高效液相色譜法測定肉制品中梔子黃色素含量

周偉娥，凌 云，張 元，李紹輝，蔣受軍，姚美伊，李紅娜，鄭 陽，張 峰,*

（1.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院食品安全研究所，北京 100123；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530299）

高效液相色譜法測定肉制品中梔子黃色素含量

周偉娥1,2，凌 云1，張 元1，李紹輝1，蔣受軍2，姚美伊1，李紅娜1，鄭 陽1，張 峰1,*

（1.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院食品安全研究所，北京 100123；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530299）

通過正交試驗(yàn)分析法對肉制品中梔子黃色素提取方法進(jìn)行優(yōu)化。利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察提取溶劑體積、超聲時(shí)間和提取次數(shù)對肉制品中梔子黃色素提取回收率的影響。 結(jié)果表明，肉制品中梔子黃色素的最優(yōu)提取條件為：甲醇為提取溶劑、固液比1∶6（g/mL）、超聲提取時(shí)間20 min、提取2 次；建立高效液相色譜法測定肉制品中梔子黃色素中藏花素和藏花酸方法的線性范圍為0.5～50 mg/mL，相關(guān)系數(shù)大于0.999，檢出限不高于0.07 μg/g，加標(biāo)平均回收率為83.51%～96.00%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.94%。該方法準(zhǔn)確度高、簡單、快速，可適用于肉制品中梔子黃色素中藏花素和藏花酸含量檢測。

高效液相色譜法；正交試驗(yàn)；肉制品；藏花素；藏花酸；梔子黃

隨著社會(huì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，食品添加劑的安全問題越來越受到人們重視，也逐漸成為我國重要的食品安全問題[1-3]。2002年，我國食品工業(yè)“十五”發(fā)展規(guī)劃中表明我國食品添加劑發(fā)展的方向是天然、營養(yǎng)、多功能且安全可靠等。著色劑作為是食品添加劑中重要一員，受到了關(guān)注[4-7]。其可分為食用合成色素和食用天然色素[8]，食用合成色素雖具備顏色鮮艷，種類多樣等優(yōu)點(diǎn)，但其毒害作用不容忽視，許多國家都限制或禁止其使用[9-11]，使其應(yīng)用受到限制[12]，而天然色素具有天然無毒害的特點(diǎn)，越來越受歡迎[13-14]。

梔子黃色素是自然界罕見的水溶性類胡蘿卜天然色素，其主要有效成分是藏花素和藏花酸[15]。其有清熱祛火，涼血利膽，降低膽固醇，安全無毒等作用，是一種集著色、營養(yǎng)、保健多功能為一體的食用植物色素[16]。日本和我國在許多食品中都已添加了梔子黃色素[17-19]，GB 2760—2014《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中也規(guī)定了梔子黃的最大使用量，但目前對食品中梔子黃的檢測方法的研究較少且過去往往認(rèn)為梔子苷是梔子黃的主要成分，以梔子苷為對照品檢測食品中梔子黃含量[20-21]，但GB/T 7912—2010《食品添加劑梔子黃》中規(guī)定了梔子黃的主要成分是藏花素和藏花酸，以梔子苷為主成分是不夠合理的，所以食品中梔子黃含量測定存在不同意見[22-25]。為了有效控制食品中梔子黃的用量，本實(shí)驗(yàn)選擇以藏花素和藏花酸為對照品，建立高效液相色譜分析方法，以監(jiān)測市場食品中梔子黃色素的用量。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藏花素、藏花酸（純度98.0%） 美國Chroma DEX公司；乙腈、甲醇、正己烷（均為色譜純） 美國Fisher Scientific公司；乙酸（色譜純） 西隴化工有限公司；0.22 μm濾膜 天津津隆公司；鹽焗雞熟肉制品（含梔子黃） 香河正大有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-30AD高效液相色譜儀、SPD-M20A二極管陣列檢測、SIL-30AC自動(dòng)進(jìn)樣器 日本島津公司；R-134A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士Büchi公司；KQ-500DE超聲儀 昆山市超聲儀有限公司；十萬分之一電子天平 美國Mettler Toledo公司；高速臺式冷凍離心機(jī) 美國Beckman Coulter公司；Muti Shaker Mms振蕩儀 日本Tokyo Rirakikai公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精確稱取藏花素和藏花酸各5.0 mg，分別置于50 mL的棕色容量瓶中，甲醇定容，配成0.1 mg/mL儲備液，并在18 ℃保存待用。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確移取適量藏花素和藏花酸儲備標(biāo)準(zhǔn)溶液到10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋，配成藏花素和藏花酸的一系列標(biāo)準(zhǔn)曲線的質(zhì)量濃度為0.5、1、2、5、10、20、50 μg/mL溶液，在優(yōu)化后的色譜條件下測定，以各物質(zhì)的峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 樣品前處理

1.3.3.1 色譜條件優(yōu)化所用基本前處理方法

鹽焗雞樣品切成小塊后均質(zhì)，準(zhǔn)確稱取5.00 g樣品于50 mL離心管中，用30 mL甲醇提取，超聲20 min（500 W、40 kHz），離心10 min（轉(zhuǎn)速為5 000 r/min）后，取出上清液，再用30 mL上述提取溶劑和提取殘?jiān)?，合并提取液并混勻，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至10 mL，過0.22 μm濾膜，待高效液相色譜測定。

1.3.3.2 樣品提取方式比較

比較超聲與振蕩的提取方式。將鹽焗雞熟肉制品切成小塊后均質(zhì)，準(zhǔn)確稱取5.00 g，平行取12 份，用30 mL甲醇溶解樣品，其中6 份超聲30 min（功率500 W，頻率40 kHz）；另外6 份樣品振蕩30 min；12 份樣品離心10 min（轉(zhuǎn)速10 000 r/min），取出上清液，過0.22 μm濾膜，待高效液相色譜測定。

1.3.3.3 提取溶劑比較

實(shí)驗(yàn)考察水、甲醇、乙醇溶劑對樣品中梔子黃提取效率的影響。鹽焗雞熟肉制品切成小塊后均質(zhì)，準(zhǔn)確稱取5.00 g，平行取18 份，分別用30 mL水、甲醇和乙醇溶解樣品，各6 份，超聲30 min（功率500 W，頻率40 kHz），離心10 min（轉(zhuǎn)速10 000 r/min），取出上清液，過0.22 μm濾膜，待高效液相色譜測定。

1.3.3.4 單因素及正交試驗(yàn)

采用單因素試驗(yàn)考察甲醇提取溶劑的體積、超聲時(shí)間和提取次數(shù)對鹽焗雞樣品中的梔子黃提取量的影響。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平Table 1 Factors and their coded levels used in orthogonal array design

采用L9（34）正交試驗(yàn)表，考察三因素三水平的最佳組合，以獲得肉制品中梔子黃的最佳提取條件。正交試驗(yàn)樣品采用加標(biāo)樣品。在5.00 g空白樣品中分別加入0.5 mL 0.1 mg/mL藏花素和藏花酸儲備液，根據(jù)正交試驗(yàn)表1方案處理樣品，采用高效液相色譜檢測，并計(jì)算提取回收率，公式如下：

式中：C1為藏花素和藏花酸高效液相色譜測定并計(jì)算所得質(zhì)量濃度；C2為藏花素和藏花酸理論質(zhì)量濃度5 μg/mL。

1.3.4 色譜條件

Extend-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.003%乙酸溶液（B），梯度洗脫（0.0～1.0 min，20% A；1.0～8.0 min，20%～60% A；8.0～8.1 min，60%～70% A；8.10～13.0 min，70%～98% A；13.0～15.0 min，98%～20% A；15.0～20.0 min，20% A）；流速1.0 mL/min；檢測波長442（藏花素）、425 nm（藏花酸）；進(jìn)樣量10 μL；柱溫為常溫。

1.3.5 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

取鹽焗雞肉制樣品（含梔子黃）18 份，每份5.00 g，加入低、中、高混合標(biāo)品，各6 份，按照1.3.3節(jié)的樣品前處理方法處理樣品，進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。

1.3.6 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密度實(shí)驗(yàn)：精密移取1 mL 10 μg/mL的混合標(biāo)品，按照1.3.4節(jié)色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6 次，分別以藏花素和藏花酸的峰面積為對象，計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD），以考察色譜儀器的精密度。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同一鹽焗雞樣品6 份，每份5.00 g，按照1.3.3節(jié)處理樣品，按照1.3.4節(jié)色譜條件測定藏花素和藏花酸的峰面積，并計(jì)算RSD。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取一鹽焗雞樣品5.0 g，按照1.3.3節(jié)處理樣品后，分別在0、2、4、6、8 h進(jìn)樣測定，藏花素和藏花酸的峰面積，并計(jì)算RSD。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

圖1 藏花素（A）、藏花酸（B）光譜圖Fig.1 UV scanning spectra of crocin (A) and crocetion (B)

本實(shí)驗(yàn)考察了最大吸收波長、流動(dòng)相組成和梯度洗脫條件。對藏花素和藏花酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示藏花素在波長442 nm處有最大吸收，藏花酸在波長425 nm處有最大吸收，如圖1所示。比較了流動(dòng)相甲醇-水溶液、甲醇-0.003%乙酸溶液、乙腈-水溶液、乙腈-0.003%乙酸溶液的色譜峰形和響應(yīng)，結(jié)果顯示乙腈-0.003%乙酸溶液比甲醇-0.003%乙酸溶液峰形好，比乙腈-水溶液響應(yīng)高，酸可以增強(qiáng)響應(yīng)，提高檢測的靈敏度，結(jié)果采用乙腈-0.003%乙酸溶液作為流動(dòng)相。實(shí)驗(yàn)通過1.3.4節(jié)梯度洗脫條件，使藏花素和藏花酸獲得良好的分離度。

在1.3.3.1節(jié)前處理方法和1.3.4節(jié)的色譜條件下，分別測定了空白溶劑，混標(biāo)溶液和鹽焗雞樣品色譜圖，如圖2所示。色譜圖在15 min內(nèi)完成出峰，分離度好，專屬性強(qiáng)。

圖2 梔子黃的色譜圖Fig.2 Chromatograms of blank sample, gardenia yellow standard and salt-roasted chicken

2.2 前處理方法的優(yōu)化

2.2.1 提取方式的選擇

圖3 提取方式的比較Fig.3 Comparison of two extraction methods

超聲對梔子黃色素的提取效率比振蕩的高一些，結(jié)果如圖3所示?？赡苁且?yàn)槌暤目栈饔酶欣跅d子黃色素溶于甲醇溶劑中，所以結(jié)果采用超聲提取樣品。

2.2.2 提取溶劑的選擇

圖4 提取溶劑的選擇Fig.4 selection of optimal extraction solvent

圖4結(jié)果顯示，甲醇更有利于藏花素的提取，乙醇更有利于藏花酸的提取。但梔子黃的提取量是由藏花素和藏花酸的提取量推算而得，甲醇同時(shí)提取兩者效率比乙醇更優(yōu)，所以采用甲醇溶液提取鹽焗雞肉制品中的梔子黃。

2.2.3 單因素試驗(yàn)的考察

圖5 各因素對梔子黃提取量的影響Fig.5 Effect of extraction conditions on the content of crocetion analyzed by one-factor-at-a-time design

如圖5所示，甲醇提取溶劑體積40 mL，超聲時(shí)間40 min，提取5 次，梔子黃的提取量達(dá)最高。

2.2.4 正交試驗(yàn)優(yōu)化

從表2可以看出，RA＞RC＞RB，3 個(gè)因素對鹽焗雞肉制品中的梔子黃提取回收率的影響大小依次是甲醇體積＞提取次數(shù)＞超聲時(shí)間。正交試驗(yàn)得出的最優(yōu)提取工藝是A3B2C3。3 個(gè)因素中，甲醇提取溶液體積因素影響最為顯著。綜合考慮試驗(yàn)時(shí)間和強(qiáng)度，優(yōu)化的提取條件選為A3B1C2，即甲醇提取溶液體積30 mL，超聲時(shí)間20 min，提取次數(shù)2 次。

表2 L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 L9(34) orthogonal array design with experimental results

2.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

按A3B1C2條件進(jìn)行3 次平行實(shí)驗(yàn)，肉制品中的梔子黃提取回收率為93.65%，高于表2中的每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，故選擇A3B1C2為最佳提取工藝條件。

2.4 凈化方式的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)對比了液液萃取、固相萃取，溶劑萃取的凈化方式。鹽焗雞熟肉制品切成小塊均質(zhì)，準(zhǔn)確稱取5.00 g，平行取18 份，加入30 mL甲醇溶液，超聲30 min（功率500 W，頻率40 kHz），離心10 min（轉(zhuǎn)速10 000 r/min），取出上清液。取6 份上清液加入等體積的正己烷液液萃取脫脂取上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，用2 mL甲醇溶解過膜，待測；取6 份上清液通過HLB固相萃取柱凈化，分別用5 mL水和甲醇依次活化后上樣，用5 mL甲醇洗脫，洗脫液氮吹干后用2 mL甲醇溶解，過0.22 μm濾膜，待高效液相色譜測定；取6 份甲醇提取后的殘?jiān)儆?0 mL的甲醇溶劑萃取渦旋10 min后，離心10 min（轉(zhuǎn)速10 000 r/min），合并提取液后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，殘?jiān)ㄈ葜?0 mL后過膜，待高效液相色譜測定。通過液液萃取、固相萃取和溶劑萃取的凈化方式的比較，測得藏花素平均含量為6.23、5.52、10.46 μg/g；藏花酸的平均含量為11.45、9.89、20.69 μg/g。在色譜圖上分析，3 種凈化方式都避免了雜質(zhì)的干擾，而用甲醇溶劑萃取能夠保證較高而穩(wěn)定的回收率。所以選擇甲醇溶劑萃取。

2.5 線性關(guān)系的考察

在1.3.4節(jié)色譜條件下，對系列質(zhì)量濃度的混標(biāo)溶液進(jìn)行檢測，將標(biāo)準(zhǔn)溶液逐步稀釋至其響應(yīng)值為噪音的3 倍（即信噪比為3∶1）所對應(yīng)的溶液質(zhì)量濃度為檢出限。同時(shí)將加標(biāo)樣品經(jīng)1.3.3節(jié)前處理，測得響應(yīng)值為噪音的10 倍（即信噪比10∶1）所對應(yīng)的溶液質(zhì)量濃度為方法定量限。其回歸方程、相對系數(shù)、線性范圍、檢出限和定量限結(jié)果見表3。由表3可知，該方法線性良好，檢出限和定量限符合國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑的殘留檢測要求。

表3 藏花素和藏花酸回歸方程、檢測限和定量限Table 3 Regression equations, limits of detection and limits ofquantitation for crocin and crocetion

2.6 加標(biāo)回收率考察

如表4所示，樣品中藏花素和藏花酸的回收率在83.51%～96.00%間，回收率良好，該方法具有可行性。

表4 加標(biāo)回收率考察TTable 4 Recovery rates of crocin and crocetion fromspiked real sample

2.7 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性考察

精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藏花素和藏花酸的RSD分別為0.04%和0.12%，可以看出儀器具有較高的精密度。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藏花素峰面積的RSD（n=6）為1.28%；測得藏花酸峰面積的RSD（n=6）為1.68%，說明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，分別測得藏花素和藏花酸峰面積的RSD（n=6）為2.21%和1.86%，可見在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 樣品的測定

表5 6個(gè)批次的鹽焗肉制品梔子黃色素含量Table 5 Contents of gardenia yellow in six batches of salt-roasted chicken

6 個(gè)批次的鹽焗雞樣品的測定結(jié)果如表5所示，根據(jù)我國食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定肉制品中梔子黃的最大使用量為1 500 μg/g。由結(jié)果可知，6 個(gè)批次的鹽焗雞肉制樣品中藏花素和藏花酸的含量之和遠(yuǎn)小于我國食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定肉制品中梔子黃的最大使用量，可推測6 個(gè)批次的鹽焗雞肉制品中梔子黃的含量符合標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)通過正交試驗(yàn)得出肉制品中梔子黃的最優(yōu)提取條件為甲醇溶劑體積為30 mL、超聲提取時(shí)間20 min、提取2 次，并采用Agilent Extent-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.003%乙酸溶液（梯度洗脫），流速1.0 mL/min，藏花素和藏花酸檢測波長分別為442 nm和425 nm。結(jié)果表明藏花素和藏花酸在15 min內(nèi)出峰，分離效果好，線性范圍為0.5～50 mg/mL，相關(guān)系數(shù)大于0.999，平均回收率為83.51%～96.00%，RSD為1.23%～2.94%，檢出限不高于0.07 μg/g，最終建立了一種準(zhǔn)確、簡單、快速的高效液相色譜法測定肉制品中藏花素和藏花酸的含量，為今后測定食品中的梔子黃提供有益的參考。

[1] 王明強(qiáng), 陳順浩, 浦紹飛, 等. 預(yù)防和控制食品添加劑對食品安全的影響及防止對策[J]. 中國調(diào)味品, 2012, 37(4): 14-19. DOI:10.3969/ j.issn.1000-9973.2012.04.004.

[2] WILCOCK A, PUN M, KHANONA J, et al. Consumer attitudes, knowledge and behaviour: a review of food safety issues[J]. Trends in Food Science and Technology, 2004, 15(2): 56-66.

[3] 盧劍, 孫勇, 耿寧, 等. 我國食品安全問題及監(jiān)管模式建立研究[J].食品科學(xué), 2010, 31(5): 319-323.

[4] 齊曉東, 劉娟娟, 唐欣, 等. 食品著色劑行業(yè)發(fā)展及存在問題[J]. 糧油食品科技, 2011, 19(2): 57-60. DOI:10.3969/ j.issn.1007-7561.2011.02.020.

[5] 毛希琴, 李春玲, 任國杰, 等. 高效液相色譜法同時(shí)檢測化妝品中38 種限用著色劑[J]. 色譜, 2015, 33(3): 282-290. DOI:10.3724/ SP.J.1123.2014.11017.

[6] 魏瑩, 吳之翔. 簡述著色劑在調(diào)味品、食品中的應(yīng)用[J]. 中國調(diào)味品, 2014, 39(5): 126-128. DOI:10.3969/j.issn.1000-9973.2014. 05.033.

[7] 馬育松, 李瑋, 艾連峰, 等. 高效液相色譜/二極管陣列檢測器同時(shí)測定辣椒及其制品中11 種脂溶性著色劑[J]. 分析測試學(xué)報(bào), 2014, 33(1): 93-97. DOI:10.3969/j.issn.1004-4957.2014.01.017.

[8] ABEROUMAND A. A review article on edible pigments properties and sources as natural biocolorants in foodstuff and food industry[J]. World Journal of Dairy and Food Sciences, 2011, 6(1): 71-78.

[9] 劉慧慧, 宮向紅, 徐英江, 等. 固相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測定海米中10 種合成色素[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(4): 170-173. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201404035.

[10] 趙延勝, 楊敏莉, 張峰, 等. 液相色譜/四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法篩查奶酪中29 種禁用和限用合成色素[J]. 色譜, 2011, 29(7): 631-636. DOI:10.3724/SP.J.1123.2011.00631.

[11] 趙延勝, 董英, 張峰, 等. 食品中46 種禁限用合成色素的分級提取凈化體系研究[J]. 分析化學(xué), 2012, 40(2): 249-256. DOI:10.3724/ SP.J.1096.2012.10443.

[12] 陸曉紅. 飲料中合成著色劑高效液相測定預(yù)處理方法的研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)志, 2007, 17(8): 1516-1517. DOI:10.3969/ j.issn.1004-8685.2007.08.076.

[13] 袁超, 魯晶鴿. 天然食用色素的功能及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 糧食與油脂, 2015, 28(2): 5-8.

[14] LU R L, LUO F F, HU F L, et al. Identification and production of a novel natural pigment, cordycepoid A, from Cordyceps bifusispora[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2013, 97(14): 6241-6249.

[15] 曾凡逵, 李愛軍, 黃雪松, 等. 梔子黃色素的研究現(xiàn)狀[J]. 中國食品添加劑, 2006(2): 110-113. DOI:10.3969/j.issn.1006-2513. 2006.02.028.

[16] 楊博媛, 惠伯棣. 梔子黃色素的生物學(xué)功能及安全性的研究進(jìn)展[J]. 中國食品添加劑, 2013(4): 193-200. DOI:10.3969/ j.issn.1006-2513.2013.04.027.

[17] 梅蕾蕾, 胡曉. 梔子中藏花素的藥理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2013, 18(7): 837-840.

[18] 中日兩國食品著色劑標(biāo)準(zhǔn)研討會(huì)第二次會(huì)議紀(jì)要[J]. 中國食品添加劑, 2005(2): 135.

[19] 鐘旭東. 淺談中日天然色素的特性和應(yīng)用[J]. 中國食品工業(yè), 2009(6): 20-21. DOI:10.3969/j.issn.1006-6195.2009.06.006.

[20] 陳艷華, 于中軍. 高效液相色譜法測定蛋糕中的梔子黃[J]. 中國實(shí)用醫(yī)藥, 2010, 5(24): 155. DOI:10.3969/j.issn.1673-7555.2010.24.123.

[21] 李嚴(yán)巍, 王梅, 閻惠芳, 等. 食品中桅子黃色素的定性定量方法[J].食品與發(fā)酵工業(yè), 1996(6): 39-42. DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ ts.1996.06.009.

[22] YAMADA S, OSHIMA H, OSHIMA H, et al. Adoption of crocetin as an indicator compound for detection of gardenia yellow in food products: analysis of natural coloring matters in food[J]. Japanese Society for Food Hygiene and Safety, 1996, 37(6): 372-377.

[23] 李永利, 張焱, 翟志雷, 等. 高效液相色譜法測定食品中梔子黃[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2008, 18(1): 72. DOI:10.3969/ j.issn.1004-8685.2008.01.030.

[24] 丁艷, 孫益民, 馬芝森, 等. 高效液相色譜法測定食品中的梔子黃的研究[J]. 食品科學(xué), 2006, 27(2): 199-202.

[25] 趙璨, 張浩, 陳陽, 等. 梔子黃色素不同標(biāo)準(zhǔn)的合理性探討[J].華西藥學(xué)雜志, 2012, 27(5): 554-556. DOI:10.13375/j.cnki. wcjps.2012.05.011.

Determination of Gardenia Yellow in Meat Products by High Performance Liquid Chromatography

ZHOU Wei’e1,2, LING Yun1, ZHANG Yuan1, LI Shaohui1, JIANG Shoujun2, YAO Meiyi1, LI Hongna1, ZHENG Yang1, ZHANG Feng1,*
(1. Institute of Food Safety, Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100123, China; 2. College of Pharmacy, Guangxi University of Traditional Chinese Med icine, Nanning 530299, China)

With the aim of developing an optimal sample preparation method for the determination of gardenia yellow in meat products by high performance liquid chromatography (HPLC), orthogonal design methodology was employed to optimize the recovery rate of gardenia yellow from samples with respect to four extraction conditions including solid/solvent ratio (g/mL), ultrasonic extraction time and extraction number. The optimal extraction conditions were achieve d as follows: samples were ultrasonically extracted twice for 20 min each using methanol with a solid/solvent ratio of 1:6 (g/mL). The HPLC method established based on these optimized extraction conditions exhibited a good linear relationship in the range from 0.5 to 50 mg/mL with correlation coefficient of higher than 0.999 and a detection limit of 0.07 μg/g for crocin and crocetion in meat products. The mean spike recovery rates for both gardenia yellows in meat products were in the range of 83.51%–96.00% with a relative standard deviation (RSD) of 2.94%. This method is accurate, simple, quick and suitable for the determination of crocin and crocetion in meat products.

high performance liquid chromatography; orthogonal experiment; meat; crocin; crocetion; gardenia yellow

10.7506/spkx1002-6630-201602033

O657.72

A

1002-6630（2016）02-0187-06

周偉娥, 凌云, 張?jiān)? 等. 高效液相色譜法測定肉制品中梔子黃色素含量[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(2): 187-192. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201602033. http://www.spkx.net.cn

ZHOU Wei’e, LING Yun, ZHANG Yuan, et al. Determination of gardenia yellow in meat products by high performance liquid chromatography[J]. Food Science, 2016, 37(2): 187-192. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201602033. http://www.spkx.net.cn

2015-04-26

國家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項(xiàng)（2012YQ14000806）；北京市科技計(jì)劃課題（2141100002614020）；國家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013K202）；調(diào)味品中添加劑及非食品添加物質(zhì)的系統(tǒng)篩查及確證方法研究項(xiàng)目（2013IK198）

周偉娥（1988—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称匪幤贩治龊桶踩栽u價(jià)。E-mail：824047422@qq.com

*通信作者：張峰（1974—），男，研究員，博士，研究方向?yàn)榉治龌瘜W(xué)。E-mail：fengzhang@126.com