土大黃根提取物對(duì)小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響

阿布都吉力力·阿布都艾尼 尤力都孜·買(mǎi)買(mǎi)提 熱比姑麗·伊斯拉木

1.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所藥理毒理研究室，新疆烏魯木齊830049；

2.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)實(shí)驗(yàn)室，新疆烏魯木齊830049；3.中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京100049

土大黃根提取物對(duì)小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響

阿布都吉力力·阿布都艾尼1，2，3尤力都孜·買(mǎi)買(mǎi)提1，2熱比姑麗·伊斯拉木1，2

1.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所藥理毒理研究室，新疆烏魯木齊830049；

2.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)實(shí)驗(yàn)室，新疆烏魯木齊830049；3.中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京100049

目的探討土大黃根提取物對(duì)小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響。方法將70只KM小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、地塞米松組、消銀顆粒組、異常黏液質(zhì)成熟劑組、土大黃根提取物組（1 g/kg組、2 g/kg組、4 g/kg組）7個(gè)組，每組各10只，按體重分別給予0.5%羧甲基纖維素鈉、1.05 mg/kg地塞米松、1.577 g/kg消銀顆粒、2 g/kg異常黏液質(zhì)成熟劑及1、2、4 g/kg土大黃根提取物灌胃。采用小鼠尾部鱗片角化不全模型，觀測(cè)灌胃給藥后小鼠的一般狀況、體重、臟器指數(shù)、血生化指標(biāo)及尾部皮膚組織病理學(xué)變化。結(jié)果與對(duì)照組比較，1、2、4 g/kg組小鼠行為活動(dòng)、皮毛、糞便、飲食等均未見(jiàn)異常，臟器指數(shù)、體重?zé)o明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；血清肌酐、葡萄糖、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、高密度脂蛋白-膽固醇、低密度脂蛋白-膽固醇均升高（P＜0.05或P＜0.01）。與對(duì)照組比較，1 g/kg組血清堿性磷酸酶升高、磷酸肌酸激酶降低；2 g/kg組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高，尿素降低；4 g/kg組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、三酰甘油升高，磷酸肌酸激酶、尿素降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。1、2、4 g/kg組促進(jìn)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成，且呈劑量規(guī)律性。結(jié)論土大黃根提取物能改變銀屑病表皮的角化不全，但其作用與血生化指標(biāo)的變化可能無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。

土大黃根提取物；小鼠尾部鱗片角化不全模型；組織病理學(xué)；血生化

土大黃（Rumex L.）是蓼科（Polyonaceae）酸模屬（Rumex）植物，多年生草本。維吾爾藥物名為阿提庫(kù)拉克（At kulak）、歐麻孜（Hummaz）、土日謝（Turux）、塔給庫(kù)斯（Tag kusi），其藥用部位為全草、葉子、根莖及根，用于腎、肝、胃腸疾病及皮疹、皮膚瘙癢等［1-3］。本研究探討土大黃根提取物對(duì)小鼠尾部鱗片角化不全模型的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥材及藥品土大黃根由新疆華安中藥飲片有限責(zé)任公司（GSP）提供（批號(hào)：12110），并由新疆大學(xué)資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院努爾巴依·阿不都沙力克教授鑒定為土大黃根。醋酸地塞米松（DXM）片（國(guó)藥準(zhǔn)字H3302 0822，批號(hào)：140670，浙江仙琚制藥股份有限公司）。消銀顆粒（XYKL）（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20000019，批號(hào)：130809，陜西康惠制藥股份有限公司）。異常黏液質(zhì)成熟劑（MB）（批號(hào)：M20052633）由新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)院制劑室（GMP認(rèn)證）提供。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM小鼠80只，雄性，體重18～22 g，由新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（新）2011-0001。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（新）2011-0005。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前檢疫，經(jīng)一般行為觀察，選用符合要求的70只小鼠進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器7100全自動(dòng)生化分析儀（日立公司），KD-TS3D生物組織自動(dòng)脫水機(jī)、KD-BM生物組織自動(dòng)包埋機(jī)（浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司），RM2235切片機(jī)、DM2500生物顯微鏡、MVC2000顯微成像系統(tǒng)（德國(guó)萊卡公司）。

1.2.2 試劑丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT，批號(hào)：140113030）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST，批號(hào)：140215020）、堿性磷酸酶（ALP，批號(hào)：140314022）、磷酸肌酸激酶（CK，批號(hào)：142514019）、總膽紅素（TBIL，批號(hào)：140615012）、總蛋白（TP，批號(hào)：140815002）、白蛋白（ALB，批號(hào)：140915013）、葡萄糖（GLU，批號(hào)：141514029）、尿素（Urea，批號(hào)：141315001），肌酐（Crea，批號(hào)：141014014）、總膽固醇（TCHO，批號(hào)：141614024）、三酰甘油（TG，批號(hào)：141714028）、高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C，批號(hào)：142114020）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C，批號(hào)：142014016）均由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 土大黃根提取物的制備稱取適量土大黃根以8倍量的70%乙醇溶液室溫密閉浸泡1 h后回流提取3次（1.5～2 h），過(guò)濾，合并濾液減壓濃縮，真空干燥，得干膏粉。

1.3.2 分組及用藥因小鼠尾部表皮天然缺少顆粒層細(xì)胞，類似銀屑病表皮角化不全病理改變，因而可作為銀屑病角化異常的傳統(tǒng)天然模型［4-7］。將70只KM小鼠，按體重隨機(jī)分為7組：CON組（0.5%羧甲基纖維素鈉）、DXM組（1.05 mg/kg DXM）、XYKL組（1.577 g/kg XYKL）、MB組（2 g/kg MB）、土大黃根提取物組（REL組、RE-M組、RE-H組，分別給予1、2、4 g/kg土大黃根提取物），每組各10只。給藥組以0.2 mL/10 g體積灌胃給予相應(yīng)藥物，CON組灌胃等體積的0.5%（0.5%羧甲基纖維素鈉），每日1次，連續(xù)15 d。

1.3.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法末次給藥2 h后，摘眼球法取血。4℃下3000 r/min離心10 min，通過(guò)7100全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清生化指標(biāo)。取小鼠脾臟、胸腺、心臟、腦、腎臟、肝臟觀察并稱重，計(jì)算臟器指數(shù)（臟器指數(shù)=臟器重量/體重）。隨后，取鼠尾距離根部3 cm皮膚標(biāo)本，用15%福爾馬林溶液固定、脫水、石蠟包埋并HE染色。在光鏡下觀察尾部皮膚組織病理學(xué)變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用One-Way ANOVA檢驗(yàn)，兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)；若方差不齊，兩兩比較采用Dunnett's T3法。計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠一般狀況及體重變化

與CON組比較，各給藥組小鼠在實(shí)驗(yàn)期間，行為活動(dòng)、皮毛、糞便、飲食等均未見(jiàn)異常，體重?zé)o明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 藥物對(duì)小鼠體重的影響（g，±s，n=10）

表1 藥物對(duì)小鼠體重的影響（g，±s，n=10）

組別給藥前給藥后第1天第5天第10天第15天CON組DXM組XYKL組MB組RE-L組RE-M組RE-H組20.57±1.67 20.63±1.60 20.67±1.70 20.57±1.66 20.64±1.67 20.68±1.47 20.66±1.64 23.59±2.02 22.50±1.80 23.43±1.55 23.41±1.91 23.37±1.68 23.38±1.73 23.27±1.80 29.09±2.53 22.69±2.40 28.45±1.70 27.77±2.71 27.97±1.52 28.59±1.17 27.87±1.91 34.15±3.03 25.83±2.73 34.70±2.65 34.05±3.36 33.95±2.21 34.25±1.94 33.87±2.06 38.05±3.27 27.83±3.02 37.91±3.25 37.46±3.81 37.32±2.54 37.53±2.63 37.00±2.94

2.2 臟器指數(shù)變化

與CON組比較，DXM組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)降低，腦指數(shù)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其他各組小鼠心臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、肝臟指數(shù)與CON組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 血生化變化

與CON組比較，DXM組、XYKL組和MB組小鼠血清ALT、TP、ALB、TCHO、HDL-C升高；DXM組小鼠血清AST、Crea、GLU、TG升高，XYKL組小鼠血清CK降低、Crea升高，MB組小鼠血清LDL-C升高，Urea降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。與CON組比較，RE-L組、RE-M組、RE-H組小鼠血清Crea、GLU、TP、ALB、TCHO、HDL-C、LDL-C升高；RE-L組小鼠血清ALP升高，CK降低；RE-M組小鼠血清ALT、AST升高，Urea降低；RE-H組小鼠血清ALT、AST、ALP、TG升高，CK、Urea降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)表3。

2.4 皮膚組織病理學(xué)變化

CON組小鼠皮膚完全角化，缺乏顆粒層。棘層、基底層正常，基底膜完整。與CON組比較，DXM組小鼠皮膚部分出現(xiàn)顆粒層；XYKL組小鼠皮膚可見(jiàn)部分區(qū)域出現(xiàn)顆粒細(xì)胞層；MB組小鼠皮膚完全角化，出現(xiàn)1～2層顆粒細(xì)胞層；RE-L組小鼠皮膚少部分區(qū)域出現(xiàn)顆粒細(xì)胞層；RE-M組小鼠皮膚部分區(qū)域出現(xiàn)顆粒細(xì)胞層；RE-H組小鼠皮膚大部分區(qū)域出現(xiàn)顆粒細(xì)胞層。見(jiàn)圖1。

表2 小鼠臟器指數(shù)變化（mg/g，±s，n=10）

表2 小鼠臟器指數(shù)變化（mg/g，±s，n=10）

注：與CON組比較，*P＜0.05

組別脾臟指數(shù)胸腺指數(shù)心臟指數(shù)腦指數(shù)腎臟指數(shù)肝臟指數(shù)CON組DXM組XYKL組MB組RE-L組RE-M組RE-H組3.1318±0.6932 1.2865±0.5719*3.1602±1.3046 3.0426±0.9447 3.3699±0.9160 2.6703±0.3939 3.3774±1.5179 3.6378±0.6339 1.5718±0.6064*3.6295±0.8889 2.8379±1.0807 3.1002±1.4613 3.0134±0.4043 3.2112±0.7410 7.4004±3.0770 10.8435±6.2225 6.4633±3.9407 5.1591±0.7265 5.3960±0.8438 5.5024±0.6417 5.1352±0.5666 11.3674±1.3974 14.9753±1.7622*12.0360±1.6645 11.0004±2.2471 11.5897±1.5026 10.6860±1.4068 11.5190±0.8145 15.7380±0.7592 15.9453±1.0983 15.4364±1.7329 14.5292±2.1819 15.1095±1.1860 15.4742±3.0691 15.3370±1.3450 51.7391±21.7421 57.5797±4.0755 53.3183±8.8239 48.4745±8.6458 53.2594±3.5702 52.0634±6.7868 48.0684±4.3839

表3 對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響（±s，n=10）

表3 對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響（±s，n=10）

注：與CON組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；ALT：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；AST：天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；ALP：堿性磷酸酶；CK：磷酸肌酸激酶；Urea：尿素；Crea：肌酐；GLU：葡萄糖；TP：總蛋白；ALB：白蛋白；TCHO：；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C低密度脂蛋白膽固醇

組別ALT（U/L）AST（U/L）ALP（U/L）CK（U/L）Urea（mmol/L）Crea（μmol/L）CON組DXM組XYKL組MB組RE-L組RE-M組RE-H組42.0±4.1 96.1±23.2**51.2±10.1*56.0±13.2**50.3±17.3 52.4±9.2**51.1±11.3*127.0±12.2 229.3±31.0**132.4±13.1 195.6±115.0 128.5±26.4 172.4±41.7**153.6±22.2**239.8±38.1 248.6±66.3 247.9±46.2 237.5±24.0 284.4±41.5*283.3±71.7 269.3±25.3*713.4±214.1 911.3±398.1 337.3±131.0**755.1±503.0 270.1±191.0**505.3±408.0 240.9±78.1**8.10±1.1 7.16±1.0 7.7±0.7 5.9±0.4**7.3±1.1 6.1±0.9**5.5±0.7**24.9±5.3 35.2±4.2**29.8±2.8*29.1±3.6 35.4±7.4**35.2±8.1**38.7±4.5**組別GLU（mmol/L）TP（g/L）ALB（g/L）TCHO（mmol/L）TG（U/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L）CON組DXM組XYKL組MB組RE-L組RE-M組RE-H組8.63±0.66 7.48±1.13*9.32±1.02 9.40±1.12 10.71±1.55**11.34±1.37**11.10±1.34**56.8±4.7 68.9±3.5**63.1±2.4**63.4±3.8**66.3±5.4**69.0±7.3**69.4±3.6**33.9±2.8 38.7±3.2**36.9±1.4**37.5±1.8**38.6±2.5**40.0±3.9**39.4±2.2**2.27±0.13 3.14±0.74**2.82±0.40**2.71±0.29**3.07±0.17**3.30±0.26**3.31±0.51**1.56±0.43 1.99±0.37*1.47±0.26 1.63±0.33 1.70±0.31 1.76±0.25 1.83±0.26*1.77±0.15**2.81±0.73**2.31±0.34**2.16±0.32**2.52±0.18**2.72±0.29**2.83±0.39**0.32±0.08 0.42±0.09 0.41±0.10*0.40±0.07*0.45±0.07**0.46±0.09**0.47±0.07**

3 討論

目前常用的銀屑病動(dòng)物模型有小鼠尾部鱗片角化不全模型、普萘洛爾誘導(dǎo)耳部角化模型、咪喹莫特誘導(dǎo)小鼠模型等［8-12］。其中，小鼠尾部鱗片角化不全模型［13-17］于20世紀(jì)70年代初被應(yīng)用于探討藥物抗銀屑病樣作用，目前已被國(guó)內(nèi)外公認(rèn)，并得到了普遍應(yīng)用。小鼠尾部鱗片角化不全模型間接評(píng)價(jià)藥物療效的動(dòng)物模型。該模型可以部分模擬銀屑病表皮動(dòng)力學(xué)紊亂的特點(diǎn)，且經(jīng)濟(jì)易得，故被作為篩選抗銀屑病藥物的常用模型。

土大黃的植物來(lái)源較多，我國(guó)大部分省區(qū)均有分布，藥用資源豐富，在民間廣泛使用。據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究文獻(xiàn)綜述發(fā)現(xiàn)［18］，土大黃具有多種藥理學(xué)作用，其中抗炎、抗腫瘤作用研究較多，對(duì)皮膚病研究報(bào)道極少。近幾年，本課題組對(duì)新疆維吾爾自治區(qū)進(jìn)行民間調(diào)查后發(fā)現(xiàn)，土大黃用于治療銀屑病等各種皮膚病，并取得了一定的臨床效果。本課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，土大黃根提取物具有治療實(shí)驗(yàn)性銀屑病的作用［19-20］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與CON組比較，1、2、4 g/kg土大黃根提取物處理后，小鼠行為活動(dòng)、皮毛、糞便、飲食等未見(jiàn)異常，臟器指數(shù)、體重?zé)o明顯變化（P＞0.05），而血清Crea、GLU、TP、ALB、TCHO、HDL-C、LDL-C均升高（P＜0.05或P＜0.01）；此外，1 g/kg土大黃根提取物可使實(shí)驗(yàn)小鼠血清ALP升高，CK降低（P＜0.05或P＜0.01）；2 g/kg土大黃根提取物可使小鼠血清ALT、AST升高，Urea降低（P＜0.05或P＜0.01）；4 g/kg土大黃根提取物可使小鼠血清ALT、AST、ALP、TG升高，CK、Urea降低（P＜0.05或P＜0.01）。1、2、4 g/kg土大黃根提取物均可促進(jìn)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成，且呈劑量規(guī)律性。

綜上所述，土大黃根提取物（1、2、4 g/kg）能改變銀屑病表皮的角化不全，從而具有治療作用。但其作用與小鼠血生化指標(biāo)變化可能無(wú)明顯關(guān)聯(lián)，這方面有待于深入研究。

圖1 小鼠尾部鱗片角化不全模型皮膚組織病理變化（HE，40×）

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Effect of Rumex L.root extract on mouse tail model

Abdujilili·Abdugheny1，2，3Yultuz·Mamat1，2Rabigul·Islam1，2
1.Department of Pharmacology and Toxicology，Inistitute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830049，China；2.Laboratory of Traditional Uyghur Medicine Prescription of Xinjiang，Inistitute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830049，China；3.University of Chinese Academy of Sciences，Beijing100049，China

Objective To explore the effect of Rumex L.root extract on mouse tail model.Methods 70 mice were randomly assigned to CON group，DXM group，XYKL group，MB group and Rumex L.root extract group（1 g/kg group，2 g/kg group，4 g/kg group），with 10 mice in each group，and according to the weight they were given 0.5%CMC-Na，1.05 mg/kg Dexamethasone，1.577 g/kg Xiaoying granules，2 g/kg Munziq Balgam，and 1，2，4 g/kg Rumex L.root extract respectively by gavage.After gavage，general condition，body weight，organ index，blood biochemistry，tail skin histopathology of mice were observed by mouse tail scales parakeratosis model.Results Compared with CON group，mice of the 1，2，4 g/kg group had no obvious abnormalities in activity，fur，faeces，diet，and had no obvious change in organ index and body weight，there were no statistically significant differences（P＞0.05）；serum Crea，GLU，TP，ALB，TCHO，HDL-C，LDL-C of the 1，2，4 g/kg group increased（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with CON group，serum ALP of the 1 g/kg group increased and CK decreased；serum ALT，AST of the 2 g/kg group increased and Urea decreased；serum ALT，AST，ALP of the 4 g/kg group increased and CK，Urea decreased（P＜0.05 or P＜0.01）.1，2，4 g/kg group promoted formation of epidermis granular layer on mouse tail skin and dose dependent.Conclusion Rumex L.root extract can change parakeratosis of psoriasis skin，which has a therapeutic effect，but its function and blood biochemical parameters of mice may not have clear correlation.

Rumex L.root extract；Mouse tail model；Histopathology；Blood biochemistry

R965

A

1673-7210（2016）07（b）-0004-05

2016-04-02本文編輯：任念）

新疆維吾爾自治區(qū)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助項(xiàng)目（KY2015138；KY2015139）。

阿布都吉力力·阿布都艾尼（1982.6-），男，新疆伊犁人，中國(guó)科學(xué)院大學(xué)有機(jī)化學(xué)專業(yè)2015級(jí)在讀博士研究生；研究方向：民族醫(yī)藥。

熱比姑麗·伊斯拉木（1970.10-），女，新疆阿圖什人，博士，主要從事維吾爾藥藥理毒理學(xué)研究。