丹參酮ⅡA對(duì)重癥胰腺炎肺損傷大鼠的保護(hù)作用研究*

吳燕麗龔 靜△劉 芳

（1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院，湖北 武漢 430030；2.湖北省武漢市第十一醫(yī)院，湖北 武漢 430000）

·研究報(bào)告·

丹參酮ⅡA對(duì)重癥胰腺炎肺損傷大鼠的保護(hù)作用研究*

吳燕麗1龔 靜1△劉 芳2

（1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院，湖北 武漢 430030；2.湖北省武漢市第十一醫(yī)院，湖北 武漢 430000）

目的 探討丹參酮ⅡA對(duì)重癥急性胰腺炎肺損傷的作用及機(jī)制。方法 100只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、血紅素加氧酶-1（HO-1）誘導(dǎo)組、環(huán)氧合酶-2（COX-2）抑制組和丹參酮ⅡA組5組各20只，后4組大鼠采用傳統(tǒng)的?；悄懰徕c法進(jìn)行造模，丹參酮ⅡA組于術(shù)后給予40 mg/kg的丹參酮ⅡA腹腔注射，HO-1誘導(dǎo)組于造模后5 min靜脈注射牛血晶素，COX-2抑制組于造模前2 h灌胃Celeeoxib水溶液，模型組、正常組給予等體積0.9%氯化鈉注射液。分別觀察各組大鼠血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）與HO-1含量，肺組織勻漿中的髓過(guò)氧化物酶 （MPO）、COX-2含量以及肺組織的病理學(xué)變化。結(jié)果 各組大鼠肺組織病理學(xué)改變，正常組大鼠的肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔清晰，肺泡隔無(wú)水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)等改變；模型組大鼠肺間質(zhì)充血明顯伴多量以淋巴細(xì)胞為主的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡隔明顯增厚，部分肺泡代償性擴(kuò)張；HO-1誘導(dǎo)組、COX-2抑制組大鼠肺間質(zhì)輕度充血，肺泡隔輕度增厚，偶見(jiàn)局灶性炎細(xì)胞（淋巴細(xì)胞為主）；丹參酮IIA組大鼠的肺間質(zhì)充血、肺泡隔增厚、增厚范圍及炎細(xì)胞浸潤(rùn)較模型組減輕。造模后3 h，模型組大鼠體內(nèi)TNF-α、HO-1含量均高于正常組（均P＜0.05），隨后模型組大鼠體內(nèi)TNF-α、HO-1含量急劇上升。造模后3 h，HO-1誘導(dǎo)組、COX-2抑制組與丹參酮ⅡA組大鼠體內(nèi)的TNF-α含量開(kāi)始下降，與模型組比較差別不大（P＞0.05）；而HO-1含量開(kāi)始升高與模型組比較差別不大（P＞0.05）；造模后12 h，TNF-α含量與模型組比較下降（P＜0.05），HO-1含量與模型組比較升高（P＜0.05）。造模后3 h，模型組大鼠肺組織中MPO、COX-2含量均高于正常組（均P＜0.05），隨后模型組大鼠肺組織中MPO、COX-2含量均急劇上升（均P＜0.05）。造模后3 h，HO-1誘導(dǎo)組、COX-2抑制組與丹參酮ⅡA組肺組織中MPO、COX-2含量開(kāi)始降低，但與模型組比較差別不大 （均P＞0.05），造模后12 h，MPO、COX-2含量與模型組比較降低（均P＜0.05）。結(jié)論 丹參酮ⅡA對(duì)重癥胰腺炎引起的肺損傷有明顯改善作用，其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)控HO-1與COX-2的表達(dá)發(fā)揮肺損傷的保護(hù)作用。

重癥急性胰腺炎 肺損傷 丹參酮ⅡA 血紅素加氧酶-1 環(huán)氧合酶-2

當(dāng)機(jī)體發(fā)生重癥急性胰腺炎時(shí)，在胰腺本身出現(xiàn)缺血、壞死的基礎(chǔ)上，多合并全身性反應(yīng)，導(dǎo)致其他臟器功能的紊亂，嚴(yán)重者導(dǎo)致多個(gè)臟器功能的衰竭，其中急性肺損傷（ALI）是SAP死亡的首要原因［1］。有資料顯示，機(jī)體內(nèi)血紅素加氧酶-1（HO-1）及環(huán)氧合酶-2（COX-2）的表達(dá)與急性肺損傷的發(fā)生機(jī)制存在著明顯的相關(guān)性［2］。研究發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA對(duì)重癥胰腺炎以及膿毒癥引起的肺損傷均有明顯的保護(hù)作用［3-4］，但其是否通過(guò)調(diào)控HO-1與COX-2的表達(dá)發(fā)揮肺損傷的保護(hù)作用尚不清楚，因此，本研究通過(guò)建立重癥急性胰腺炎大鼠模型，擬觀察重癥急性胰腺炎肺損傷大鼠肺內(nèi)HO-1及COX-2的表達(dá)情況及丹參酮ⅡA干預(yù)后的變化，探討丹參酮ⅡA對(duì)重癥胰腺炎肺損傷保護(hù)的具體機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠100只，體質(zhì)量180～220 g，由同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（動(dòng)物合格證號(hào):SCXK鄂2009-0003）。

1.2 藥物和試劑 丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液 （諾新康，2 mL∶10 mg，上海第一生化藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，國(guó)藥準(zhǔn)字H31022558）；牛血晶素（HO-1誘導(dǎo)劑），美國(guó)B&D公司生產(chǎn)；?；悄懰徕c，Celeeoxib美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)；髓過(guò)氧化物酶（MPO）檢測(cè)試劑盒，由武漢博士德生物有限公司提供；白介素-10（IL-10）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、HO-1與COX-2 ELISA檢測(cè)試劑盒，均由北京華耐特生物科技有限公司提供，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 分組與造模 100只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組，即正常組、模型組、HO-1誘導(dǎo)組、COX-2抑制組以及丹參酮ⅡA組，每組20只。采用3%的戊巴比妥鈉靜脈注射充分麻醉大鼠，于大鼠腹正中線作切口常規(guī)開(kāi)腹，逐層入腹，充分暴露肝門(mén)部肝總管及胰膽管，血管夾夾閉膽胰管入肝門(mén)段及十二指腸處，并逆行膽胰管內(nèi)注射器注射5%?；悄懰徕c（0.1 mL/100 g），觀察到腹腔胰腺組織出現(xiàn)彌漫性出血點(diǎn)時(shí)拔出針頭，去除血管夾，縫合腹部。

1.4 給藥方法 HO-1誘導(dǎo)組于造模后5min向腸系膜靜脈注射牛血晶素75 μg/kg。丹參酮ⅡA組術(shù)后腹腔注射40 mg/kg的丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液。COX-2抑制組于造模前2 h灌胃Celeeoxib水溶液，正常組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃。5組大鼠均于同一環(huán)境下飼養(yǎng)。

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè) 各組于造模后3、12 h分別進(jìn)行腹部動(dòng)脈采血，獲得血清用于TNF-α、HO-1檢測(cè)，然后分別處死10只大鼠，立即取右肺下葉按試劑盒要求進(jìn)行MPO、COX-2活性檢測(cè)。其中TNF-α、HO-1、MPO、COX-2含量測(cè)定按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作；造模后12 h HE染色觀察大鼠肺組織病理學(xué)變化，依次采用甲醛固定、石蠟包埋、切片（5 μm）、HE染色、光鏡觀察肺組織病理學(xué)變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，組間不同時(shí)間點(diǎn)采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析。計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠肺組織病理學(xué)改變 見(jiàn)圖1。如圖示，正常組大鼠的肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔清晰，肺泡隔無(wú)水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)等改變；模型組大鼠肺間質(zhì)充血明顯伴多量以淋巴細(xì)胞為主的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡隔明顯增厚，部分肺泡代償性擴(kuò)張；HO-1誘導(dǎo)組、COX-2抑制組大鼠肺間質(zhì)輕度充血，肺泡隔輕度增厚，偶見(jiàn)局灶性炎細(xì)胞（淋巴細(xì)胞為主）；丹參酮ⅡA組大鼠的肺間質(zhì)充血、肺泡隔增厚、增厚范圍及炎細(xì)胞浸潤(rùn)較模型組減輕。

圖1 各組大鼠肺組織病理學(xué)改變（HE染色，10倍）

2.2 各組大鼠血清中TNF-α、HO-1含量比較 見(jiàn)表1。結(jié)果示，造模后3 h，模型組大鼠體內(nèi)TNF-α、HO-1含量均高于正常組（均P＜0.05），隨后模型組大鼠體內(nèi)TNF-α、HO-1含量急劇上升。HO-1誘導(dǎo)組、COX-2抑制組與丹參酮ⅡA組造模后3 h，大鼠體內(nèi)的TNF-α含量開(kāi)始下降，與模型組比較差別不大（P＞0.05）；而HO-1含量開(kāi)始升高與模型組比較差別不大 （P＞0.05）；造模后12 h，TNF-α含量與模型組比較下降（P＜0.05），HO-1含量與模型組比較升高（P＜0.05）。

表1 各組大鼠造模后血清中TNF-α、HO-1含量比較（ng/mL，±s）

表1 各組大鼠造模后血清中TNF-α、HO-1含量比較（ng/mL，±s）

與正常組同時(shí)期比較，*P＜0.05；與模型組同時(shí)期比較，△P＜0.05。下同。

組別 時(shí)間 TNF-α HO-1正常組 3 h 18.76±2.45 156.04±23.45（n＝10） 12 h 26.61±4.50 161.45±23.60模型組 3 h 126.72±4.13*182.43±25.07*（n＝10） 12 h 270.34±17.48*569.72±43.24*HO-1誘導(dǎo)組 3 h 113.49±3.57 192.96±22.42*（n＝10） 12 h 134.24±12.31△899.31±58.12△COX-2抑制組 3 h 109.50±3.02 189.47±23.05*（n＝10） 12 h 131.38±11.15△772.12±43.52△丹參酮ⅡA組 3 h 114.33±3.61 196.04±25.23*（n＝10） 12 h 102.47±8.49△905.44±53.07△

2.3 各組大鼠肺組織中MPO、COX-2含量比較 見(jiàn)表2。結(jié)果示，造模后3 h，模型組大鼠肺組織中MPO、COX-2含量均高于正常組（均P＜0.05），隨后模型組大鼠肺組織中MPO、COX-2含量均急劇上升 （均P＜0.05）。造模后3 h，HO-1誘導(dǎo)組、COX-2抑制組與丹參酮ⅡA組肺組織中MPO、COX-2含量開(kāi)始降低，但與模型組比較差別不大（均P＞0.05），造模后12 h，MPO、COX-2含量與模型組比較降低（均P＜0.05）。

表2 各組大鼠肺組織中MPO、COX-2含量比較（±s）

表2 各組大鼠肺組織中MPO、COX-2含量比較（±s）

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3 討 論

急性胰腺炎發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜［5］，資料顯示，病因刺激機(jī)體后可以激活胰酶，繼而胰腺發(fā)生炎癥反應(yīng)［6］。該病往往伴發(fā)有其他器官的相關(guān)疾?。?］。急性胰腺炎往往會(huì)引起全身發(fā)生炎癥，約四分之一的患者往往最后發(fā)展為重度急性胰腺炎，其病死率高達(dá)31%［8］。急性肺損傷是在重癥急性胰腺炎發(fā)病初期伴發(fā)的一種很常見(jiàn)的但很?chē)?yán)重的全身性癥狀［9］。目前，根據(jù)與重癥急性胰腺炎伴發(fā)相關(guān)性肺損傷疾病相關(guān)的大量資料，可以發(fā)現(xiàn)體內(nèi)含有的IL-1等多種炎性因子既有利于推動(dòng)急性胰腺炎局部炎癥的發(fā)展，也有助于引發(fā)機(jī)體全身發(fā)生炎癥反應(yīng)，某些促炎因子過(guò)表達(dá)往往會(huì)加劇急性胰腺炎的嚴(yán)重程度。COX-2是體內(nèi)一種非常重要的關(guān)鍵酶，其與炎癥的關(guān)系相當(dāng)密切，因此其被稱為啟動(dòng)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵酶［10］。研究表明HO-1是一種應(yīng)激蛋白，當(dāng)機(jī)體遭受到外界的氧化應(yīng)激的時(shí)候，機(jī)體就會(huì)自發(fā)地激活體內(nèi)的抗氧化保護(hù)系統(tǒng)，而HO-1就是其中一員［11］。

本研究病理學(xué)結(jié)果表明HO-1誘導(dǎo)組和COX-2抑制組大鼠肺組織的病理學(xué)損害得到明顯改善；與正常組比較，模型組大鼠造模后3 h，大鼠體內(nèi)的TNF-α、HO-1、MPO與COX-2含量均升高。與模型組比較，HO-1誘導(dǎo)組與COX-2抑制組大鼠經(jīng)治療后均有不同程度恢復(fù)，其中12 h時(shí)恢復(fù)顯著，該結(jié)果與先前報(bào)道結(jié)果一致［11-12］。因此重癥急性胰腺炎肺損傷大鼠HO-1與COX-2均高表達(dá)，HO-1高表達(dá)可以抗肺損傷，而COX-2高表達(dá)則會(huì)加劇肺損傷。

丹參酮ⅡA是中藥丹參的主要成分之一，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA有消炎抗菌、消除氧自由基、抗氧化等作用，可降低TNF-α、IL-1、IL-6等關(guān)鍵炎癥因子的表達(dá)［13-15］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，丹參酮ⅡA干預(yù)后，大鼠的肺間質(zhì)充血、肺泡隔增厚、增厚范圍及炎細(xì)胞浸潤(rùn)較模型組明顯減輕，且能提高重癥急性胰腺大鼠血HO-1水平，降低重癥急性胰腺大鼠肺COX-2水平，同時(shí)也改善了炎性因子TNF-α和MPO的異常水平的變化，結(jié)果示丹參酮ⅡA對(duì)重癥胰腺炎引起的肺損傷有明顯的改善作用，其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)控HO-1與COX-2的表達(dá)發(fā)揮肺損傷的保護(hù)作用。

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The Effect of TanshinoneⅡA on Lung Injury with Severe Acute Pancreatitis in Rats

WU Yanli，GONGJing，LIU Fang. Tongji Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology，Hubei，Wuhan 430030，China.

Objective:To investigate the effect and mechanism of TanshinoneⅡA on lung injury with severe acute pancreatitis in rats.Methods:The rats were randomly divided into the normal group，the model group，HO-1 induced group，COX-2 inhibition group and TanshinoneⅡA group.The latter four groups of rats were modeled by traditional method of taurocholic acid sodium.Rats in TanshinoneⅡA group were given 40mg/kg TanshinoneⅡA intraperitoneal injection after the operation.Rats in HO-1 induced group were injected hemin by intravenous 5 min after modeled.2 h before the building lavage，rats in COX-2 inhibition group were given Celeeoxib aqueous solution by gavage.Rats in the model group were given the same volume of saline.The content of TNF-α and HO-1 in serum，MPO and COX-2 in lung tissue homogenate and pathological changes of lung tissue were detected.Results:Compared with the normal group，TNF-α，HO-1，MPO，and COX-2 contents in rats in the model group were significantly increased（P＜0.05）.Pathological changes were observed in lung tissue.Compared with the model group，rats in TanshinoneⅡA group，HO-1 induced group and COX-2 inhibition group all had differ-ent degrees of recovery after treatment，especially after 12 hours of treatment（P＜0.05）.Conclusion:HO-1 and COX-2 contents in the lung injury rats all increase.The high expression of HO-1 can resist the lung injury，and the high expression of COX-2 will aggravate the lung injury.Tanshinone IIA can improve the lung injury induced by severe acute pancreatitis，The mechanism may be related to the regulation of the expression of HO-1 and COX-2.

Severe acute pancreatitis；Lung injury；TanshinoneⅡA；Heme oxygenase-1；Cyclooxygenase 2

R285.5

A

1004-745X（2016）10-1870-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.10.011

湖北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2012FFB02410）

△（電子郵箱：beidxing@163.com）

（2016-06-24）