微型月季組織培養(yǎng)快繁體系的建立

王 禹

(黑龍江省農(nóng)科院園藝分院，哈爾濱150069)

微型月季，植株矮小，花色奇異，花期長，因其品性獨(dú)特又被稱為“鉆石月季”，主要用于盆栽花卉和園林綠化，應(yīng)用前景廣泛，微型月季的需求量在逐年增加。在生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)，微型月季在常規(guī)扦插繁育時(shí)，因植株矮小,節(jié)數(shù)少的特性；且各品種之間成活率差異較大，有的成活率可達(dá)到80%，有的還達(dá)不到50%，導(dǎo)致扦插繁殖率低, 難以滿足規(guī)?；a(chǎn)的需求，制約著微型月季規(guī)?；a(chǎn)發(fā)展。在此背景下，應(yīng)探索出高效的微型月季繁育技術(shù)。

植物組織培養(yǎng)技術(shù)具有繁育周期短、繁殖系數(shù)高的特性。本試驗(yàn)篩選適宜組織培養(yǎng)的外植體、適宜外植體萌發(fā)的培養(yǎng)基、叢生芽增殖和生根的培養(yǎng)基及移栽的適宜條件，建立微型月季組織培養(yǎng)的快繁體系，提高微型月季的繁殖速度和數(shù)量，為微型月季應(yīng)用提供技術(shù)支撐。

1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)采用微型月季品種“旋轉(zhuǎn)木馬(紅色系)”和“金太陽(黃色系)”為材料。采集地點(diǎn)為黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院。

2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

2.1 微型月季組織培養(yǎng)適宜的外植體

采集微型月季的一年生嫩、半木質(zhì)化、木質(zhì)化的枝條，剪成帶一個(gè)芽的莖段，自來水流沖洗1h，置于超凈工作臺(tái)中，75%酒精消毒，蒸餾水沖洗2次，0.1%的升汞消毒，蒸餾水沖洗2次，接種到增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基為MS+0.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25℃，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)30d，調(diào)查莖段污染及腋芽萌發(fā)情況。

2.2 微型月季適宜腋芽萌發(fā)的培養(yǎng)基

將嫩或木質(zhì)化枝條的莖段(不同外植體消毒時(shí)間不同)，接種到生長培養(yǎng)基上，生長培養(yǎng)基采用6-BA+IAA+30g/L 蔗糖+7g/L 瓊脂pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25℃，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)30d，調(diào)查6-BA、IAA對(duì)腋芽萌發(fā)的影響。

2.3 微型月季叢生芽增殖適宜的培養(yǎng)基

將萌發(fā)的腋芽轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基采用6-BA或TDZ+IAA或KT+30 g/L 蔗糖+7g/L 瓊脂pH5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25℃，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)30d，調(diào)查6-BA、TDZ、IAA、KT對(duì)月季叢生芽增殖的影響。

2.4 微型月季組培苗生根適宜的培養(yǎng)基

待組培苗長到1cm高轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基采用IBA+IAA+30g/L 蔗糖+7g/L 瓊脂pH5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25℃；光照時(shí)間12h/d，培養(yǎng)30d，調(diào)查IBA、IAA對(duì)草莓生根的影響。

2.5 微型月季組培苗適宜的移栽條件

組培苗移栽20d后，調(diào)查遮光率、組培苗高度、根系長度、空氣濕度及環(huán)境溫度對(duì)移栽成活率的影響。

3 結(jié)果與分析

3.1 篩選微型月季組織培養(yǎng)適宜的外植體

表1 微型月季組織培養(yǎng)適宜的外植體篩選

從表1得出，“旋轉(zhuǎn)木馬”與“金太陽”嫩枝和半木質(zhì)化枝的莖段污染率可控制到20%以下，萌芽率可達(dá)到80%以上；木質(zhì)化枝條的莖段雖萌芽率較高，但污染率太高。綜合以上因素，應(yīng)選取嫩枝和半木質(zhì)化枝的莖段作為外植體。

3.2 不同生長激素對(duì)微型月季腋芽萌發(fā)的影響

表2 生長激素對(duì)微型月季腋芽萌發(fā)的影響

從表2得出，微型月季生長培養(yǎng)基添加0.5～1mg/L 6-BA旋轉(zhuǎn)木馬腋芽萌發(fā)率達(dá)到80%以上，金太陽腋芽萌發(fā)率達(dá)到70%以上；添加IAA對(duì)促進(jìn)腋芽萌發(fā)效果不明顯且濃度高會(huì)抑制芽的萌發(fā)，可不添加。生產(chǎn)中為降低成本，微型月季生長培養(yǎng)基可采用MS+0.5mg/L 6-BA。

3.3 不同生長激素對(duì)月季叢生芽增殖的影響

表3 生長激素對(duì)叢生芽增殖的影響

從表3得出，不同品種的微型月季在同種培養(yǎng)基中增殖效果有差異，含TDZ的培養(yǎng)基對(duì)叢生芽增殖效果較好。旋轉(zhuǎn)木馬為MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L TDZ、金色太陽為MS+1mg/L TDZ+0.1mg/L KT增殖系數(shù)高，芽長勢強(qiáng)壯。

3.4 不同生長激素對(duì)月季組培苗生根的影響

從表4得出，IBA對(duì)微型月季組培苗生根有促進(jìn)作用，但濃度達(dá)到0.5mg/L時(shí)生根率和生根條數(shù)都下降，起到抑制作用。旋轉(zhuǎn)木馬以0.2mg/L IBA、金太陽以0.2mg/L IBA或0.2mg/L IBA+0.2mg/L IAA培養(yǎng)基生根效果好，生根率可達(dá)到80%以上。結(jié)果顯示添加IAA對(duì)組培苗生長有促進(jìn)作用，但要注意使用量，太高會(huì)加快苗生長，不利于馴化成活。生產(chǎn)中建議“旋轉(zhuǎn)木馬”與“金太陽”都使用生根培養(yǎng)基0.2mg/L IBA。

表4 生長激素對(duì)組培苗生根的影響

3.5 篩選微型月季組培苗適宜的移栽條件

表5 微型月季組培苗移栽適宜條件篩選

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，空氣濕度高微型月季易患白粉病，溫度高易感染紅蜘蛛。從表5得出，草莓組培苗移栽的適宜條件為組培苗高度達(dá)到2～3cm、根系長度0.5～1cm、遮光率20%～40%、空氣濕度40%～50%、環(huán)境溫度20～25℃，移栽成活率可達(dá)到91%。

4 結(jié)論與討論

微型月季組織培養(yǎng)快繁體系的步驟為：采集微型月季的一年生嫩、半木質(zhì)化的枝條，剪成帶一個(gè)芽的莖段；自來水流沖洗1h，置于超凈工作臺(tái)中，75%酒精消毒(嫩枝30s、半木質(zhì)化枝50s)，蒸餾水沖洗2次，0.1%的升汞消毒(嫩枝5min、半木質(zhì)化枝6min)，蒸餾水沖洗2次，接種到生長培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基為MS+0.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂 pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25℃，光照時(shí)間14h/d。待腋芽萌發(fā)，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基可采用MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L TDZ或者M(jìn)S+1mg/L TDZ+0.1mg/L KT，pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25℃，光照時(shí)間14h/d。將長到1cm高的組培苗轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基采用0.2mg/L IBA+30g/L 蔗糖+7g/L 瓊脂pH 5.4～5.8；培養(yǎng)溫度為22～25℃；光照時(shí)間12h/d。待根系長至0.5～1cm，株高2～3cm，轉(zhuǎn)至移栽環(huán)境開蓋放置3d。移栽基質(zhì)采用草炭土，拌入30%的多菌靈(多菌靈∶土=1∶100)，噴灑73%炔螨特乳油2000倍液，覆蓋塑料布消毒3d。將組培苗洗凈根部培養(yǎng)基栽入育苗盤中，育苗盤采用72穴，厚度6cm。移栽后遮光率20%～40%、空氣濕度40%～50%、環(huán)境溫度20～25℃，移栽成活率可達(dá)到91%。微型月季由莖段萌發(fā)轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基時(shí)，萌發(fā)的新芽不易太高，否則降低增殖系數(shù)。微型月季馴化時(shí)根系不宜太長，植株不可太高，否則不利于馴化成活，可能原因是植株太高蒸騰作用增加，小苗失水嚴(yán)重；根系太長，栽植時(shí)易碰傷根部。此實(shí)驗(yàn)采用了2個(gè)微型月季品種，在同種培養(yǎng)基上萌芽率、增殖系數(shù)及生根率都有差異，如“金太陽(黃色系)”的生根率低于“旋轉(zhuǎn)木馬(紅色系)”的生根率，這些差異與田間品種特性表現(xiàn)相似，因此在實(shí)際生產(chǎn)中不同品種繁育時(shí)，要適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)基，以提高繁殖速度。