不同加工方法對杜仲總黃酮含量的影響Δ

魏學(xué)軍，孫曉惠，劉匯麗，何　鑫（黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，貴州都勻　558000）

不同加工方法對杜仲總黃酮含量的影響Δ

魏學(xué)軍＊，孫曉惠，劉匯麗，何鑫（黔南民族醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥學(xué)系，貴州都勻558000）

目的：比較不同加工方法對杜仲總黃酮含量的影響，為杜仲的合理化產(chǎn)地加工提供科學(xué)依據(jù)。方法：將新鮮杜仲制成板片和寬絲2種性狀，各性狀藥材按“發(fā)汗”和未“發(fā)汗”進(jìn)行陰干、曬干、烘干（60、80、100）和微波干燥（5、10、15 min）后曬干等加工方法處理制備樣品。以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法于510 nm波長測定各樣品總黃酮含量。結(jié)果：不同加工方法對杜仲總黃酮含量有影響。同一干燥方法下，未“發(fā)汗”樣品總黃酮含量高于“發(fā)汗”樣品（P＜0.05或P＜0.01）；同一性狀、不同干燥方法下，總黃酮含量微波干燥＞烘干＞曬干＞陰干，以微波干燥10 min后曬干樣品中的總黃酮含量最高；寬絲狀樣品中的總黃酮含量高于板片狀樣品。結(jié)論：若以杜仲總黃酮的藥理作用為主進(jìn)行臨床應(yīng)用時(shí)，建議杜仲采用趁鮮切寬絲、不“發(fā)汗”、微波輔助干燥后曬干的加工方法。

杜仲；總黃酮；紫外分光光度法；加工方法；發(fā)汗

杜仲為杜仲科植物杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）的干燥樹皮，廣泛分布于我國西南部和長江中上游地區(qū)，是我國的特產(chǎn)藥材，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎的功能，臨床多用于腎虛腰痛、筋骨無力、妊娠漏血、胎動(dòng)不安、高血壓癥等[1]。貴州杜仲資源豐富、療效顯著，故貴州被業(yè)內(nèi)公認(rèn)為杜仲的地道產(chǎn)地，并具有極高的藥用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。根據(jù)《本草經(jīng)集注》及相關(guān)文獻(xiàn)，杜仲有采皮陰干、去粗皮曬干[1]和去粗皮“發(fā)汗”后曬干[2]等各種加工方法的記載，但加工標(biāo)準(zhǔn)并不統(tǒng)一，而藥材的產(chǎn)地加工方法是控制藥材品質(zhì)的關(guān)鍵。在現(xiàn)有的加工方法的研究中，多以降壓作用及降壓活性成分松脂醇二葡萄糖苷為考察指標(biāo)[3-4]，而對其他藥效作用及活性成分為指標(biāo)的研究未見文獻(xiàn)報(bào)道。由于杜仲總黃酮具有降血壓、降血脂、抗氧化、抗腫瘤和調(diào)節(jié)骨代謝等廣泛的藥理作用[5-8]，是杜仲的重要活性成分之一。故本試驗(yàn)以總黃酮含量作為評價(jià)指標(biāo)，考察不同性狀、干燥方法及是否“發(fā)汗”對總黃酮含量的影響，探討杜仲的產(chǎn)地加工方法，為全面建立和評價(jià)杜仲加工方法的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料

1.1儀器

Cary 100型雙光束紫外-可見分光光度計(jì)（美國安捷倫科技公司）；AS10200A型超聲波清洗機(jī)（杭州匯爾公司）；IKARV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國Ika公司）；2.0R型低速離心機(jī)（德國Heraeus公司）；G70F20CN3L-C2型微波爐（廣東格蘭仕公司）；DHG-9240A型真空干燥箱（上海金山公司）；AE240型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2藥材、對照品與試劑

杜仲新鮮樹皮（購自貴州都勻王司鎮(zhèn)藥農(nóng)杜仲種植園，樹齡均15年以上，樣品編號(hào)：150520，經(jīng)本校中藥教研室王傳明副教授鑒定為杜仲科植物Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮）；蘆丁對照品（購自中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100080-200707，純度：92.6%）；水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1不同加工方法樣品的制備

將新鮮樹皮刮去粗皮，加工制成板片和寬絲（長約5 cm，寬約1 cm）2種性狀藥材。各性狀藥材取“發(fā)汗”[按2015年版《中國藥典》（一部）杜仲項(xiàng)下“發(fā)汗”方法[2]制備]和未“發(fā)汗”品，按表1干燥方法進(jìn)行處理，得樣品A1～A16。各樣品分為“發(fā)汗”和未“發(fā)汗”2種二級(jí)樣品，二級(jí)樣品均制備3批次備用。

2.2樣品中總黃酮含量的測定

2.2.1供試品溶液的制備[9]稱取杜仲藥材約5 g，剪成碎片后揉成絮狀，精密稱取1 g置于具塞錐形瓶中，加入40倍量95%乙醇，在超聲功率50 W條件下提取30 min。提取液過濾、離心后揮去乙醇，加入60%乙醇溶解并定容至50 ml量瓶中，搖勻，冷藏備用。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品11.06 mg，加入60%乙醇溶解并定容至50 ml量瓶中，搖勻后即得蘆丁對照品溶液。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密移取蘆丁對照品溶液0（第1管）、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分別置于10 ml量瓶中，加60%乙醇至7 ml，加5%亞硝酸鈉溶液0.3 ml，搖勻放置6 min；再加10%硝酸鋁溶液0.3 ml，搖勻放置10 min；加4%氫氧化鈉溶液2 ml，分別用60%乙醇定容，搖勻放置10 min。以第1管溶液為空白對照，在510 nm波長處分別測定吸光度。以蘆丁進(jìn)樣量（c）為橫坐標(biāo)、吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為A＝0.010 1c+0.003 0（r＝0.999 9）。結(jié)果表明蘆丁進(jìn)樣量線性范圍為11～110μg。

2.2.4精密度試驗(yàn)取供試品溶液2.0 ml置于10 ml量瓶中，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作后連續(xù)測定5次吸光度，RSD＝0.57%（n＝5）。

2.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液2.0 ml置于10 ml量瓶中，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作后分別在放置0、10、20、30、60、120 min時(shí)測定吸光度，RSD＝2.23%（n＝6）。

2.2.6重復(fù)性試驗(yàn)取A1未“發(fā)汗”第1批次樣品5份，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。取供試品溶液2 ml置于10 ml量瓶中，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作測定，含量的RSD＝2.67%（n＝5）。

2.2.7加樣回收率試驗(yàn)取已知含蘆丁量的A1未“發(fā)汗”第1批次樣品5份，加入適量蘆丁對照品，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。取各供試品溶液2 ml置于10 ml量瓶中，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作測定并計(jì)算回收率。結(jié)果，蘆丁平均回收率為97.87%（RSD＝2.43%，n＝5）。

2.2.8各樣品含量測定精密移取各樣品不同批次提取所得供試品溶液2.0 ml置于10 ml量瓶中，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作并計(jì)算總黃酮含量。測定值為3批次的均值，結(jié)果見表1。

表1　不同加工方法杜仲總黃酮含量比較（±s，n＝3）Tab 1　Comparison of the contents of total flavonoids in E. ulmoides processed by different methods（±s，n＝3）

表1　不同加工方法杜仲總黃酮含量比較（±s，n＝3）Tab 1　Comparison of the contents of total flavonoids in E. ulmoides processed by different methods（±s，n＝3）

注：與“發(fā)汗”樣品比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與陰干和曬干樣品比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；與寬絲烘干樣品（100）比較，+P＜0.01；與板片微波干燥10min后曬干樣品比較，#P＜0.01Note：vs.“sweating”samples，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.samples dried in the shade and in the sun，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；vs.shredded slices dried（100）by baking，+P＜0.01；vs.flakes dried in the sun after 10 min microwave drying，#P＜0.01

編號(hào)A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 A11 A12 A13 A14 A15 A16“發(fā)汗”品0.351±0.003 0.396±0.010 0.429±0.007 0.513±0.005 0.534±0.005 0.601±0.007 0.611±0.007 0.476±0.005 0.373±0.006 0.448±0.006 0.482±0.003 0.568±0.010 0.505±0.011 0.575±0.006 0.615±0.005 0.469±0.005外觀性狀板片板片板片板片板片板片板片板片寬絲寬絲寬絲寬絲寬絲寬絲寬絲寬絲干燥方法陰干（陰涼處晾15 d）曬干（陽光下曬7 d）60℃烘箱干燥（48 h）80℃烘箱干燥（24 h）100℃烘箱干燥（12 h）微波（700 W）干燥5 min后曬干（24 h）微波（700 W）干燥10 min后曬干（12 h）微波（700 W）干燥15 min后曬干（12 h）陰干（陰涼處晾15 d）曬干（陽光下曬7 d）60℃烘箱干燥（48 h）80℃烘箱干燥（24 h）100℃烘箱干燥（12 h）微波（700 W）干燥5 min后曬干（24 h）微波（700 W）干燥10 min后曬干（12 h）微波（700 W）干燥15 min后曬干（12 h）總黃酮，mg/g未“發(fā)汗”品0.394±0.007＊0.544±0.012＊＊0.647±0.021＊＊ΔΔ0.718±0.009＊＊ΔΔ0.736±0.007＊＊ΔΔ0.740±0.010＊＊ΔΔ0.754±0.012＊＊ΔΔ0.507±0.008＊0.550±0.018＊＊0.661±0.019＊＊0.685±0.008＊＊Δ0.725±0.012＊＊ΔΔ0.709±0.007＊＊ΔΔ0.780±0.012＊＊ΔΔ+0.866±0.008＊＊ΔΔ+#0.660±0.009＊＊

2.3結(jié)果分析

2.3.1杜仲“發(fā)汗”與未“發(fā)汗”對總黃酮含量的影響表1結(jié)果表明，2種性狀藥材采用同一干燥方法處理，“發(fā)汗”杜仲與未“發(fā)汗”杜仲的總黃酮含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），未“發(fā)汗”杜仲高于“發(fā)汗”杜仲。究其原因，可能與水分的散失對總黃酮的溶解度有影響有關(guān)。同一干燥方法，未“發(fā)汗”藥材在初期均較“發(fā)汗”藥材水分的氣化速率快，隨著水分的快速散失，減少了總黃酮的溶解，故含量較高；“發(fā)汗”藥材在覆蓋物下保持?jǐn)?shù)日，溫度升高雖有利于內(nèi)部水分向外部的溢出，但水分蒸發(fā)緩慢或未蒸發(fā)，對總黃酮的溶解影響較小，因而含量較低。

2.3.2干燥方法對未“發(fā)汗”杜仲總黃酮含量的影響由表1可知，2種性狀藥材均以陰干品的總黃酮含量最低，微波干燥10 min后曬干品含量最高。綜合考慮總黃酮含量水平依次為：微波干燥后曬干（除微波干燥15 min后曬干）＞烘干＞曬干＞陰干。同一性狀藥材采用不同干燥方法處理，烘箱干燥和微波干燥與陰干、曬干比較總黃酮含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；微波干燥5、10 min后曬干與微波干燥15 min后曬干總黃酮含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），原因與溫度對水分的蒸發(fā)和對黃酮類成分的影響有關(guān)。當(dāng)微波干燥溫度高時(shí)，在一定時(shí)間范圍內(nèi)可使水分迅速蒸發(fā)而對總黃酮類成分影響較小，因而含量較高；微波干燥15 min后曬干的樣品總黃酮量下降明顯，可能與長時(shí)間高溫對黃酮類成分的破壞有關(guān)[10-11]。

2.3.3藥材性狀對杜仲總黃酮含量的影響2種性狀藥材均以烘干和微波干燥后曬干品的總黃酮含量整體水平高。同一性狀微波干燥后曬干與烘干后樣品中的總黃酮量差異存在不同情況：板片狀微波干燥10 min后曬干樣品與100烘干后樣品總黃酮含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；寬絲微波干燥10 min后曬干總黃酮量與烘干差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同性狀藥材烘干后總黃酮含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而2種性狀樣品經(jīng)微波干燥10 min后曬干的總黃酮含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，寬絲狀高于板片狀樣品。原因可能與寬絲比板片比表面積增大，水分快速蒸發(fā)，致植物細(xì)胞和某些物質(zhì)失活，新陳代謝減少有關(guān)。

3　討論

對藥材進(jìn)行合理的產(chǎn)地加工可以保證藥材品質(zhì)、增強(qiáng)藥物療效。2015年版《中國藥典》記載杜仲的加工方法是去粗皮，“發(fā)汗”后曬干。有研究表明，就降壓作用而言，杜仲采用“發(fā)汗”的加工方法是可行的[3]；另有研究發(fā)現(xiàn)，杜仲“發(fā)汗”后對不同活性成分的含量有影響，可提高醇溶性、水溶性成分含量，而松脂醇二葡萄糖苷含量降低[4]。由于中藥活性成分較多，各活性成分的藥理作用差異較大，臨床治療證候不同，如單一采用藥典方法進(jìn)行加工，可能會(huì)影響不同活性成分含量，難以發(fā)揮各活性成分應(yīng)有的療效，因而有必要針對不同活性成分開展相應(yīng)加工方法的研究。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同性狀、干燥方法及是否“發(fā)汗”對杜仲總黃酮含量有影響。未“發(fā)汗”杜仲與“發(fā)汗”杜仲總黃酮含量差異顯著，未“發(fā)汗”樣品高于“發(fā)汗”樣品。這一結(jié)果表明，如采用藥典方法進(jìn)行“發(fā)汗”加工處理，則杜仲總黃酮含量較低。不同干燥方法，微波干燥后曬干品（除微波干燥15 min后曬干）含量整體水平高，烘干、曬干品漸次，陰干品最低，故不宜采用《本草經(jīng)集注》中“采皮陰干”的加工方法。2種性狀樣品，如采用微波干燥后曬干，寬絲狀與板片狀總黃酮含量存在顯著差異，寬絲狀高于板片狀。

綜上所述，杜仲臨床應(yīng)用時(shí)，如以總黃酮類活性成分的藥理作用為主，建議采用趁鮮切寬絲，不“發(fā)汗”，微波輔助干燥后曬干的加工方法，而不宜采用《中國藥典》記載的“發(fā)汗”后曬干和“采皮陰干”的加工方法。實(shí)際生產(chǎn)中，考慮到設(shè)備成本、操作技術(shù)等原因，在不“發(fā)汗”、趁鮮切寬絲的前提下，采用操作簡單、低成本的烘干或曬干等干燥方法是否可行，尚有待研究人員結(jié)合藥效學(xué)研究進(jìn)一步確定。

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[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：165.

[3]王麗娜，楊美華.傳統(tǒng)發(fā)汗方法對杜仲降壓作用的影響[C]//2010年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國藥師周論文集，天津：中國藥學(xué)會(huì)，2010.

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（編輯：劉萍）

Effects of Different Processing Methods on the Content of Total Flavonoids in Eucommia ulmoides

WEI Xuejun，SUN Xiaohui，LIU Huili，HE Xin（Dept.of Pharmacy，Qiannan Medical College for Nationalities，Guizhou Duyun 558000，China）

OBJECTIVE：To compare the effects of different processing methods on the content of total flavonoids in Eucommia ulmoides so as to provide a scientific basis for reasonable processing of E.ulmoides in the production place.METHODS：Fresh E.ulmoides was made into flakes and shredded slices.The E.ulmoides with the two properties was classified on the basis of“sweating”and“without sweating”and dried in the shade，in the sun or by baking（60，80 and 100）or dried in the sun after microwave drying（5 min，10 min and 15 min）for the preparation of samples.With rutin as the reference substance，ultraviolet spectrophotometry was adopted to determine the contents of total flavonoids in all the samples at a wavelength of 510 nm.RESULTS：Different processing methods had effects on the content of total flavonoids in E.ulmoides.For the samples processed by the same drying method，the content of total flavonoids in those without“sweating”was higher than that in“sweating”ones（P＜0.05 or P＜0.01）；for the samples with the same property and processed by different drying methods，the content of total flavonoids arranged from high to low were microwave drying＞baking＞dried in the sun＞dried in the shade，where the content of total flavonoids in those dried in the sun after 10 min microwave drying was the highest；the content of total flavonoids in the shredded slices was higher than that in the flakes.CONCLUSIONS：For clinical application of the pharmacological action of total flavonoids in E.ulmoides，it is suggested that fresh E.ulmoides cut into shredded slices and without“sweating”should be selected and dried in the sun after microwave drying.

Eucommia ulmoides；Total flavonoids；Ultraviolet spectrophotometry；Processing methods；Sweating

R283

A

1001-0408（2016）28-3967-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.28.24

貴州省民族宗教委員會(huì)民族醫(yī)藥傳統(tǒng)文化研究項(xiàng)目（No.黔族201364）

＊副教授。研究方向：中藥與民族藥質(zhì)量控制。電話：0854-8308038。E-mail：qndywxj@163.com

（2016-02-01

2016-05-11）