子實(shí)體組織分離法制備食用菌母種

王秀艷

（赤峰學(xué)院　生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古　赤峰　024000）

子實(shí)體組織分離法制備食用菌母種

王秀艷

（赤峰學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古赤峰024000）

針對(duì)食用菌價(jià)格飛漲,菌種供應(yīng)嚴(yán)重不足的矛盾,開展利用地方食用菌資源，利用子實(shí)體組織分離法分離母種的可行性研究.研究結(jié)果表明,子實(shí)體組織分離法制備母種,可使生產(chǎn)成本大大降低,使菇農(nóng)獲得更好的經(jīng)濟(jì)效益，產(chǎn)生較好的社會(huì)效益.

子實(shí)體；菌絲；母種

食用菌在分類上屬于菌物界真菌門，絕大多數(shù)屬于擔(dān)子菌亞門（如平菇、香菇），少數(shù)屬于子囊菌亞門（如羊肚菌）.食用菌歷來是世界人民喜愛的副食品，它具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，含有豐富的蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、糖類、維生素、礦物質(zhì)鹽及少量的脂肪，維生素和礦質(zhì)元素含量也非常豐富.

發(fā)展食用菌生產(chǎn)，對(duì)改善人民的食品結(jié)構(gòu)，增加食品中的營(yíng)養(yǎng)品種，提高食物的營(yíng)養(yǎng)水平，增進(jìn)國(guó)民的健康水平，都有極為重要的意義.食用菌不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，脆嫩爽口的佳肴，而且還有很高的藥用價(jià)值[1].

目前許多以食用菌制成的新藥被陸續(xù)研制出來，如“猴頭菌片”、“參杞靈膠囊”、“疏木甘寧食用菌膠囊”、“立爽食用菌膠囊”、“北蟲草膠囊”、“美寶眠牌康眠膠囊”、“和胃猴菇精膠囊”、“脈根食用菌膠囊”等.可見進(jìn)一步深入研究和探討食用菌的藥用價(jià)值及用途，必將給人類的衛(wèi)生醫(yī)療事業(yè)帶來更大的好處.

食用菌生產(chǎn)可改善和平衡農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境，在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)加工中的許多副產(chǎn)品以及下腳料，如木屑、玉米芯、玉米桿、高粱殼、棉籽殼以及牲畜糞便等都含有纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等.這些有機(jī)物質(zhì)，很難被人類直接利用，牲畜的利用率也很低.常被白白浪費(fèi)掉了，如果將它充分利用起來發(fā)展食用菌生產(chǎn)，便能將這些價(jià)值很低又很難以直接利用的有機(jī)養(yǎng)分，轉(zhuǎn)變?yōu)槿祟惪梢灾苯永玫臓I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為人類提供大量的優(yōu)質(zhì)食品.

1　實(shí)驗(yàn)材料

香菇子實(shí)體平菇子實(shí)體滑子菇子實(shí)體金針菇子實(shí)體雙孢蘑菇子實(shí)體杏鮑菇子實(shí)體（購(gòu)買于赤峰西城菜市場(chǎng)）

2　試驗(yàn)培養(yǎng)基

PDA斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂18-20克、蒸餾水1000毫升.

3　試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)采用斜面培養(yǎng)法并使用常規(guī)培養(yǎng)方法進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，具體工藝流程如下：制備并檢測(cè)PDA斜面培養(yǎng)基→選擇種菇→處理種菇→分離接種→培養(yǎng)→鑒定

3.1制備PDA斜面培養(yǎng)基

選擇質(zhì)量較好的馬鈴薯（無病、未出芽、不干縮）洗凈去皮，挖去芽眼，切成3㎜厚的薄片，稱取200g,加水1000mL,煮沸10-15min，至酥而不爛的程度，用6層紗布過濾一次，取其濾液，加入瓊脂20g,用小火加熱至瓊脂全部溶解，煮沸后加入葡萄糖20g，使藥品全部溶解[2].制備好的培養(yǎng)基趁熱分裝到試管中，分裝好的試管塞上棉塞，防止雜菌污染[3].

塞好棉塞的試管用三層報(bào)紙包扎好，豎直固定在搪瓷缸后放入高壓鍋內(nèi)滅菌30min，滅菌壓力為1.47×105Pa[3].

“‘煤炭老板！’我喊道，那急切的聲音裹在呼出的熱氣里，在嚴(yán)寒中顯得格外沉濁?！薄啊荒荞R上’這兩個(gè)詞多么像鐘聲啊，它們和剛才聽到的附近教堂尖塔上晚鐘的聲響混合在一起，又是怎樣地使人產(chǎn)生了錯(cuò)覺?。　?/p>

滅菌后，待滅菌鍋內(nèi)的溫度降到60℃時(shí)取出試管然后制備成斜面，斜面長(zhǎng)度約占試管總長(zhǎng)度的3/4為宜[3].

凝固后的斜面培養(yǎng)基，在使用前應(yīng)進(jìn)行無菌檢測(cè)，將斜面試管培養(yǎng)基置于30±1℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d，如果3d后培養(yǎng)基表面光滑，無雜菌出現(xiàn)方可使用.

3.2處理種菇

3.2.1選擇標(biāo)準(zhǔn).采摘不能超過24小時(shí)，品系純正，生長(zhǎng)健壯，朵形美觀，肉質(zhì)肥厚，菌蓋未完全展開，無腐爛無病蟲害.3.2.2處理方法.將選好的種菇，剪掉菇柄，用75%的酒精棉球進(jìn)行表面擦拭，放置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，用紫外線照射30分鐘，準(zhǔn)備接種.

3.3分離接種

將選擇并處理好的種菇、解剖刀或者鑷子、斜面試管培養(yǎng)基、酒精燈置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，紫外線照射30分鐘，打開吹風(fēng)機(jī)，點(diǎn)燃酒精燈，首先用鑷子夾取子實(shí)體在酒精燈外焰上快速灼燒正反兩面，然后縱向撕開菌蓋，用鑷子夾取黃豆大小的菌肉組織（不能帶外部組織，夾取時(shí)用力不能過大，以免夾傷或夾死組織塊），快速把組織塊接入PDA斜面培養(yǎng)基的中部，塞上棉塞，整個(gè)過程要嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，動(dòng)作要快，盡量縮短斜面培養(yǎng)基暴露在空氣中的時(shí)間，防止雜菌污染，連續(xù)操作，每種食用菌子實(shí)體分離3管.

3.4培養(yǎng)

將接入子實(shí)體組織塊的試管，及時(shí)移入已消毒的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，溫度控制在23±1℃左右，培養(yǎng)過程中及時(shí)觀察記錄，如有感染雜菌及時(shí)檢出，避免感染其他試管.組織塊分離后1～2天，菌絲即萌發(fā)，并在培養(yǎng)基上蔓延生長(zhǎng)，經(jīng)10～15天培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿試管斜面.

3.5測(cè)量與鑒定

一方面是測(cè)量試管內(nèi)的菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度和記錄生長(zhǎng)時(shí)間來計(jì)算滿管時(shí)間，滿管時(shí)間越短越好.

另一方面是觀察菌絲的長(zhǎng)勢(shì)，具體包括菌絲的顏色、整齊度、濃密度和粗細(xì)方面的鑒定.潔白度高，生長(zhǎng)整齊濃密，粗細(xì)均勻的為優(yōu)質(zhì)菌種[4].

4　結(jié)果與分析

從表1和圖1可以看出，平菇、香菇、杏鮑菇組織塊萌發(fā)最快、其次是雙孢菇、最慢是金針菇和滑子菇，從定植時(shí)間來看平菇最快，其次是杏鮑菇、雙孢菇、香菇、金針菇、滑子菇最慢，滿管時(shí)間來比較最快的是滑子菇、其次是平菇、杏鮑菇、香菇、金針菇，最慢是雙孢菇.

圖1　食用菌菌絲各生長(zhǎng)階段時(shí)間比較

5　結(jié)論

5.1通過對(duì)平菇、雙孢菇、香菇、金針菇、滑子菇和杏鮑菇分離的組織塊菌絲生長(zhǎng)的情況分析得出，用子實(shí)體組織分離法均能夠培育出上述食用菌母種.

5.2六種食用菌在子實(shí)體組織分離法培育母種時(shí)，各母種之間的菌絲生長(zhǎng)情況有所不同；

5.2.1萌發(fā)最快的是平菇、香菇和杏鮑菇，萌發(fā)時(shí)間都是18h；萌發(fā)最慢的是滑子菇和金針菇，分別是56.3h和56.2h.

5.2.2定植最快的是平菇和杏鮑菇，分別是56.3h和63.3h；最慢的是金針菇和滑子菇，分別是92.3h和93h.滿管最快的是滑子菇和平菇，分別是7天和10天，滿管最慢是香菇和金針菇，都是20天.

5.2.3菌絲長(zhǎng)勢(shì)各不相同，最適合子實(shí)體組織分離法培育菌種的是平菇，菌絲濃密潔白，粗細(xì)均勻；其次是香菇和滑子菇，菌絲潔白粗細(xì)均勻，但生長(zhǎng)稀疏；雙孢菇不適合用子實(shí)體組織分離法培育菌種，菌絲質(zhì)量最差，菌絲細(xì)弱、稀疏、發(fā)黃、生長(zhǎng)不旺盛.

〔1〕黃毅.食用菌栽培[M].北京：高等教育出版社，2008.7125-169.

〔2〕王桂芹，王秀艷.食用菌栽培.內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，2001.2-5

〔3〕王秀艷.VB1對(duì)平菇天達(dá)300液體菌種菌絲體和胞外多糖含量的影響[J].

〔4〕吳越.常見食用菌優(yōu)良母種的質(zhì)量鑒定.吉林農(nóng)業(yè)，2012（24）.

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