不同處理和不同保存時間對禽血清抗體水平的影響

黃 凱 王秋艷 丁麗瓊

（福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，福建福州 350000）

不同處理和不同保存時間對禽血清抗體水平的影響

黃 凱 王秋艷 丁麗瓊

（福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，福建福州 350000）

目的，為了探究ELISA試驗中的影響因子對血清抗體水平的影響程度，為禽病檢測提供恰當(dāng)?shù)脑囼灧椒ê蜏?zhǔn)確的試驗數(shù)據(jù)。方法（1）保存時間 選取15份不同抗體水平的血清，在-20℃下保存不同時間，進(jìn)行ELISA檢測。結(jié)果在-20℃條件下保存1w，血清抗體水平無顯著性差異。

凍融；離心；保存時間；抗體水平；ELISA；O D值

1 材料和方法

1.1 試劑

抗體檢測試劑盒由美國新百克斯（SYNBIOTICS）生物科技有限公司提供，禽敗血支原體MG（批號96-6533）、禽滑液囊支原體MS（批號96-6536）、禽呼腸孤病毒REO（批號96-6512）、禽腦脊髓炎病毒AE（批號96-6518），酶標(biāo)儀（thermo），移液器（eppendorf），槍頭（axygen）。

1.2 血清

選擇一大型肉雞養(yǎng)殖場的364日齡健康雞群，通過翅靜脈采集60份血清，所采集的血清無腐敗、溶血、細(xì)菌污染。

1.3 方法

1.3.1 -20℃下不同保存時間對試驗結(jié)果的影響 選取15份不同抗體水平的血清，在-20℃下保存1w和4w，進(jìn)行ELISA檢測，并與新鮮血清的抗體水平進(jìn)行比較。

1.3.2 檢測方法 檢測操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，并保證所有樣品在同一環(huán)境條件下、 由同一人同時進(jìn)行檢測，分別進(jìn)行REO、AE、MG、MS檢測。

2 結(jié)果與分析

（1）試驗中經(jīng)過各種方式處理后的血清，其物理性狀無肉眼可見變化。

（2）-20℃下不同保存時間對試驗結(jié)果的影響 結(jié)果如表4所示。

表4 不同保存時間對-20℃條件下保存的雞血清抗體水平的影響

本試驗中，共檢測了雞血清中的四項抗體水平的指標(biāo)，其中AE、REO、MG三項指標(biāo)在-20℃條件下保存，無顯著性差異。表明在1w之內(nèi)，血清在-20℃下保存的測定結(jié)果是可信的。為以后血清樣品以及合理安排試驗時間提供了理論依據(jù)，這與***研究的結(jié)果相一致。而MS的指標(biāo)在-20℃下保存，隨著時間的延長，抗體水平出現(xiàn)顯著差異。這可能與操作人員的細(xì)心程度相關(guān)。盡管保存時間長短不一，為了保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，最好檢測新鮮的血清。若條件不允許，建議將血清保存于-20℃，并在1w以內(nèi)檢測。

3 討論

-20℃下不同保存時間對試驗結(jié)果的影響：

根據(jù)我國相關(guān)部門規(guī)定，待測血清樣本，在22～25℃條件下保存時間不能超過8 h。如果8 h內(nèi)不能完成檢測，則應(yīng)該放置在4～8℃條件下保存，48 h之內(nèi)不能及時完成檢測的，則應(yīng)該放置在-20℃保存［1］。樣本保存后檢驗結(jié)果的具體變化還少有系統(tǒng)性論述［2］。

然而，盡管不同血液生化檢測指標(biāo)允許血清樣本保存時間長短不一，但是為了保證檢測的準(zhǔn)確性，應(yīng)該盡快進(jìn)行相關(guān)生化指標(biāo)的檢測［3］。而不同動物之間的血清抗體測定指標(biāo)和方法存在著差異。

［1］ 居瑞雪，郎曉東.血液標(biāo)本的采集和質(zhì)量控制［J］.中國醫(yī)藥指南，2008，（11）：162-163.

［2］ 傅瑜，李東升，劉江虹，等.檢驗分析前的質(zhì)量控制及管理［J］.解放軍醫(yī)院管理雜志，2000，（4）：300-301.

［3］ BLAXHALL P C，DAISLEY K W.Routine haematlolgical methods for use with fish blood ［J］. Fish Biology，1973，（5）：771-781.