依那普利口頰黏膜給藥系統(tǒng)：制備和表征

賀文帥 趙興勝 南景龍 魯亞南 溫霞 蔡佳飛

[摘 要] 目的 探討依那普利的口頰黏膜給藥系統(tǒng)的制備。方法 使用粘膜粘附性多聚物、通過溶劑涂布技術(shù)，將依那普利配制成口腔貼膜的形式，同時在體外釋放研究和透過性研究中評價了其多種理化特點。結(jié)果 所有配方均顯示有高的藥物百分含量（96.45%至98.49%）。有良好膨脹特性的配方顯示有良好的駐留時間。在體外，發(fā)現(xiàn)包括貼膜（F2）在內(nèi)的高粘性羧甲纖維素鈉（SCMC-HV）的藥物釋放率最高（藥物釋放很快，在1.5小時內(nèi)釋放92.24%）、其次是貼膜F4（含有聚乙烯吡咯烷酮K-90 1% w/v個SCMC（HV） 1% w/v）。研究發(fā)現(xiàn)，在10小時結(jié)束時，F(xiàn)2和F4的活體外藥物穿透率分別為82.24%和89.90%。結(jié)論 根據(jù)最高的膨脹度、最高的駐留時間和最長體外駐留時間選擇將配方F4用于構(gòu)建口頰貼膜，可用于對心血管病的治療。

[關(guān)鍵詞] 依那普利；口頰黏膜；制備

中圖分類號：R972文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1009-816X（2016）04-0267-04

[Abstract] Objective To study the preparation of buccal mucosa delivery systems of enalapril. Methods Using solvent coating technology and mucous membrane adhesive polymer， enalapril were prepared in forms of buccal mucoadhesive films. Meanwhile， their various physical and chemical characteristics were evaluated in release and permeability studies in vitro. Results All formulas showed high percentage composition of drug （96.45～98.49%）. The formula with good expansion characteristics displayed favorable residence time. In vitro， the rate of drug release in sodium carboxymethyl cellulose with high viscosity （SCMC-HV）， including mucoadhesive film （F2）， was the highest （fast drug release， with 92.24% in 1.5 hours）， followed by mucoadhesive film F4 （containing polyvinylpyrrolidone K-90 1% w/v， SCMC （HV） 1% w/v）. It was found that by the end of 10 hours， drug penetration rate of F2 and F4 in vitro were 82.24% and 89.90% respectively. Conclusions In view of the highest degree of expansion， the maximum absorption and the longest residence time in vitro， the formula F4 was adopted in the preparation of buccal mucosa delivery system， which could be applied in the treatment of cardiovascular disease.

[Key words] Enalapril； Buccal mucosa；Preparation

自1874年通過舌下硝酸甘油給藥的成功以來，口腔黏膜給藥越來越成為人們關(guān)注的焦點?？陬a部黏膜最適合局部和全身給藥。依那普利是一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACEI）抑制劑，由于肝臟的首過效應(yīng)，導(dǎo)致其生物利用度約40～60%[1～3]。因此，為提高其治療效果和生物利用度，可通過口頰貼膜給藥途徑來給予藥物。本研究旨在使用黏膜粘附性多聚物，如羧甲基纖維素鈉（SCMC）、羥丙甲基纖維素（HPMC）、羥乙基纖維素（HEC）和聚乙烯吡咯烷酮K-90（PVP K-90）來配制和表征依那普利的口頰黏膜貼膜。

1 材料與方法

1.1 實驗材料：依那普利、PVP K-90、HPMC（47厘泊）、SCMC（高粘度級）購自美國Sigma Aldrich公司。使用的其他化學(xué)品均為分析級。貼膜使用溶劑涂布方法制備。

1.2 方法：

1.2.1 口頰黏膜貼膜的制備：使用成膜性、黏膜粘附性多聚物、通過溶劑涂布技術(shù)制備了依那普利的口頰貼膜，其組成見表1。

1.2.2 貼膜的重量、厚度和耐折度：確定了貼膜的重量（通過Fisher PS-200的電子天平稱量）和厚度（通過Mitutoyo MMO-25DS微米游標(biāo)卡尺測量）。通過對一小條貼膜（2×2）cm在相同位置反復(fù)折疊直至其斷裂，確定其耐折度。

1.2.3 藥物含量均一性：為確定藥物含量均一性，每個配方取三張膜，分別放入100ml容量瓶中，加入100ml甲醇，并持續(xù)攪拌4小時。過濾溶液，適當(dāng)稀釋并用紫外分光光度計（Lambda 25，Perkin Elmer，US）在213nm波長處進(jìn)行分析。獲取三張膜的藥物含量平均值。

1.2.4 膜表面的pH值：在將水合的貼膜置于瓊脂板上持續(xù)1小時使膜膨脹，通過pH計測定膜表面的pH值[4，5]。在pH 6.6磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行膨脹度研究[5]。

1.2.5 體外駐留時間：使用USP規(guī)定的溶出設(shè)備，使用pH 6.6磷酸鹽緩沖液（PB）作為溶出溶媒（800ml，37±2℃），確定體外駐留時間。在玻璃平板的表面上，粘上數(shù)段豬小腸黏膜（每段長度為3cm），然后將玻璃平板垂直貼附在設(shè)備上。每種配方取三張膜進(jìn)行水合（使用pH 6.6PB，在玻璃板表面上進(jìn)行）。然后使水合的膜表面與黏膜緊密接觸。將玻璃平板垂直固定在設(shè)備上，并允許其上下移動。在最低點上將貼膜完全浸沒在緩沖液中，在最高點取出。記錄貼膜從黏膜上完全浸濕或剝離所需的時間（n=3）。

1.2.6 體外藥物釋放率：在USP XXIV八工作站I型溶出度研究裝置中、使用900ml pH 6.6PB（溶媒），維持在（37±0.5）℃、攪拌轉(zhuǎn)速為50轉(zhuǎn)/min、持續(xù)6小時，進(jìn)行體外藥物釋放率研究。通過分光光度計在213nm處進(jìn)行比色分析。

1.2.7 活體外穿透性研究：通過一層離體的豬口頰黏膜、使用改進(jìn)的Franz擴散細(xì)胞[5～7]。根據(jù)研究，將每個配方的貼膜（直徑為2cm）放在豬口頰黏膜層上，與離體的黏膜緊密接觸，上面覆蓋上一層鋁箔作為襯墊膜。在37±1℃條件下，通過磁力攪拌器，不斷攪拌用100ml的pH 7.4磷酸鹽緩沖液充滿的受體空間的內(nèi)容物。在預(yù)定的時點撤出樣品，過濾，適當(dāng)稀釋，并使用分光光度計在213nm波長處分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：所有資料采用SPSS18.0版軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，進(jìn)行多組間總體均數(shù)比較，在方差齊時采用單因素方差分析（one-way ANOVA），方差不齊時采用Welch校正檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

使用黏膜粘附性多聚物（如SCMC（HV）、PVP K-90和HPMC K-15等）、通過溶劑涂布技術(shù)制備了依那普利口頰黏膜貼膜。表征分析了制備好的貼膜的多種理化檢測指標(biāo)，如重量變異、厚度、藥物含量均一性、膨脹指數(shù)、膜表面的pH值、體外駐留時間等。通過體外溶出研究和體內(nèi)擴散研究評價了藥物釋放率。

2.1 貼膜的重量、厚度和耐折度：發(fā)現(xiàn)整個貼膜厚度均勻。膜的厚度范圍在（0.14±0.02）mm至（0.22±0.03）mm，各配方間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。發(fā)現(xiàn)不同配方的重量范圍在（56.00±1.02）mg至（94.00±0.82）mg。通過在相同位置反復(fù)折疊貼膜直至其斷裂為止，人工測定了耐折度。即便是在折疊了197余次以后，貼膜也沒有任何裂紋。發(fā)現(xiàn)其耐折度范圍在（197.02±14.45）次至（354.42±15.50）次，見表2。

2.2 藥物百分含量：發(fā)現(xiàn)藥物百分含量范圍在（96.45±1.10）%至（98.49±1.25）%之間，見表2。

2.3 膜表面的pH值：所有配方的膜表面pH值在中性（7.0±0.5）范圍內(nèi)，因此，預(yù)期黏膜沒有刺激作用，并最終實現(xiàn)了患者依從性。

2.4 膨脹度研究：在pH 6.6磷酸鹽緩沖液中觀察了膜的膨脹度。膜F4的膨脹更明顯（與F1、F2、F3、F5、F6比較，P<0.05），其次是F6（與F1、F2、F3、F4、F5比較，P<0.05），兩種膜分別含有PVP-SCMC和HPMC-SCMC，見表2。

2.5 體外駐留時間：已發(fā)現(xiàn)，多種配方的體外駐留時間順序為F4>F6>F5>F3>F2>F1（組間比較均P<0.05）。發(fā)現(xiàn)體外駐留時間長的貼膜同時也有良好的膨脹度和藥物釋放率特性。

2.6 體外藥物釋放率研究：使用pH=6.6磷酸鹽緩沖液作為溶媒，對多種配方執(zhí)行了體外釋放研究。發(fā)現(xiàn)多種依那普利口頰黏膜貼膜的藥物釋放率有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）見圖1。包括膜（F2）在內(nèi)的SCMC（HV）顯示有最高的藥物釋放率（藥物釋放快速，在1.5小時內(nèi)釋放了92.24%）。除配方F2之外，配方F4（含有PVP K-90 1% w/v 和SCMC（HV）1% w/v）顯示有較好的藥物釋放率。

2.7 活體外藥物釋放率研究：選擇將配方F2（含有SCMC 2% w/v）和F4（含有PVP K-90 1% w/v和SCMC HV 1% w/v）用于活體外藥物釋放研究。選擇配方F2是因為其有最高和最快的體外藥物釋放率，而選擇F4是因為其有最高膨脹度、最長的駐留時間和快速（1.5小時內(nèi)釋放83.48%）而較高的體外藥物釋放率（在5小時結(jié)束時釋放92.24%）。在活體外研究中，確定了配方F2和F4透過豬口頰黏膜的透過率，見圖2。

發(fā)現(xiàn)在10小時結(jié)束時，F(xiàn)2和F4的活體外藥物穿透率分別為82.24%和89.90%。由于F2和F4的點圖呈線性，因此，確證藥物的穿透作用是通過基質(zhì)擴散過程進(jìn)行的。

3 討論

高血壓是最常見的慢性非傳染性疾病，也是心血管病最重要的危險因素?？焖俳o藥對高血壓急診病例尤其重要?？谇唤o藥有許多優(yōu)點，避免了肝臟的首過效應(yīng)，提高了藥物的生物利用度，血漿濃度迅速增加保持穩(wěn)定。口頰貼膜的物理特性（如厚度、重量、耐折度值等）對于揭示良好的膜特性是最佳的。膜具有較高的藥物載量，表明藥物已均勻散布在制備好的貼膜中，這樣就可以加載并送達(dá)藥物的治療劑量。貼膜的pH處于良好狀態(tài)，預(yù)期口頰黏膜的pH將不會導(dǎo)致刺激作用，也不會對藥物釋放和多聚物的水合作用造成不良影響。不同配方的膨脹度比較性研究（在pH6.6磷酸鹽緩沖液中）顯示，其順序為F4>F6>F5>F3>F2>F1。SCMC（HV）具有較大的膨脹特性，發(fā)現(xiàn)其在顯示聯(lián)合配方的協(xié)同膨脹效應(yīng)方面起關(guān)鍵作用。根據(jù)最高的膨脹度、最長的駐留時間、最高的和最快速的藥物釋放特性，選擇將配方F4用于藥物穿過豬口頰黏膜的活體外研究。由于黏膜的通透性低以及藥物流的無方向性（由于在活體外研究中存在襯墊膜），因此，與體外藥物釋放率相比，體內(nèi)藥物穿透速度較慢且穿透率更低。正如活體外研究中的配方所顯示的，藥物隨基質(zhì)擴散進(jìn)行釋放呈零階動力學(xué)模式，這最適合于依那普利通過口頰黏膜貼膜獲得更好的心臟病治療效果。

隨著藥物制劑技術(shù)的發(fā)展，新技術(shù)，新材料研究的不斷深入，口腔黏膜給藥系統(tǒng)中口服應(yīng)用和吸收的機制得到了迅速發(fā)展，研究者進(jìn)一步對口腔膜輸送系統(tǒng)的藥物劑型的發(fā)展現(xiàn)狀進(jìn)行了質(zhì)量評價，將對口服劑型的發(fā)展有著十分重要的意義。今后可進(jìn)一步完善和深化口腔黏膜生理結(jié)構(gòu)系統(tǒng)的完整性，學(xué)習(xí)、理解和創(chuàng)新吸收機制，形成完整的知識體系，選擇準(zhǔn)確的輔料篩查方法，建立合理的配方設(shè)計和評估方法；學(xué)習(xí)新的，低毒性的有效吸收促進(jìn)劑。

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