玉林437例高危型人乳頭瘤病毒感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變的分析

李繼慧黎華輝

·論著·

玉林437例高危型人乳頭瘤病毒感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變的分析

李繼慧★黎華輝

目的調(diào)查玉林地區(qū)婦女生殖道高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染與宮頸上皮內(nèi)瘤病變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）的關(guān)系。方法應(yīng)用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)（HybriMax），對婦科門診就診的3 317例有性生活史的婦女，采集宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行HPV分型檢測，對檢查HPV高危型別陽性者進(jìn)行宮頸活組織檢查。結(jié)果自2014年7月至2015年6月期間，共檢測我院就診病例3 317例，檢出高危型HPV感染者694例，陽性率為20.92％。對437例進(jìn)行宮頸活組織檢查，CIN 26例，占5.95％（26/437），其中CINⅡ～Ⅲ12例，占2.74％（12/437）。結(jié)論玉林地區(qū)婦女高危型HPV感染率及高危型HPV感染者宮頸病變檢出率均較高，本地區(qū)婦女宮頸上皮內(nèi)瘤病變常見的高危型HPV類型為HPV16、52、58、18、33。

人乳頭瘤病毒；宮頸上皮內(nèi)瘤病變；導(dǎo)流雜交分型技術(shù)

宮頸癌是世界范圍內(nèi)最常見的婦科惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在發(fā)展中國家尤為明顯。已有明確的證據(jù)證明，持續(xù)的高危型別人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宮頸癌發(fā)生及進(jìn)展的最主要因素［1］。目前，根據(jù)世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）的數(shù)據(jù)顯示，至少有13種高危型別的HPV可以導(dǎo)致宮頸癌［2］。相比其它類型癌癥，宮頸癌的篩查具有極高的有效性。目前為止，全世界仍然有超過50萬女性受到宮頸癌的危害。在發(fā)展中國家，宮頸癌仍然是最為常見的發(fā)病率和死亡率較高的婦科惡性腫瘤之一［3］。因此，針對女性宮頸癌的預(yù)防、篩查及監(jiān)控工作就顯得尤為關(guān)鍵。然而，值得關(guān)注的是經(jīng)濟(jì)文化較為落后的地區(qū)以及農(nóng)村人口中由宮頸癌引起的高死亡率尤為突出，所以將宮頸癌篩查的研究立足于偏遠(yuǎn)地區(qū)人群就顯示出極為重要的作用［3-4］。為了解本地區(qū)婦女高危型HPV感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變的相關(guān)性，我們應(yīng)用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)（HybriMax），針對婦科門診就診婦女進(jìn)行了HPV感染分型的檢測，共3 317例，并將高危型HPV感染者進(jìn)行宮頸活組織檢查。通過篩查分析不同高危HPV型別的危害性，進(jìn)一步指導(dǎo)玉林地區(qū)HPV檢測及宮頸癌篩查的臨床檢測及診斷?，F(xiàn)將結(jié)果整理報道如下。

1 材料方法

1.1 臨床樣本

樣本選取自2014年7月至2015年6月期間，醫(yī)院婦科門診就診有性生活史的婦女共計3 317例，年齡19～63歲，平均年齡40.9歲，自愿接受HPV基因分型檢測。6個月后對HPV高危型別陽性者進(jìn)行回訪，其中437名婦女愿意接受在陰道鏡下定點取宮頸活體組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，以確定宮頸上皮內(nèi)瘤病變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）的程度，并對CIN陽性患者再次進(jìn)行HPV基因檢測。

1.2 HPV基因分型檢測

1.2.1 儀器與試劑

HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀HHM-2型（潮州凱普生物科技股份有限公司）、人類乳頭瘤狀病毒基因分型檢測試劑盒（HPV-21分型檢測）（潮州凱普生物化學(xué)股份有限公司）；DNA擴(kuò)增儀（Life Express）（杭州博日科技有限公司）。

1.2.2 樣本采集

窺器暴露宮頸，使用無菌棉簽擦去宮頸口分泌物，利用潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供的專用毛刷于宮頸鱗柱狀交界處旋轉(zhuǎn)3～5圈，取得宮頸管脫落細(xì)胞，將取有標(biāo)本的毛刷放置于對應(yīng)標(biāo)號的專用的細(xì)胞保存液試管中，4℃保存，2周內(nèi)完成檢測。

1.2.3 檢測方法

提取樣本DNA后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，利用核酸分子快速導(dǎo)流雜交技術(shù)，使目的產(chǎn)物定向地穿過固定有特異標(biāo)記探針的低密度基因芯片薄膜上，從而發(fā)生快速雜交，通過標(biāo)記顯色，根據(jù)芯片上HPV分型分布相應(yīng)點進(jìn)行判斷其感染亞型。實驗同時檢測21種HPV基因型，其中13種高危型（high-risk types，HR-HPV），包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，5種低危型（lowrisk types，LR-HPV），包括6、11、42、43、44及3種中國人群常見亞型（53、66、CP8304）。具體操作步驟按試劑盒及儀器使用說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

本報道應(yīng)用SSPS 17.0統(tǒng)計軟件，采用χ2檢驗對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 HPV亞型的感染情況

利用低密度芯片（圖1）快速導(dǎo)流雜交的方法，本報道3 317例樣本中，HPV陽性率為26.89％（892/ 3 317），其中高危型HPV陽性率為20.92％（694/ 3 317）。高危型HPV各亞型檢出情況，見表1。

上述HPV高危型別陽性病例中，有437例高危型別回訪患者進(jìn)行了病理學(xué)檢查及HPV核酸檢測，其中CIN陽性病例共26例，CIN發(fā)生率為5.95％（26/437），其中CINⅡ～Ⅲ發(fā)生率為2.74％（12/437）。同時，CINⅠ的HPV陽性感染率為35.71％（5/14），CINⅡ～Ⅲ的HPV陽性感染率為83.33％（10/12），見表2。有宮頸上皮內(nèi)瘤變的病例檢出的前6種高危型HPV基因型為52、16、58、18、68、33。利用R×C列聯(lián)表分析（表3），采用χ2檢驗對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示P=0.02，即CIN與高危型HPV感染密切相關(guān)。

表1 高危型HPV各亞型檢出分布Table 1 Distribution of high-risk HPV detection

表2 26例宮頸上皮內(nèi)瘤變病例HPV感染分布Table 2 Distribution of HPV infection in 26 patients with CIN

表3 χ2檢驗統(tǒng)計分析Table 3χ2teststatistics analysis

2.2 HPV復(fù)合感染情況

在本次調(diào)查中，HPV復(fù)合感染（一個人同時感染2個或以上的型別，可以是同時感染高危型，也可以是高低危型別同時感染），高危型多重感染占HPV陽性婦女的19.73％（176/892），占被篩查婦女的5.31％。在合并感染中，常見的復(fù)合感染類型有HPV52、16、58，68、18、33之間的復(fù)合感染及與其它亞型的復(fù)合感染（表1）。

2.3 高危型HPV感染與年齡的關(guān)系

本次調(diào)查對象的年齡分布為19～63歲，高危型HPV感染率在35歲以下及45歲以上婦女中較高，分別為23.63％和21.53％，高危型HPV陽性率在19～35歲、36～45歲以及46～63歲年齡組間比較，見表4。

表4 高危型HPV感染在不同年齡段婦女中的分布Table 4 Distribution of high-risk HPV infection in differentage periods

3 討論

越來越多的證據(jù)已經(jīng)證明，持續(xù)的高危型HPV感染會導(dǎo)致惡性宮頸癌癥的發(fā)生［1］。因此，HPV檢測是宮頸癌篩查中必不可少的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。然而，在我國開展的宮頸癌篩查數(shù)據(jù)顯示，宮頸病變的患病率在2.5％～5.9％，表明在中國宮頸病變?nèi)匀皇菄?yán)重的生殖健康問題［4-13］。根據(jù)我國2015年公布數(shù)據(jù)顯示，全國約有2 814 000例死于癌癥，其中女性1 004 400例，約占總死亡病例36％。女性宮頸癌發(fā)病人數(shù)為98 900例，占女性癌癥發(fā)病總?cè)藬?shù)5.6％，死亡病例30 500例，占女性癌癥死亡總?cè)藬?shù)0.3％［4］。從橫向的不同地理區(qū)域進(jìn)行分析，華北地區(qū)女性宮頸癌發(fā)病人數(shù)為16 700例，死亡人數(shù)6 100例，死亡率約36％；東北地區(qū)發(fā)病人數(shù)10 500例，死亡人數(shù)2 400例，死亡率約23％；華東地區(qū)發(fā)病人數(shù)27 600例，死亡人數(shù)6 700例，死亡率約24％；華中地區(qū)發(fā)病人數(shù)17 400例，死亡人數(shù)4 100例，死亡率約24％；華南地區(qū)發(fā)病人數(shù)8 100例，死亡人數(shù)2 300例，死亡率約28％；西南地區(qū)發(fā)病人數(shù)11 300例，死亡人數(shù)6 200例，死亡率約55％；西北地區(qū)發(fā)病人數(shù)7 300例，死亡人數(shù)2 600例，死亡率約36％。從縱向的不同行政區(qū)域來分析，城鎮(zhèn)地區(qū)宮頸癌發(fā)病人數(shù)為53 200例，死亡人數(shù)13 600例，死亡率約26％；農(nóng)村地區(qū)為45 700例，死亡人數(shù)16 900例，死亡率約40％［4］。以上數(shù)據(jù)指出，城鎮(zhèn)地區(qū)宮頸癌發(fā)病率明顯高于農(nóng)村人口，但死亡率則顯著低于農(nóng)村地區(qū)。然而，值得關(guān)注的是經(jīng)濟(jì)文化較為落后的西南地區(qū)以及農(nóng)村人口中由宮頸癌引起的高死亡率尤為突出，所以將宮頸癌篩查的研究立足于農(nóng)村人群就顯示出極為重要的作用。

過去的研究指出，HPV16與HPV18型別感染在宮頸癌患者中最常見［1-3］。最近的研究則發(fā)現(xiàn)，引起宮頸病變包括宮頸癌的高危HPV感染型別在不同地區(qū)之間有所差異［7-8］。有文獻(xiàn)指出，相較于HPV16與18型別的感染，在亞洲國家HPV52與58型別感染更常見，在上海有42％的宮頸癌標(biāo)本存在HPV52與58型別感染［8］。另一個來自北京的多中心研究中報道，HPV16、58、33、56及31型別感染在宮頸病變中最常見［11］。一份對廣東省潮州市13 750例女性進(jìn)行HPV篩查的研究發(fā)現(xiàn)，感染型別按感染率高低依次為HPV52、16、58、68及33，感染率分別為28％、15％、11％、8％及7％［7］。在華東區(qū)域的研究中顯示，HPV16、58、33、52及66在CINⅠ患者中檢出率最高。而在中國西南地區(qū)，HPV16、58、18、52及33型別的感染在宮頸癌病例中最普遍［6］。綜上，可以明顯發(fā)現(xiàn)HPV16和18等型別為中國最常見的高危HPV感染型別。此外，越來越多的研究也表明，中國高危HPV感染分布具有明顯的區(qū)域性，與生活習(xí)慣、年齡、文化水平等因素緊密相關(guān)。

本報道中，玉林地區(qū)3 317例婦女中宮頸高危型HPV感染率為20.92％，與廣東地區(qū)20.3％的水平［14］基本一致，略低于廣西其他地區(qū)23.78％［15］。本報道中高危型HPV陽性標(biāo)本中，病理學(xué)診斷CINⅡ～Ⅲ檢出率為2.74％，相較北京地區(qū)2.19％的水平明顯增高［16］。HPV52、16和58型是玉林地區(qū)人群最主要的3個高危型HPV亞型，其在高危型HPV陽性人群中的百分率依次為5.49％、4.55％和3.04％，其次是18型1.60％、68型1.36％，33型1.18％。此外，高危型別HPV感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變，特別是CINⅡ及以上呈高度相關(guān)，此結(jié)果與以往報道基本一致［7-15］（表2）。有宮頸上皮內(nèi)瘤的病例檢出的前3種高危型HPV基因型為52、16、58，應(yīng)重視這些感染型別的防治。

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)高危型HPV陽性人群中176例發(fā)生多重感染，高危型多重感染占HPV陽性婦女的19.73％。有報道人群中多種HPV復(fù)合感染占總HPV感染人數(shù)的20％～30％，和單個HPV感染相比，增加了發(fā)生癌前病變的風(fēng)險［17］。多種HPV復(fù)合感染可以是同時感染不同的HPV類型，也有可能是多次感染導(dǎo)致［17］。

綜上所述，玉林地區(qū)高危型HPV檢出率相比發(fā)達(dá)地區(qū)明顯較高，需要增強(qiáng)科普婦女健康意識與宮頸癌篩查的重要性。其次，感染型別分布與國內(nèi)其它地區(qū)明顯不同，其中52、58型別檢出率較高，需要對上述型別加以重視與防治。

［1］Arbyn M，Castellsague X，de Sanjose S，etal.Worldwide burden of cervical cancer in 2008［J］.Annu Oncol，2011，22（12）：2675-2686.

［2］Torre LA，Bray F，Siegel RL，etal.Global cancer statistics，2012［J］.CA Cancer JClin，2015，65（2）：87-108.

［3］Banerjee J，M ishra N，Dhas Y.Metagenomics：A new horizon in cancer research［J］.Meta Gene，2015，5：84-89.

［4］Chen WQ，Zheng RS，Baade PD，etal.Cancer Statistics in China，2015［J］.CA Cancer JClin，2016，66（2）：115-132.

［5］王玉豐，林玲，劉春雨，等.三亞地區(qū)婦女人乳頭瘤病毒感染的分子流行病學(xué)調(diào)查［J］.檢驗醫(yī)學(xué)，2012，27（8）：628-630.

［6］孫曄.586例宮頸疾病患者HPV檢測結(jié)果分析［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2015，36（12）：1777-1779

［7］李智敏，羅喜平，毛玲芝，等.廣東省潮州市13750例婦女宮頸人乳頭瘤病毒感染狀況及基因型分析［J］.中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志，2012，8（4）：357-360.

［8］Zhang R，Shi TY，Ren Y，et al.Risk factors for human papillomavirus infection in Shanghai suburbs：A population-based study with 10000 women［J］.JClin Virol，2013，58（1）：144-148.

［9］Hou R，Xu CY，Zhang SW，et al.Distribution of human papillomavirus genotype and cervical neoplasia among women with abnormal cytology in Beijing，China［J］.Int JGynaecol Obstet，2012，119（3）：257-261.［10］Ding X，Liu Z，Su J，et al.Human papillomavirus type-specific prevalence in women referred for colposcopic examination in Beijing［J］.JMed Virol，2014，86（11）：1937-1943.

［11］LiCD，Wu MH，Wang JD，et al.A population-based study on the risks of cervical lesion and human papillomavirus infection among women in beijing，people’s republic of China［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2010，19（10）：2655-2664.

［12］Wang L，Dai SZ，Chu HJ，etal.Intergration sites and genotype distributions of human papillomavirus in cervical intraepithelial neoplasia［J］.Asian Pac JCancer Prev，2013，14（6）：3837-3841.

［13］Chen Q，Xie LX，Qing ZR，etal.Epidemiologic characterization of human papillomavirus infection in rural Chaozhou，eastern Guangdong province of China［J］. Plosone，2012，7（2）：e32149.

［14］李亞紅，李楠，張珍，等.廣東地區(qū)2782例婦女高危型人乳頭瘤病毒感染陽性率和年齡段的關(guān)系［J］.分子診斷和治療雜志，2010，2（2）：112-115.

［15］劉繼秀，莫云，白華，等.廣西4874例婦女高危型人乳頭瘤病毒感染的流行病學(xué)現(xiàn)狀及其與宮頸上皮內(nèi)瘤變的關(guān)系［J］.實用婦產(chǎn)科雜志，2011，8（27）：596-597.

［16］張為遠(yuǎn)，武明輝，張淞文，等.2007～2008年北京地區(qū)25～54歲已婚婦女宮頸上皮內(nèi)瘤變流行病學(xué)現(xiàn)狀調(diào)查［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2010，45（3）：892-897.

［17］李繼慧，羅宇迪，張炬光，等.3150例婦女宮頸乳頭狀瘤病毒感染的調(diào)查查分析［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2014，5（36）：677-679.

Investigation of cervical intraepithelial neoplasia in 437 high-risk human papilloma virus infected patients from Yulin

Li Jihui★，LiHuahui
（Yulin Maternal and Child Care Service Center，Yulin，Guangxi，China，537000）

Objective To investigate the relationships between women high-risk human papilloma virus（HPV）infection and cervical intraepithelial neoplasia（CIN）in Yulin.Methods A total of 3 317 outpatient women with sexual histories were checked for HPV genotyping via DNA flow-through hybridization genotyping technique（HybriMax），and then cervical biopsy had was performed among the women with high-risk HPV infection.Results 694 high-risk HPV infections were detected out of 3 317 patients from July 2014 to June 2015，and the positive HPV rate was 20.92％.The cervical biopsy was performed on 437 patients and the proportion of CIN was5.95％（26/437），including 12 patients with CINⅡ～Ⅲ（2.74％）.Conclusion The rate of high-risk HPV infection and proportion of CIN among high-risk HPV infector were higher，and general types of high-risk HPV were HPV16，52，58，18，33 in Yulin district.

Human papilloma virus；Cervical intraepithelial neoplasi；Hybri Max

玉林市婦幼保健院，廣西，玉林537000

★通訊作者：李繼慧，E-mail：ljhhlc@126.com