靶向CD123抗原嵌合受體T細(xì)胞治療急性髓系白血病的研究

孫耀 張斌 陳虎

·綜述·

靶向CD123抗原嵌合受體T細(xì)胞治療急性髓系白血病的研究

孫耀 張斌 陳虎

急性髓系白血病（AML）是一種預(yù)后較差的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，迫切需要新的治療手段。隨著嵌合抗原受體（CAR）T細(xì)胞（CAR-T）技術(shù)的發(fā)展并在B細(xì)胞腫瘤中取得顯著療效，人們把目光投入更多的實(shí)體瘤與血液腫瘤靶點(diǎn)中。CD123分子是CAR-T治療AML的潛在靶點(diǎn)，抗CD123 CAR-T具有靶向清除白血病干細(xì)胞（LSCs）及原始細(xì)胞的能力。本研究總結(jié)了目前在靶向CD123 CAR-T治療急性髓系白血病目前的研究進(jìn)展。

白血病，急性； 抗原； 受體； 干細(xì)胞； 白細(xì)胞介素3受體α亞單位； T細(xì)胞

急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia，AML）是血液系統(tǒng)的一種惡性腫瘤，以克隆性增殖異常分化的惡性細(xì)胞浸潤骨髓、血液及其他組織為特點(diǎn)［1-2］。大量研究表明AML起源于一群數(shù)量相對較小的干祖細(xì)胞，即白血病干細(xì)胞（leukemia stem cells，LSCs）。CD123是一種包含360氨基酸的糖蛋白，廣泛地表達(dá)在白血病原始細(xì)胞和白血病干細(xì)胞表面，尤其是AML。目前已研發(fā)出幾種靶向CD123的單克隆抗體類藥物并正在進(jìn)行臨床前及臨床試驗(yàn)，靶向CD123的抗原受體（chimeric antigen receptor-modifyin，CAR）T細(xì)胞（CAR-T）治療也已完成臨床前研究并顯示出顯著的抗瘤效應(yīng)，目前處于Ⅰ期臨床試驗(yàn)階段。

一、AML治療現(xiàn)狀

自40多年前阿糖胞苷3 d，環(huán)磷酰胺7 d化療方案取得成功后，AML不再是不治之癥，但此后在AML治療上沒有突破性進(jìn)展［3］。至今AML仍是一種威脅生命的惡性腫瘤，總生存率為70﹪，在60歲以下成人中治愈率為35～40﹪，而在60以上成人中治愈率僅為5﹪～15﹪［4-5］。對于誘導(dǎo)緩解失敗的患者，5年生存率僅7﹪～12﹪［6］。對于復(fù)發(fā)難治AML最好的治療辦法仍然是異基因造血干細(xì)胞移植（hematopoietic stem cell transplantation，allo-HSCT），而其造成的移植物抗宿主?。╣raft-versus-host disease，GVHD）、感染等嚴(yán)重并發(fā)癥也影響了患者的生存。

二、CD123是AML的治療靶點(diǎn)

（一）CD123是白血病干細(xì)胞主要標(biāo)志

隨著對白血病發(fā)病機(jī)制的深入研究，發(fā)現(xiàn)在髓系白血病中存在一群保持自我更新分化能力的白血病細(xì)胞，即LSCs，其在白血病細(xì)胞中數(shù)量較少，主要呈靜止?fàn)顟B(tài)［7］。LSCs在表面分子上以CD34+，CD38-，CD71-，HLA-DR-，CD90-，CD123-，CLL-1+，TIM3+等為特點(diǎn)［7-11］。

目前許多化療藥物治療腫瘤的機(jī)制是殺滅分裂期細(xì)胞，AML化療也是如此并極易復(fù)發(fā)，LSCs的存在也許解釋了AML化療后易復(fù)發(fā)的原因。并且，相關(guān)報(bào)道已證實(shí)LSCs在一定程度上對柔紅霉素加阿糖胞苷方案不敏感［7］。所以有效針對LSCs的治療，可能會成為治療復(fù)發(fā)難治AML的新策略。

表1 基于CD123單抗藥物現(xiàn)狀

（二）CD123表達(dá)情況

CD123是一種糖蛋白，同時也是白細(xì)胞介素3受體跨膜α亞單位（IL-3Ra），與CD131一起組成高親和力的IL-3受體，一旦與IL-3結(jié)合，則促進(jìn)細(xì)胞增殖及存活。

1. CD123正常表達(dá)

CD123主要在造血系統(tǒng)中表達(dá)，CD123在正常CD34+CD38-細(xì)胞中低表達(dá)或者不表達(dá)［12］，Taussig等［13］發(fā)現(xiàn)，在臍帶血中大多數(shù)CD34+/CD38-細(xì)胞表達(dá)CD123，而骨髓CD34+/CD38-細(xì)胞中CD123+細(xì)胞比例較低。此外，正常情況下在髓系祖細(xì)胞、B淋巴祖細(xì)胞中CD123有較高表達(dá)，而紅系祖細(xì)胞和多向分化潛能祖細(xì)胞中低表達(dá)或不表達(dá)［14-15］；漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞與嗜堿性粒細(xì)胞中高表達(dá)，而在嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和髓系樹突狀細(xì)胞中低表達(dá)［16］。

2.CD123異常表達(dá)

CD123在AML-LSC及AML原始細(xì)胞均高表達(dá)［12，17-18］。在NSG小鼠模型中，CD34+/CD38-/CD123+細(xì)胞群較 CD34+/ CD38-/CD123+細(xì)胞群有更強(qiáng)的重建AML能力；AML原始細(xì)胞中CD123的高表達(dá)與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子5（signal transducer and activator of transcription 5， STAT5）信號通路的活化相關(guān)。在臨床上，初診時原始細(xì)胞數(shù)量越高的患者，CD123的表達(dá)水平越高；CD123高表達(dá)的患者與CD123正常患者相比預(yù)后更差［19］。這些研究都說明CD123可能與白血病的發(fā)生密切相關(guān)。

除了在AML中表達(dá)，CD123在慢性粒細(xì)胞白血病，骨髓增生異常綜合癥及肥大細(xì)胞增多癥，B-細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血?。˙-cell acute lymphocytic leukemia，B-ALL）［20］中也有所表達(dá)。最近，Du等［21］首次報(bào)道T-細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病（T-cell acute lymphocytic leukemia，T-ALL）也表達(dá)CD123。

Jingmei等［22］發(fā)現(xiàn)CD123在造血干細(xì)胞移植后急性GVHD患者中升高，可作為一個重要輔助指標(biāo)用于鑒別急性GVHD及巨細(xì)胞病毒感染，特別是對于胃腸道病變。

CD123是LSCs的主要標(biāo)志，同時在AML原始細(xì)胞中表達(dá)比例明顯高于正常細(xì)胞，尤其是CD34+CD38-細(xì)胞，使CD123成為AML靶向治療可行靶點(diǎn)，并且有望為AML治療帶來新的突破。

（三）靶向CD123抗體藥物

目前關(guān)于CD123單抗藥物的研究總結(jié)見表1。靶向CD123的抗體藥物雖然均處于早期臨床試驗(yàn)階段，也并未展現(xiàn)出突出療效，但仍是目前研究的熱點(diǎn)。Ⅰ期臨床研究中患者表現(xiàn)展現(xiàn)出良好的耐受性，沒有出現(xiàn)嚴(yán)重的血液系統(tǒng)不良反應(yīng)。針對漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞腫瘤的治療（SL-401）取得了較高緩解率，其中一名患者緩解時間長達(dá)20個月以上，但初始有反應(yīng)的3名患者復(fù)發(fā)后再次治療均無效［23］。而在另一項(xiàng)針對AML臨床研究（CSL360）中完全反應(yīng)率較低，僅1/27達(dá)CR［20］，說明靶向CD123的抗體藥物尚需要通過優(yōu)化抗體親和力、多靶點(diǎn)抗體結(jié)合等方法，增強(qiáng)抗腫瘤活性。

表2 CART123臨床前研究匯總

（四）CD123 CART臨床前研究

目前關(guān)于CD123的臨床前研究匯總于表2，部分研究中發(fā)生造血系統(tǒng)毒性，安全性有待商榷。Pizzitola等［25］將CD28、OX40共刺激分子作為胞內(nèi)段，較二代CAR增加了IFN-γ，TNF-α，TNF-β和IL-2等細(xì)胞因子分泌水平，提高了抗腫瘤效應(yīng)，且沒有增加其對造血系統(tǒng)的毒性。Moretti等［16］研究發(fā)現(xiàn)，來自臍血的CD34+正常造血祖細(xì)胞與CART123共培養(yǎng)后仍保留正常增殖分化能力。Gill等［26］首次提出CART123安全性問題，他們在體外及胎肝CD34+細(xì)胞重建的NSG小鼠模型中均觀察到CART123引起嚴(yán)重的造血系統(tǒng)，主要是CD34+CD38-細(xì)胞，及B淋巴細(xì)胞、血小板及髓系細(xì)胞數(shù)量的減少，并建議將CART123作為一種HSCT前的清髓方案更加安全。當(dāng)然，不同來源造血組織CD123表達(dá)水平不一，Huang等［15］指出在CD34+胎肝細(xì)胞中CD123表達(dá)水平高于臍血或骨髓來源CD34+細(xì)胞。由于個體、組織來源不同均可導(dǎo)致CD123表達(dá)水平的差異，故靶向表達(dá)CD123正常細(xì)胞引起的毒性反應(yīng)不可避免。選擇合理閾值采取干預(yù)措施，或通過scFv，CAR結(jié)構(gòu)的改善提高特異性，可能成為未來提高CART123安全性的策略?？紤]到AML移植后患者易感染EB病毒，巨細(xì)胞病毒等病毒且常規(guī)藥物治療療效差或副作用大，最近Zhou等［28］設(shè)計(jì)了一種CD123-CAR-VST，既能殺傷CD123+AML細(xì)胞又對EMV等病毒感染有一定的控制作用。

表3 其他治療AML的CART研究進(jìn)展

Tasian等［29］假設(shè)CART123清除體內(nèi)AML細(xì)胞后及時清除CART細(xì)胞，能夠在一定程度上保持對AML的控制同時減少靶向CD123毒性發(fā)生，并且比較了3種不同方法清除CART的效果。

Ruella等［30］發(fā)現(xiàn)80﹪的B-ALL原始細(xì)胞中表達(dá)CD123，并在CD19陰性復(fù)發(fā)的B-ALL腫瘤細(xì)胞中檢測到。在體外實(shí)驗(yàn)和動物模型中，CART123不僅能有效清除B-ALL腫瘤細(xì)胞，并且CART19聯(lián)合CART123相比CART19能更有效清除CD19陰性復(fù)發(fā)腫瘤細(xì)胞，可能解決目前CART19治療后復(fù)發(fā)率的問題。

Celletis公司繼UCART19后，研發(fā)了異體UCART123，通過TALEN技術(shù)敲除TCRα消除GvHD作用，從而可實(shí)現(xiàn)“off-the-shelf”，即通過正常供者T細(xì)胞大規(guī)模制備CART，較自體CART明顯縮短制備時間［31］。

（五）CD123 CAR-T臨床試驗(yàn)方案

截至目前，有兩個CD123 CAR-T治療AML患者的Ⅰ期臨床試驗(yàn)在開展中。第一個是由美國希望之城醫(yī)學(xué)中心注冊（NCT02159495），采用CAR123-28z結(jié)構(gòu)，以減少CAR-T體內(nèi)存留時間，因?yàn)槲墨I(xiàn)表明以CD28作為胞內(nèi)段的第二代CAR結(jié)構(gòu)在體內(nèi)存活時間僅1個月［32］；并且攜帶有自殺基因EGFRt，能夠在EGFR單抗作用下清除CAR-T。此外，他們將CART123作為allo-HSCT前的清髓方案，以最大限度減少腫瘤負(fù)荷［6］。第二個是由Pennsylvania大學(xué)注冊的CD123-BBz二代CAR（NCT02623582），由于前期研究中發(fā)現(xiàn)了對造血系統(tǒng)的損傷，在臨床試驗(yàn)中采用電轉(zhuǎn)RNA-CART多次輸注策略確保安全。

在57th ASH會議上，Luo等［27］口頭報(bào)告了首例CART123治療AML患者案例。他們設(shè)計(jì)的CD123-scFv/ CD28/CD137/CD27/CD3ζ-iCasp9（4SCAR123）4代CAR在患者接受預(yù)處理（CTX 250mg/kg/day3天方案）后輸注。輸注后患者出現(xiàn)了嚴(yán)重細(xì)胞因子風(fēng)暴綜合癥，通過單次給與妥珠單抗Tocilizumab（IL-6R拮抗劑）后得到控制?；颊叩墓撬柙技?xì)胞治療前59﹪，CART輸注后20 d降低至40﹪，并尚未觀察到嚴(yán)重毒副作用。

（六）其他治療AML的CAR-T細(xì)胞靶點(diǎn)

目前治療AML的CAR-T研究臨床試驗(yàn)注冊情況如表3所示，除CD123以外，僅靶向CD33和Lewis Y的研究公布了臨床試驗(yàn)階段的數(shù)據(jù)。目前主要的AML治療靶點(diǎn)有CD33，Lewis Y，F(xiàn)Rβ。此外，TIM-3，CLL-1等由于其表達(dá)特異性，也有望成為AML治療靶點(diǎn)［11，33］。

1. CD33：CD33（Siglec-3）在90﹪的AML原始細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，同時在多能髓系祖細(xì)胞，成熟粒、單細(xì)胞及單能干細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá)［34-39］。CD33是AML中第一個用于單抗藥物及免疫治療治療的表面分子。但由于白血病細(xì)胞及正常造血細(xì)胞中表達(dá)水平相近，缺乏特異性，在臨床試驗(yàn)中觀察到明確的毒性而致使安全性未得到一直公認(rèn)［40］。一些關(guān)于CART-33的臨床前研究顯示了其抗腫瘤效應(yīng)［41］，其中Marin等［42］觀察到其對nHPCs的毒性，解放軍總醫(yī)院Wang等［39］開展了全球首例CART-33臨床試驗(yàn)（NCT01864902）并且治療了1例AML患者。盡管觀察到了短暫的療效，其安全性及有效性仍待進(jìn)一步探討。不幸的是介于CD33單抗藥物GO的嚴(yán)重副作用，關(guān)于CD33的臨床試驗(yàn)?zāi)壳氨粫和?。而Pizzitola等［25］研究發(fā)現(xiàn)相比于CART33，CART123有同等的抗AML效應(yīng)且安全性更好。

2. Lewis Y：Lewis Y是一種功能尚未知的巖藻糖抗原，它在大量蛋白中均可檢測到，包括腫瘤相關(guān)抗原［43］。并且在包括AML在內(nèi)的廣泛惡性腫瘤中表達(dá)拷貝數(shù)很高，而在正常組織中表達(dá)較低，其表達(dá)越多預(yù)后越差［44］。

3.FRβ：葉酸受體（FR）家族由α，β，γ和δ 4個已知成員組成的一組葉酸結(jié)合蛋白受體，并且這些受體的分布具有組織特異性：FRα主要分布于上皮組織，而FRβ主要分布于髓系造血細(xì)胞中［45］。這些受體在惡性腫瘤中普遍出現(xiàn)上調(diào)，其中FRβ在70﹪左右的AML患者腫瘤中檢測到，使其成為一個AML治療具有潛力的靶點(diǎn)［46-47］。

五、結(jié)論

將目前基于7G3序列的CD123單抗藥物在Ⅰ期臨床試驗(yàn)中的結(jié)果并不理想，而相應(yīng)的CART123在臨床前的試驗(yàn)中顯示出明顯的抗腫瘤效應(yīng)［25，48］，說明了CAR-T在髓系腫瘤上應(yīng)用的潛能。研究已表明，從CAR結(jié)構(gòu)上，4-1BB胞內(nèi)段能避免T細(xì)胞無反應(yīng)性，并促進(jìn)T細(xì)胞增殖及產(chǎn)生記憶細(xì)胞，對T細(xì)胞在體內(nèi)的持續(xù)明顯優(yōu)于CD28，且4-1BBL優(yōu)于4-1BB胞內(nèi)段設(shè)計(jì)，而CD28胞內(nèi)段設(shè)計(jì)則優(yōu)于CD80胞外段［49］，意味著未來CAR-T設(shè)計(jì)將不斷優(yōu)化，獲得更好療效。而同時介于CART123可能帶來的造血毒性，增加CART123可控性成為開展臨床試驗(yàn)的必要前提。除了瞬時轉(zhuǎn)染、序貫以allo-HSCT以外，還可采用iCAR-T［50］、synNotch CAR［51-52］等設(shè)計(jì)可能會減少其脫靶效應(yīng)的發(fā)生率；另一方面，采用HSV-TK kinases自殺基因策略，可殺滅增殖中的CAR-T細(xì)胞，控制GVHD作用，而保有少量CAR-T在體內(nèi)，起到免疫監(jiān)視作用［53］，最新的相關(guān)“分子開關(guān)”機(jī)制，通過抗體藥物或小分子藥物調(diào)控CAR-T在體內(nèi)發(fā)揮作用［54-57］，也給CAR-T治療可控性帶來了新的思路?？偠灾行У目鼓[瘤效果結(jié)合適當(dāng)?shù)目煽匦?，將是未來CART123治療AML 的發(fā)展方向。

1 Dohner H， Weisdorf DJ， Bloomfield CD. Acute myeloid leukemia［J］. N Engl J Med， 2015， 373（12）：1136-1152.

2 陸曉茜， 馬志貴， 高舉， 等. 維A酸X受體信號通路與白血?。跩］. 器官移植， 2014， 5（6）：383-388.

3 Grosso DA， Hess RC， Weiss MA. Immunotherapy in acute myeloid leukemia［J］. Cancer， 2015， 121（16）：2689-2704.

4 Creutzig U， Van Den Heuvel-Eibrink MM， Gibson B， et al. Diagnosis and management of acute myeloid leukemia in children and adolescents： recommendations from an international expert panel［J］. Blood， 2012， 120（16）：3187-3205.

5 D?hner H， Estey EH， Amadori S， et al. Diagnosis and management of acute myeloid leukemia in adults： recommendations from an international expert panel， on behalf of the European LeukemiaNet［J］. Blood， 2010， 115（3）：453-474.

6 Mardiros A， Forman SJ， Budde LE. T cells expressing CD123 chimeric antigen receptors for treatment of acute myeloid leukemia［J］. Curr Opin Hematol， 2015， 22（6）：484-488.

7 Konopleva MY， Jordan CT. Leukemia stem cells and microenvironment： biology and therapeutic targeting［J］. J Clin Oncol，2011， 29（5）：591-599.

8 Lapidot T， Sirard C， Vormoor J， et al. A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice［J］. Nature，1994， 367（6464）：645-648.

9 Forman SJ， Rowe JM. The myth of the second remission of acute leukemia in the adult［J］. Blood， 2013， 121（7）：1077-1082.

10 Jordan CT. Unique molecular and cellular features of acute myelogenous leukemia stem cells［J］. Leukemia， 2002， 16（4）：559-562.

11 Kikushige Y， Shima T， Takayanagi S， et al. TIM-3 is a promising target to selectively kill acute myeloid leukemia stem cells［J］. Cell Stem Cell，2010， 7（6）：708-717.

12 Jordan CT， Upchurch D， Szilvassy SJ， et al. The interleukin-3 receptor alpha chain is a unique marker for human acute myelogenous leukemia stem cells［J］. Leukemia， 2000， 14（10）：1777-1784.

13 Pelosi E， Castelli G， Testa U. Targeting LSCs through membrane antigens selectively or preferentially expressed on these cells［J］. Blood Cells Molecules and Diseases， 2015， 55（4）：336-346.

14 Wognum AW， De Jong MO， Wagemaker G. Differential expression of receptors for hemopoietic growth factors on subsets of CD34+hemopoietic cells［J］. Leuk Lymphoma， 1996， 24（1/2）：11-25.

15 Huang S， Chen Z， Yu JF， et al. Correlation between IL-3 receptor expression and growth potential of human CD34+hematopoietic cells from different tissues［J］. Stem Cells， 1999， 17（5）：265-272.

16 Moretti S， Lanza F， Dabusti M， et al. CD123 （interleukin 3 receptor alpha chain）［J］. J Biol Regul Homeost Agents， 2001， 15（1）：98-100.

17 Du W， Li XE， Sipple J， et al. Overexpression of IL-3Rα on CD34+CD38-stem cells defines leukemia-initiating cells in Fanconi anemia AML［J］. Blood， 2011， 117（16）：4243-4252.

18 Mu?oz L， Nomdedéu JF， López O， et al. Interleukin-3 receptor alpha chain （CD123） is widely expressed in hematologic malignancies［J］. Haematologica， 2001， 86（12）：1261-1269.

19 Testa U， Riccioni R， Militi S， et al. Elevated expression of IL-3Ralpha in acute myelogenous leukemia is associated with enhanced blast proliferation， increased cellularity， and poor prognosis［J］. Blood， 2002，100（8）：2980-2988.

20 Jin L， Lee EM， Ramshaw HS， et al. Monoclonal antibody-mediated targeting of CD123， IL-3 receptor alpha chain， eliminates human acute myeloid leukemic stem cells［J］. Cell Stem Cell， 2009， 5（1）：31-42.

21 Du W， Li J， Liu W， et al. Interleukin-3 receptor α chain （CD123） is preferentially expressed in immature T-ALL and May not associate with outcomes of chemotherapy［J］. Tumour Biol， 2016， 37（3）：3817-3821.

22 Lin J， Chen S， Zhao Z， et al. CD123 is a useful immunohistochemical marker to facilitate diagnosis of acute graft-versus-host disease in colon［J］. Hum Pathol， 2013， 44（10）：2075-2080.

23 Frankel AE， Woo JH， Ahn C， et al. Activity of SL-401， a targeted therapy directed to interleukin-3 receptor， in blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm patients［J］. Blood， 2014， 124（3）：385-392.

24 Lynn RC， Poussin M， Kalota A， et al. Targeting of folate receptor β on acute myeloid leukemia blasts with chimeric antigen receptorexpressing T cells［J］. Blood， 2015， 125（22）：3466-3476.

25 Pizzitola I， Anjos-Afonso F， Rouault-Pierre K， et al. Chimeric antigen receptors against CD33/CD123 antigens efficiently target primary acute myeloid leukemia cells in vivo［J］. Leukemia， 2014， 28（8）：1596-1605.

26 Gill S， Tasian SK， Ruella M， et al. Preclinical targeting of human acute myeloid leukemia and myeloablation using chimeric antigen receptormodified T cells［J］. Blood， 2014， 123（15）：2343-2354.

27 Luo Y， Chang LJ， Hu YX， et al. First-in-Man CD123-Specific chimeric antigen Receptor-Modified T cells for the treatment of refractory acute myeloid leukemia［C/OL］// 57th ASH Annual Meeting & Exposition，Orlando， 2015［2016-02-21］. https：//ash.confex.com/ash/2015/ webprogram/Paper85290.html.

28 Zhou L， Liu X， Wang X， et al. CD123 redirected multiple virus-specific T cells for acute myeloid leukemia［J］. Leuk Res， 2016， 41：76-84.

29 Tasian SK， Kenderian SS， Shen F， et al. Efficient termination of CD123-Redirected chimeric antigen receptor T cells for acute myeloid leukemia to mitigate toxicity［J］. Blood， 2015， 126（23）：565-565.

30 Ruella M， Barrett DM， Kenderian SS， et al. Treatment of leukemia antigen-loss relapses occurring after CD19-targeted immunotherapies by combination of anti-CD123 and anti-CD19 chimeric antigen receptor T cells［J］. J Immunother Cancer， 2015， 3（S2）：O5.

31 Galetto R， Lebuhotel C， Fran?on P， et al. Allogenic T-Cells targeting CD123 for adoptive immunotherapy of acute myeloid leukemia（AML）［J］. Blood， 2014， 124 （21）：1116.

32 Norelli M， Casucci M， Bonini C， et al. Clinical pharmacology of CAR-T cells： Linking cellular pharmacodynamics to pharmacokinetics and antitumor effects［J］. Biochim Biophys Acta， 2016， 1865（1）：90-100. 33 Van Rhenen A， Van Dongen GA， Kelder A， et al. The novel AML stem cell associated antigen CLL-1 aids in discrimination between normal and leukemic stem cells［J］. Blood， 2007， 110（7）：2659-2666.

34 Feldman EJ， Brandwein J， Stone R， et al. Phase III randomized multicenter study of a humanized anti-CD33 monoclonal antibody，lintuzumab， in combination with chemotherapy， versus chemotherapy alone in patients with refractory or first-relapsed acute myeloid leukemia［J］. J Clin Oncol， 2005， 23（18）：4110-4116.

35 Pearce DJ， Taussig D， Zibara K， et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML： implications for our understanding of the heterogeneity of AML［J］. Blood， 2006，107（3）：1166-1173.

36 Nakahata T， Okumura N. Cell surface antigen expression in human erythroid progenitors： erythroid and megakaryocytic markers［J］. Leuk Lymphoma， 1994， 13（5/6）：401-409.

37 Taussig DC， Pearce DJ， Simpson C， et al. Hematopoietic stem cells Express multiple myeloid markers： implications for the origin and targeted therapy of acute myeloid leukemia［J］. Blood， 2005，106（13）：4086-4092.

38 Hernández-Caselles T， Martínez-Esparza M， Pérez-Oliva AB， et al. A study of CD33 （SIGLEC-3） antigen expression and function on activated human T and NK cells： two isoforms of CD33 are generated by alternative splicing［J］. J Leukoc Biol， 2006， 79（1）：46-58.

39 Wang QS， Wang Y， Lv HY， et al. Treatment of CD33-directed chimeric antigen receptor-modified T cells in one patient with relapsed and refractory acute myeloid leukemia［J］. Mol Ther， 2015， 23（1）：184-191.

40 Larson RA， Sievers EL， Stadtmauer EA， et al. Final report of the efficacy and safety of gemtuzumab ozogamicin （Mylotarg） in patients with CD33-positive acute myeloid leukemia in first recurrence［J］. Cancer， 2005， 104（7）：1442-1452.

41 Dutour A， Marin V， Pizzitola I， et al. In vitro and in vivo antitumor effect of Anti-CD33 chimeric Receptor-Expressing EBV-CTL against CD33 acute myeloid leukemia［J］. Adv Hematol， 2012：683065.

42 Marin V， Pizzitola I， Agostoni V， et al. Cytokine-induced killer cells for cell therapy of acute myeloid leukemia： improvement of their immune activity by expression of CD33-specific chimeric receptors［J］. Haematologica， 2010， 95（12）：2144-2152.

43 Yin BW， Finstad CL， Kitamura K， et al. Serological and immunochemical analysis of Lewis y （Ley） blood group antigen expression in epithelial ovarian cancer［J］. Int J Cancer， 1996，65（4）：406-412.

44 Ritchie DS， Neeson PJ， Khot A， et al. Persistence and efficacy of second Generation CAR T cell against the LeY antigen in acute myeloid leukemia［J］. Mol Ther， 2013， 21（11）：2122-2129.

45 Shen F， Ross JF， Wang X， et al. Identification of a novel folate receptor，a truncated receptor， and receptor type beta in hematopoietic cells：cDNA cloning， expression， immunoreactivity， and tissue specificity［J］. Biochemistry， 1994， 33（5）：1209-1215.

46 Ross JF， Wang H， Behm FG， et al. Folate receptor type beta is a neutrophilic lineage marker and is differentially expressed in myeloid leukemia［J］. Cancer， 1999， 85（2）：348-357.

47 Pan XQ， Zheng X， Shi G， et al. Strategy for the treatment of acute myelogenous leukemia based on folate receptor beta-targeted liposomal doxorubicin combined with receptor induction using all-trans retinoic acid［J］. Blood， 2002， 100（2）：594-602.

48 Tettamanti S， Marin V， Pizzitola I， et al. Targeting of acute myeloid leukaemia by cytokine-induced killer cells redirected with a novel CD123-specific chimeric antigen receptor［J］. Br J Haematol， 2013，161（3）：389-401.

49 Zhao Z， Condomines M， Van Der Stegen SJ， et al. Structural design of engineered costimulation determines tumor rejection kinetics and persistence of CAR T cells［J］. Cancer Cell， 2015， 28（4）：415-428.

50 Fedorov VD， Themeli M， Sadelain M. PD-1- and CTLA-4-based inhibitory chimeric antigen receptors （iCARs） divert off-target immunotherapy responses［J］. Sci Transl Med， 2013， 5（215）：215ra172.

51 Morsut L， Roybal KT， Xiong X， et al. Engineering customized cell sensing and response behaviors using synthetic notch receptors［J］. Cell，2016， 164（4）：780-791.

52 Roybal KT， Rupp LJ， Morsut L， et al. Precision tumor recognition by T cells with combinatorial Antigen-Sensing circuits［J］. Cell， 2016，164（4）：770-779.

53 Greco R， Oliveira G， Stanghellini MT， et al. Improving the safety of cell therapy with the TK-suicide gene［J］. Front Pharmacol， 2015， 6：95. 54 Ma JS， Kim JY， Kazane SA， et al. Versatile strategy for controlling the specificity and activity of engineered T cells［J］. Proc Natl Acad Sci U S A， 2016， 113（4）：E450-E458.

55 Rodgers DT， Mazagova M， Hampton EN， et al. Switch-mediated activation and retargeting of CAR-T cells for B-cell malignancies［J］. Proc Natl Acad Sci U S A， 2016， 113（4）：E459-E468.

56 Wu CY， Roybal KT， Puchner EM， et al. Remote control of therapeutic T cells through a small molecule-gated chimeric receptor［J］. Science，2015， 350（6258）：aab4077.

57 Juillerat A， Marechal A， Filhol JM， et al. Design of chimeric antigen receptors with integrated controllable transient functions［J］. Sci Rep，2016， 6：18950.

58 He SZ， Busfield S， Ritchie DS， et al. A phase 1 study of the safety，pharmacokinetics and anti-leukemic activity of the anti-CD123 monoclonal antibody CSL360 in relapsed， refractory or high-risk acute myeloid leukemia［J］. Leuk Lymphoma， 2015， 56（5）：1406-1415.

59 Nievergall E， Ramshaw HS， Yong AS， et al. Monoclonal antibody targeting of IL-3 receptor α with CSL362 effectively depletes CML progenitor and stem cells［J］. Blood， 2014， 123（8）：1218-1228.

60 Busfield SJ， Biondo M， Wong M， et al. Targeting of acute myeloidleukemia in vitro and in vivo with an anti-CD123 mAb engineered for optimal ADCC［J］. Leukemia， 2014， 28（11）：2213-2221.

61 Chichili GR， Huang L， Li H， et al. A CD3xCD123 bispecific DART for redirecting host T cells to myelogenous leukemia： preclinical activity and safety in nonhuman primates［J］. Sci Transl Med， 2015，7（289）：289ra82.

62 Kügler M， Stein C， Kellner C， et al. A recombinant trispecific singlechain Fv derivative directed against CD123 and CD33 mediates effective elimination of acute myeloid leukaemia cells by dual targeting［J］. Br J Haematol， 2010， 150（5）：574-586.

63 Yc S， Erik P， Hsing C， et al. Immunotherapy with Long-Lived Anti-CD123×Anti-CD3 Bispecific Antibodies Stimulates Potent T Cell-Mediated Killing of Human AML Cell Lines and of CD123+Cells in Monkeys：A Potential Therapy for Acute Myelogenous Leukemia［J］. Blood， 2014， 124（21）：2316-2316.

64 Mardiros A， Dos Santos C， Mcdonald T， et al. T cells expressing CD123-specific chimeric antigen receptors exhibit specific cytolytic effector functions and antitumor effects against human acute myeloid leukemia［J］. Blood， 2013， 122（18）：3138-3148.

65 Peinert S， Prince HM， Guru PM， et al. Gene-modified T cells as immunotherapy for multiple myeloma and acute myeloid leukemia expressing the Lewis Y antigen［J］. Gene Ther， 2010， 17（5）：678-686.

66 Lynn RC， Feng Y， Schutsky K， et al. High-affinity FRβ-specific CAR T cells eradicate AML and normal myeloid lineage without HSC toxicity［J］. Leukemia， 2016， 30（6）：1355-1364.

Chimeric Antigen Receptor-modifying Tagainst CD123 for the treatment of AML

Sun Yao，Zhang Bin， Chen Hu. Department of Hematopoietic Stem Cell Transplantation， Affiliated Hospital & Cell and Gene Therapy Center， Academy of Military Medical Sciences， Beijing 100071， China

s: Chen Hu， Email:chenhu217@aliyun.com； Zhang Bin， Email:zb307ctc@163. com

Acute myeloid leukemia（AML）is a refractory hematologic malignancies which still lacks a good prognosis and craves a new treatment. With the progress of the chimeric antigen receptor-modifying（CAR）T cell（CAR-T）technology and the achievement got on the B-cell malignancies，an increasing targets are been investigated， ranging from kinds of hematology to solid tumors. CD123 molecule is a potential target of leukemia stem cells（LSCs）and leukemia blasts，while anti-CD123 CAR-T has the ability to clear the AML leukemia stem cells（LSCs）and blasts. We summarize the current progress and the direction about the treatment of anti-CD123 CAR-T.

Leukemia； Acute； Antigen； Receptor； Stem cells； Interleukin-3 Receptor alpha Subunit； T cells

2016-02-21）

（本文編輯：蔡曉珍）

10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2016.03.009

100071 北京，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院造血干細(xì)胞移植科 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院細(xì)胞與基因治療中心

陳虎，Email：chenhu217@aliyun.com；張斌，Email：zb307ctc@163.com

孫耀， 張斌， 陳虎. 靶向CD123抗原嵌合受體T細(xì)胞治療急性髓系白血病的研究［J/CD］.中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志：電子版，2016， 6（3）：184-190.