乳腺癌組織標本庫的創(chuàng)建與管理

溫憲春，李祖彬，陳德慶，葛斌，鮑紅光，曹維海，劉得水，岳麗玲，劉吉成

1.齊齊哈爾醫(yī)學院，黑龍江齊齊哈爾161006；2齊齊哈爾市第一醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾161005

乳腺癌組織標本庫的創(chuàng)建與管理

溫憲春1，李祖彬1，陳德慶2，葛斌2，鮑紅光1，曹維海2，劉得水1，岳麗玲1，劉吉成1

1.齊齊哈爾醫(yī)學院，黑龍江齊齊哈爾161006；2齊齊哈爾市第一醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾161005

目的依托齊齊哈爾醫(yī)學院三所附屬醫(yī)院和齊齊哈爾市第一醫(yī)院的臨床資源，建立一個系統(tǒng)的、規(guī)范的乳腺癌組織標本庫，為臨床和科學研究者提供合適數(shù)量的腫瘤標本，從而促進乳腺癌發(fā)病機理的研究。方法收集乳腺癌患者手術(shù)切除后的新鮮腫瘤組織，包括腫瘤組織1.5 cm距離的癌旁組織、腫瘤組織和距離腫瘤組織＞5 cm的切緣遠端非腫瘤組織以及腫瘤患者的全血和血清/血漿標本。采用一套信息管理體系對于標本進行管理，所有的標本及其相關(guān)臨床信息資料均錄入數(shù)據(jù)庫，可隨時調(diào)用和查詢。結(jié)果從2012年6月創(chuàng)建至2015年3月，共收集261例乳腺癌患者新鮮組織；全血和血清共1 989份，全套標本者176例。結(jié)論建立了一套系統(tǒng)的，具有一定規(guī)模的乳腺癌組織標本資源庫，形成了規(guī)范的管理辦法和建設規(guī)劃，為今后乳腺癌的基礎與臨床研究提供物質(zhì)與信息資源。

乳腺癌；組織標本庫；數(shù)據(jù)庫

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，且其發(fā)病率和病死率仍在逐年增加，在女性腫瘤中居首位［1-2］。因此，有關(guān)乳腺癌細胞和動物模型成為了乳腺癌研究的熱點領域，如果乳腺癌腫瘤標本建設不夠完善，會導致臨床資源的巨大浪費，為了提高腫瘤標本資源管理效率，及時為科研提供優(yōu)質(zhì)的，足夠數(shù)量的標本，齊齊哈爾醫(yī)學院依托三所附屬醫(yī)院和齊齊哈爾市第一醫(yī)院的臨床資源優(yōu)勢，于2012年6月組建乳腺癌組織標本庫，收集乳腺癌患者的腫瘤組織標本、全血、血清和血漿，探索了一條規(guī)范化的樣本采集、轉(zhuǎn)運、儲存和管理辦法［3-5］，為今后開展腫瘤科學研究工作提供服務平臺。

1 乳腺癌組織標本庫的建立

1.1 標本來源及倫理問題

由齊齊哈爾醫(yī)學院三所附屬醫(yī)院和齊齊哈爾齊市第一醫(yī)院收治，經(jīng)各院病理科確診為乳腺癌的患者。在收集患者標本之前，對標本采集以及意義進行說明，必須得到患者以及患者家屬的知情同意書，經(jīng)齊齊哈爾醫(yī)學院倫理委員會批準，并與相對應的病理科和臨床科室進行統(tǒng)一管理和協(xié)商，保證在病理診斷的基礎上收集標本［6］。

1.2 主要儀器設備

-80℃超低溫冰箱（美國Thermo），-150℃超低溫冰箱（海爾），并連接溫度監(jiān)控報警系統(tǒng)；-20℃冰箱（美菱）；液氮罐（四川金鳳低溫設備公司）；醫(yī)用離心機（北京時代北利離心機有限公司）；生物安全柜、取材器械、信息管理軟件、二維條碼打印機及相關(guān)匹配的聯(lián)想電腦等。

1.3 標本收集和處理

1.3.1 組織標本收集、處理及保存在手術(shù)室內(nèi)臨床醫(yī)生選擇相應的病例。在不影響病理診斷取材的情況下，腫瘤組織離體后30 min內(nèi)，按腫瘤、瘤旁和切緣遠端非腫瘤組織區(qū)分，分別切取4～6塊組織（約為0.5 cm×0.5 cm×3 cm），在已經(jīng)標記好二維碼的凍存管放入組織并置于液氮中處理30 min，然后再置放于-80℃超低溫冰箱儲存同時，切取一小塊組織采用石蠟包埋，蠟塊編號，分類存放。

1.3.2 血液標本的收集、處理和保存根據(jù)臨床醫(yī)生選擇的病例，在此病例中收集患者血液標本。采血分為抗凝血和非抗凝血各5 mL，2 h內(nèi)將非抗凝血分離血清，200 μL/管分裝，連同抗凝血（即全血）經(jīng)二維條碼打印機標記，放置于在-80℃超低溫冰箱儲存［7］。

1.4 標本的質(zhì)量控制

1.4.1 腫瘤采取的準確性所有標本均經(jīng)病理專業(yè)技術(shù)人員判定，確保腫瘤癌旁組織和腫瘤組織以及切緣遠端非腫瘤組織的正確采集，明確區(qū)分腫瘤組織與非腫瘤組織，采集者部分組織時，均要注意腫瘤組織的大小、形態(tài)、數(shù)量、硬度、顏色等因素，確保采集各種組織的質(zhì)量。

1.4.2 血液標本的質(zhì)量本研究評價血液標本質(zhì)量均采用血液管理質(zhì)量標準，主要包括：①標本是否出現(xiàn)溶血或者脂血甚至出現(xiàn)黃疸。②確保血液標本達到血液量的標準，保證足量；③標本不能出現(xiàn)凝血。

1.4.3 控制標本的離體時間有專人定時到手術(shù)室內(nèi)收集新鮮的腫瘤組織標本，保證時間控制在標本離體時間在30 min內(nèi)，在采取標本和轉(zhuǎn)運過程中避免腫瘤組織、癌旁組織以及切緣遠端非腫瘤組織相互污染，注意避免基因組DNA、RNA和蛋白的降解。

1.4.4 標本的控制與抽查每日巡查溫度監(jiān)控系統(tǒng)的記錄值，定期檢測低溫冰箱的報警系統(tǒng)，確保組織標本和血液標本的存放環(huán)境，定期采用隨機方式抽取樣本，提取基因組DNA、RNA和蛋白，采用紫外分光光度計測量樣本的濃度和純度。

2 標本庫的日常規(guī)范化管理

2.1 數(shù)據(jù)庫管理

在信息化支持方面，引進了信息化管理軟件，這為信息化建設提供了信息平臺，數(shù)據(jù)庫主要包括：①患者的個人資料，包括患者性別、年齡、家庭收入、職業(yè)等基本資料，臨床資料和病理診斷，行為生活方式等病例資料。②臨床診斷信息：血常規(guī)、胸部CT、血生化等臨床檢查指標。③標本信息：標本編號、日期、腫瘤部位、病變部位和病理類型等信息。④使用管理登記：包括出庫編號、日期、使用人及使用單位和審批人（經(jīng)學院主管領導和標本庫負責人審批后才可使用），登記使用數(shù)量。

2.2 標本庫的管理

通過排班制度，專人負責標本的收集、存儲和出庫工作，定期巡查設備的運行狀態(tài)［8］。標本庫專業(yè)技術(shù)人員保持與各醫(yī)院手術(shù)科室、手術(shù)室、病案室密切聯(lián)系，學院主管領導定期與各所醫(yī)院及時溝通，保證標本收集工作順利進行。

3 結(jié)果

自2012年6月乳腺癌組織標本庫建庫以來，積極與各所醫(yī)院相關(guān)科室進行密切聯(lián)系和溝通，盡可能第一時間收集新鮮的乳腺癌組織標本。截至2014年3月份新鮮乳腺癌組織標本261例，其中導管內(nèi)癌32例，小葉原位癌10例，浸潤性導管癌166例，浸潤性小葉癌53例全血和血清共1989份，其中全套標本（即同例患者同時具有全血、血清和組織標本）有187例，見表1和表2。

同時該院引進標本庫信息數(shù)據(jù)管理軟件，將標本庫管理進入信息化管理模式，到目前為止，標本庫已經(jīng)提供組織標本75份，這些標本所提取DNA、RNA及蛋白質(zhì)量，效果良好。

表1 乳腺癌組織標本庫的構(gòu)成表（例）

表2 乳腺癌組織標本庫血液樣本數(shù)（份）

4 討論

根據(jù)臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)乳腺癌已經(jīng)成為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，且患病人數(shù)呈現(xiàn)逐年增加的趨勢。目前，隨著手術(shù)技術(shù)的成熟和放療化療技術(shù)的發(fā)展，均提高了早期乳腺癌患者的生存率，但是晚期或者是復發(fā)患者的治療仍然是臨床工作的難題，仍居女性因癌癥死亡原因之首［9］。近年來，乳腺癌的基因治療和靶向藥物成為了研究主要發(fā)展對象，在這樣的基礎上，更需要乳腺癌標本庫的建立為臨床研究工作提供足夠數(shù)量和質(zhì)量的標本［10］。

乳腺癌組織標本庫創(chuàng)建為開展乳腺癌疾病發(fā)病機理及臨床治療研究具有重要意義。雖然腫瘤的研究技術(shù)蓬勃發(fā)展，乳腺癌已經(jīng)成為腫瘤研究中的重點領域，但是動物實驗和細胞株的研究均具有一定的局限性，而人的自身組織是研究腫瘤工作的有效途徑。因此建立一定規(guī)模和規(guī)范化管理的標本庫成為了這些研究的基礎。國外已經(jīng)建立起了腫瘤組織庫和規(guī)范化的管理模式［11］，而我國也緊跟國際步伐建立起了腫瘤標本庫，國內(nèi)一些大學、醫(yī)院及科研單位已經(jīng)建立或開始籌備腫瘤組織標本庫，如北京大學、華西醫(yī)科大學及廣州醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院等［7，12-13］。目前東北地區(qū)尚沒有一所院?；蚩蒲袉挝唤⒊梢?guī)模的組織標本庫。因此，齊齊哈爾醫(yī)學院于2012年6月以學校牽頭，各所附屬醫(yī)院和齊齊哈爾第一醫(yī)院醫(yī)院臨床科室、病理科和手術(shù)室協(xié)助，籌建了符合臨床科室和科學研究的乳腺癌標本庫從而整合了各所醫(yī)院寶貴的臨床標本資源。標本庫的建立一方面主要從以下幾個部分嚴把質(zhì)量關(guān)：從標本的采集、轉(zhuǎn)運、儲存、抽檢、管理和出入庫的規(guī)范化管理模式，以滿足科學研究的需要。另一方面嚴格按照標本庫的規(guī)章制度進行管理，必須專人管理，負責取材、處理、入庫、編號及出庫等信息處理，以保證樣本的均一性。

高質(zhì)量的人體標本是乳腺癌分子生物學及臨床研究的先決條件。標本庫必須具有規(guī)范統(tǒng)一的取材標準及定期的質(zhì)量控制，才能保證標本的有效性及穩(wěn)定性。因此建立規(guī)范化、標準化乳腺癌組織標本庫不僅可以充分保護、合理利用臨床資源，而且可為基礎和臨床研究提供高質(zhì)量的服務平臺。

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Construction and Management of Breast Cancer Tissue Specimen Bank

WEN Xian-chun1，LI Zu-bin1，CHEN De-qing2，GE Bin2，BAO Hong-guang1，CAO Wei-hai2，LIU De-shui1，YUE Li-ling1，LIU Ji-cheng1
1.Qiqihar Medical College，Qiqihar，Heilongjiang Province，161006 China；2.Qiqihar First Hospital，Qiqihar，Heilongjiang Province，161005 China

Objective To establish a systematical and standardized breast cancer tissue specimen bank based on the clinical resources of Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical School and Qiqihar First Hospital and provide a suitable number of tumor specimens for clinical and scientific researchers thus promoting the research of breast cancer pathogenesis.Methods The fresh tumor tissues of the patients with breast cancer after resection were collected，including the peritumoral liver tissues at 1.5cm from the tumor tissues，tumor tissues and incisal margin distal non-tumor tissues at＞5 cm from the tumor tissues and whole blood，serum/plasma specimens of the tumor patients，and the specimens were managed by a set of information management system，and all specimens and related clinical information data were input into the database，and could be invoked and inquired.Results From June 2012 to March 2015，261 cases of fresh tissues of patients with breast cancer and 1989 pieces of whole blood and serum and 176 cases of full set of specimens were collected.Conclusion The establishment of a set of systematical breast cancer tissue specimen resource bank with a certain scale and formation of standardized management method and construction plan can provide material and information resources for the basic and clinical research of breast cancer in future.

Breastcancer；Tissuespecimenbank；Database

R737.9

A

1672-5654（2016）10（c）-0008-04

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.30.008

2016-07-24）

國家自然科學基金項目（No.81202084）；齊齊哈爾市科學技術(shù)項目（No.SFGG-201201）。

溫憲春（1980-），男，黑龍江哈爾濱人，碩士，實驗師，研究方向：糖尿病和抗腫瘤。

劉吉成（1958.5-），男，黑龍江勃利人，醫(yī)學博士，教授，研究方向：腫瘤發(fā)病機制，E-mail：qqybliu@126.com。