別為0032、0054、0070、0081、0090 mg/mL和0028、0035、0041、0044、0047 mg/mL；空白大鼠糞便勻漿液中牛蒡苷和牛蒡苷元的濃度分別為0032、0054、0070、0081、0090 mg/mL和0028、0035、0041、0044、0047mg/ml；按“代謝和排泄樣品的預(yù)處理”項(xiàng)下依法操作，分別以測(cè)定牛蒡苷和牛蒡苷元對(duì)濃度作線性回歸，制作牛蒡苷和牛蒡苷元尿、糞便勻漿的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.6.3方法的精密度取空白大鼠尿、糞便勻漿上層液80 μL，向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液，制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個(gè)濃度（牛蒡苷的濃度為1.953、22.73、261.9 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.2.78、1.983、2286 μg/mL）；制成糞便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個(gè)濃度（牛蒡苷的濃度為1.953、3492、4853 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.2.78、1.905、21.1.8 μg/mL）的質(zhì)量控制（QC）樣品分析，每一濃度進(jìn)行5樣本分析，計(jì)算QC樣品的測(cè)得濃度與配制濃度對(duì)照，求得組織樣品測(cè)定方法的精密度，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.6.4提取回收率取空白大鼠尿、糞便勻漿上層液80 μL，向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液，制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個(gè)濃度（牛蒡苷的濃度為1.953、22.73、261.9 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.2.78、1.983、2286 μg/mL）；制成糞便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個(gè)濃度（牛蒡苷的濃度為1.953、3492、4853μg/ml和牛蒡苷元的濃度為1.2.78、1.905、21.1.8 μg/mL）的質(zhì)量控制（QC）樣品分析，每一濃度進(jìn)行5樣本分析，進(jìn)樣50μl，通過測(cè)得的峰面積與相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積比值計(jì)算提取回收率。經(jīng)測(cè)定，牛蒡苷在尿中低、中、高3個(gè)濃度的提取回收率分別為103.2、905、859%；牛蒡苷元在尿組織中低、中、高3個(gè)濃度的提取回收率分別為102.4%、881%、82.5%。同法制得牛蒡苷在糞便中低、中、高3個(gè)濃度的回收率分別為1092、1083、980%；牛蒡苷元在糞便中低、中、高3個(gè)濃度的回收率分別為1092、1010、974%。

2.6.5樣品穩(wěn)定性取空白大鼠尿、糞便勻漿上層液80 μL，向其中加入牛蒡苷和牛蒡苷元對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液，制成尿中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個(gè)濃度牛蒡苷的濃度為1.95、22.7、262 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.28、1.98、229 μg/mL）；制成糞便中牛蒡苷和牛蒡苷元低、中、高3個(gè)濃度（牛蒡苷的濃度為1.95、349、485 μg/mL和牛蒡苷元的濃度為1.28、1.91、21.2 μg/mL）的質(zhì)量控制（QC）樣品分析，每一濃度進(jìn)行5樣本分析，進(jìn)樣50 μL，樣品經(jīng)處理后室溫下1h是穩(wěn)定的，在-20℃冰箱中1.2 h是穩(wěn)定的，其RE%分別為3.2、93、1.41和2.4、1.1.6、1.37%與84、3.3、20%和84、10、2.6%。

3結(jié)果

大鼠灌胃給予牛蒡子水提物后，不同時(shí)間點(diǎn)尿和糞便中牛蒡苷和牛蒡苷元的色譜圖分別見圖4、圖5；含量圖6、圖7

4討論

通過對(duì)尿和糞便的研究表明，牛蒡苷和牛蒡苷元在大鼠體內(nèi)24 h基本可以代謝完全。尿液排泄為牛蒡苷和牛蒡苷元的主要排泄途徑。經(jīng)給藥尿液與空白尿液圖譜比較，給藥糞便液與空白糞便液比較，發(fā)現(xiàn)牛蒡子水提物灌胃給予大鼠服用后在尿液中會(huì)生成多種其它成分，在糞便液中也會(huì)產(chǎn)生幾種其它成分，需進(jìn)一步用液質(zhì)色譜儀進(jìn)行確定。

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