EMP1、EGF和NRG3在鼻息肉中的表達水平及糖皮質(zhì)激素的影響

緱麗軍

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EMP1、EGF和NRG3在鼻息肉中的表達水平及糖皮質(zhì)激素的影響

緱麗軍

目的探討上皮膜蛋白1(EMP1)、表皮生長因子(EGF)、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3(NRG3)在鼻息肉中的表達水平及糖皮質(zhì)激素對其表達的影響。方法鼻息肉組織標(biāo)本取自于40例鼻息肉病例。選擇30例因鼻中隔偏曲接受鼻內(nèi)鏡手術(shù)的病例的下鼻甲黏膜組織作為對照組。40例鼻息肉病例中，伴重度上皮增生14例，伴輕中度上皮增生26例；伴鱗狀上皮化生12例，不伴鱗狀上皮化生28例。采用實時熒光定量技術(shù)(qRT-PCR)、免疫組化方法檢測EMP1、EGF和NRG3的表達水平。結(jié)果鼻息肉組組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。鼻息肉組組織中EMP1、EGF、NRG3的表達陽性率均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。伴有重度上皮增生鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平均低于伴有輕中度上皮增生鼻息肉組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。伴有鱗狀上皮化生鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平均低于不伴有鱗狀上皮化生鼻息肉組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后，鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平均較治療前明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療后，鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3的表達陽性率均較治療前升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療前鼻息肉組織中EMP1與EGF、NRG3的 mRNA表達水平均呈正比(r=0.367，P=0.014，r=0.352，P=0.019)，EGF、NRG3的 mRNA表達水平呈正比(r=0.361，P=0.016)；治療后鼻息肉組織中EMP1與EGF、NRG3的 mRNA表達水平均呈正比(r=0.356，P=0.026，r=0.341，P=0.029)，EGF、NRG3的 mRNA表達水平呈正比(r=0.350，P=0.027)。結(jié)論EMP1、EGF和NRG3在鼻息肉發(fā)病及上皮損傷、修復(fù)過程中起重要作用。糖皮質(zhì)激素可通過上調(diào)EMP1、EGF和NRG3的表達在鼻息肉的上皮損傷和修復(fù)中起積極作用。

鼻息肉；糖皮質(zhì)激素；上皮膜蛋白1；表皮生長因子；神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3

鼻息肉是一種常見的頭頸部良性病變，常伴有炎性細胞的浸潤、上皮組織的重構(gòu)及損傷[1]。鼻息肉發(fā)病的具體病因和機制尚未得到明確。近年來鼻息肉組織中某些生化指標(biāo)的異常表達已引起學(xué)術(shù)界注意[2,3]。上皮膜蛋白1(EMP1)是一種膜糖蛋白，與良惡性腫瘤的發(fā)病及病理變化密切相關(guān)。表皮生長因子(EGF)、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3(NRG3)均是酪氨酸激酶受體家族的配體，在多種疾病的發(fā)病過程中起重要作用[4]。有關(guān)EMP1、EGF、NRG3在鼻息肉組織中的表達與鼻息肉發(fā)病、上皮損傷修復(fù)的關(guān)系及糖皮質(zhì)激素對上述指標(biāo)表達的影響的研究筆者所見較少，本研究通過檢測糖皮質(zhì)激素治療前后鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3等指標(biāo)的表達情況，旨在探討EMP1、EGF、NRG3等指標(biāo)的表達在鼻息肉上皮損傷修復(fù)中的作用及糖皮質(zhì)激素對上述指標(biāo)表達的影響。

1　資料與方法

1.1一般資料鼻息肉組織標(biāo)本取自2014年11月至2015年8月我院耳鼻喉科收治的40例患有雙側(cè)鼻息肉并接受鼻內(nèi)鏡治療的病例，鼻息肉經(jīng)病理科病理確診，符合鼻息肉的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。鼻息肉組患者，男26例，女14例；年齡23～75歲，平均年齡(47.91±5.56)歲；40例鼻息肉病例中，經(jīng)病理科病理檢測，伴重度上皮增生14例，伴輕中度上皮增生26例；伴鱗狀上皮化生12例，不伴鱗狀上皮化生28例。選擇30例同期在我院因鼻中隔偏曲接受鼻內(nèi)鏡手術(shù)的病例的下鼻甲黏膜組織作為對照組，男20例，女10例；年齡23～75歲，平均年齡(46.82±5.32)歲。2組性別比、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究均經(jīng)入組患者知情同意，并獲我院倫理委員會審批通過。

1.2標(biāo)本采集及處理鼻息肉患者均在鼻內(nèi)鏡手術(shù)前6周接受過布地奈德鼻噴劑鼻治療(128 μg/次，2次/d，生產(chǎn)廠家：瑞典Astra Zeneca AB)，分別于糖皮質(zhì)激素治療前、治療后取鼻息肉組織。對照組患者組織標(biāo)本取自于手術(shù)中。將新鮮組織樣本分為兩部分：一部分裝入無菌EP管中，分存于液氮，以備后續(xù)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測使用；一部分用甲醛固定石蠟包埋后(厚約4 μm的切片)用于免疫組化。

1.3實驗方法

1.3.1熒光定量PCR：采用美國BD公司生產(chǎn)的熒光定量PCR(qRT-PCR)儀行qRT-PCR，檢測鼻息肉組織和對照組組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平。PCR反應(yīng)步驟如下：94℃預(yù)變性3 min;94℃變性20 s，60℃退火30 s，72℃延伸40 s;35個循環(huán)，72℃延伸10 min。

1.3.2免疫組化：采用SP法對石蠟切片行免疫組化檢測，每張切片在高倍顯微鏡下(×400) 觀察。上皮增生程度判定：4<上皮層數(shù)≤8代表輕度或者中度上皮增生；上皮層數(shù)>8代表重度上皮增生。免疫組化評分：0分，陰性：1分，陽性細胞比例<15%；2分，15%～60%；3分，≥60%。

2　結(jié)果

2.12組組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平鼻息肉組組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

　組別EMP1EGFNRG3鼻息肉組(n=40)1．61±0．211．12±0．170．82±0．11對照組(n=30)4．01±0．592．98±0．301．96±0．19　t值4．1273．3513．023　P值0．0000．0020．009

2.22組組織中EMP1、EGF、NRG3表達陽性率比較鼻息肉組組織中EMP1、EGF、NRG3的表達陽性率均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

　組別EMP1EGFNRG3鼻息肉組(n=40)46．42±8．1938．19±7．0124．61±3．26對照組(n=30)87．78±10．6776．81±8．5269．87±5．39　t值18．75520．79322．182　P值0．0000．0000．000

2.3鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平比較伴有重度上皮增生的鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平均低于伴有輕中度上皮增生的鼻息肉組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。伴有鱗狀上皮化生鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平均低于不伴有鱗狀上皮化生鼻息肉組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

　類別EMP1EGFNRG3重度上皮增生(n=14)1．04±0．220．98±0．180．71±0．10輕中度上皮增生(n=26)2．92±0．291．17±0．201．07±0．17　t值4．5063．3263．011　P值0．0000．0040．011伴有鱗狀上皮化生(n=12)1．02±0．200．96±0．160．68±0．11不伴有鱗狀上皮化生(n=28)2．94±0．271．19±0．221．09±0．15　t值4．2613．2963．008　P值0．0000．0070．015

2.4治療前、后鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平比較治療后，鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表達水平均較治療前明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

組別EMP1EGFNRG3治療前1．61±0．211．12±0．170．82±0．11治療后3．87±0．292．68±0．211．86±0．15t值4．1193．3223．009P值0．0000．0070．016

2.5治療前、后鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3表達陽性率比較治療后，鼻息肉組織中EMP1、EGF、NRG3的表達陽性率均較治療前升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

組別EMP1EGFNRG3治療前46．42±8．1938．19±7．0124．61±3．26治療后80．92±10．5671．26±8．4265．91±4．32t值19．01521．82722．218P值0．0000．0000．000

2.6相關(guān)性分析治療前鼻息肉組織中EMP1與EGF、NRG3的 mRNA表達水平均呈正比(r=0.367，P=0.014;r=0.352，P=0.019)，EGF、NRG3的 mRNA表達水平呈正比(r=0.361，P=0.016)；治療后鼻息肉組織中EMP1與EGF、NRG3的 mRNA表達水平均呈正比(r=0.356，P=0.026;r=0.341，P=0.029)，EGF、NRG3的 mRNA表達水平呈正比(r=0.350，P=0.027)。

3　討論

EMP1是一種完整的膜糖蛋白，具有調(diào)節(jié)上皮分化的功能，最早發(fā)現(xiàn)于腦組織、胃腸道等重要組織[6]。有研究發(fā)現(xiàn)，EMP1與頭頸部腫瘤、口腔腫瘤等良惡性腫瘤的發(fā)病有關(guān)，在其中起了重要作用[7-10]。為探討EMP1在鼻息肉發(fā)病過程中的作用，本研究檢測了鼻息肉組織中EMP1的表達水平，RT-PCR和免疫組化檢測結(jié)果均顯示，鼻息肉組織中EMP1的表達明顯較對照組下調(diào)。表明EMP1的低表達可能參與了鼻息肉的發(fā)病。此外，本研究亦檢測了鼻息肉伴上皮增生組織和伴鱗狀上皮化生組織中EMP1的表達情況。RT-PCR檢測結(jié)果顯示，鼻息肉伴重度上皮增生組織和鼻息肉伴鱗狀上皮化生組織中EMP1的表達水平明顯較輕中度上皮增生組織及不伴鱗狀上皮化生組織中下調(diào)。表明EMP1可能與鼻息肉上皮組織重塑及鱗狀上皮化生有關(guān)，EMP1可能參與了鼻息肉上述病理變化的過程。即EMP1的表達下調(diào)在鼻息肉上皮損傷和修復(fù)過程中起重要作用。目前學(xué)術(shù)界普遍支持鼻息肉不具有惡變傾向的觀點，但鼻息肉具有上皮增生、鱗狀上皮化生等頭頸部常見良惡性腫瘤所具有的病理特點[11]，因此推測鼻息肉是否與這些良惡性腫瘤具有類似的病理變化，而檢測EMP1在鼻息肉組織中的表達水平對判定鼻息肉上皮增生、鱗狀上皮化生具有重要價值[12]。

EGF和NRG3是酪氨酸激酶受體家族的配體，研究發(fā)現(xiàn)，EGF和NRG3在眾多疾病的發(fā)病過程中起作用[11]。本研究亦采用RT-PCR和免疫組化方法檢測鼻息肉組織中EGF和NRG3的表達水平。檢測結(jié)果顯示，鼻息肉組織中EGF和NRG3的表達水平亦較對照組中明顯下調(diào)。表明EGF和NRG3的低表達亦參與了鼻息肉的發(fā)病。國外研究發(fā)現(xiàn)，EGF和NRG3在乳腺上皮增生和分化中扮演重要角色[11]。我們猜想，EGF和NRG3在鼻息肉上皮增生和鱗狀上皮化生過程中是否亦發(fā)揮一定的作用。RT-PCR檢測結(jié)果證實了我們的想法。本檢測結(jié)果顯示，鼻息肉伴重度上皮增生組織和鼻息肉伴鱗狀上皮化生組織中EGF和NRG3的表達水平明顯較輕中度上皮增生組織及不伴鱗狀上皮化生組織中下調(diào)。表明EGF和NRG3可能與鼻息肉上皮組織重塑及鱗狀上皮化生有關(guān)，EGF和NRG3的表達下調(diào)可能參與了鼻息肉上述病理變化的過程。相關(guān)性顯示，在糖皮質(zhì)激素治療前和治療后，EMP1、EGF、NRG3的表達水平均呈正相關(guān)，表明EMP1、EGF、NRG3等指標(biāo)在鼻息肉的發(fā)病及病理變化中可能共同發(fā)揮作用。

糖皮質(zhì)激素對鼻息肉癥狀的緩解及療效具有重要價值。為探討糖皮質(zhì)激素對鼻息肉組織中EMP1、EGF和NRG3表達的影響，本研究采用RT-PCR和免疫組化檢測了糖皮質(zhì)激素治療前和治療后鼻息肉組織中EMP1、EGF和NRG3等指標(biāo)的表達情況。檢測結(jié)果顯示，經(jīng)糖皮質(zhì)激素治療后，鼻息肉組織中EMP1、EGF和NRG3等指標(biāo)的表達明顯較治療前上調(diào)。表明糖皮質(zhì)激素對鼻息肉組織的上皮損傷和修復(fù)具有積極作用，糖皮質(zhì)激素可通過上調(diào)EMP1、EGF和NRG3等生化指標(biāo)的表達進而抑制鼻息肉的上皮異常重塑，修復(fù)鼻息肉損傷的組織。

綜上所述，EMP1、EGF和NRG3等生化指標(biāo)在鼻息肉發(fā)病及上皮損傷、修復(fù)過程中起重要作用。檢測EMP1、EGF和NRG3在鼻息肉組織中的表達水平對判定鼻息肉上皮增生、鱗狀上皮化生具有重要價值。糖皮質(zhì)激素可通過上調(diào)EMP1、EGF和NRG3等生化指標(biāo)的表達在鼻息肉的上皮損傷和修復(fù)中起積極作用。

1劉收厚,于亮,劉志標(biāo),等.透明質(zhì)酸和標(biāo)準(zhǔn)型白細胞分化抗原44在嗜酸性粒細胞型和非嗜酸性粒細胞型鼻息肉發(fā)病過程中的意義.中國耳鼻咽喉頭頸外科,2015,17:431-432.

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9鄭巖,劉鵬飛,郭麗娟,等.嗜酸粒細胞性慢性鼻-鼻竇炎白細胞介素13及其受體α2的表達與意義.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2015,50:230-235.

10Zhang J，Cao W，Xu Q，et al.The expression of EMP1 is downregulated in oral squamous cell carcinoma and possibly associated with tumour metastasis．J Clin Pathol,2011,64:25-29．

11Turashvili G,Bouchal J,Ehrmann J,et al.Novel immunohistochemical markers for the differentiation of lobular and ductal invasive breast carcinomas. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub,2007,151:59-64.

12Jain A，Tindell CA，Laux I，et al.Epithelial membrane protein-1 is a biomarker of gefitinib resistance．Proc Natl Acad Sci USA,2005,102:11858-11863.

The expressions of EMP1, EGF, NRG3 in nasal polyps and the effects of glucocorticoids on their expressions

GOULijun.

DepartmentofOtorhinolaryngology,People’sHospitalofJianyangCity,Sichuang,Jianyang641400,China

ObjectiveTo observe the expressions of EMP1, EGF, NRG3 in nasal polyps and the effects of glucocorticoids on their expressions.MethodsThe nasal polyps tissue specimens were taken from 40 cases of nasal polyps,and the other 30 cases of nasal septum deviation of inferior turbinate mucosa taken by nasal endoscopic surgery were selected as control group. Among 40 cases of nasal polyps,there were 14 cases with severe epithelial hyperplasia, 26 cases with mild or moderate epithelial hyperplasia,moreover, there were 12 cases with squamous metaplasia, 28 cases without squamous metaplasia. The expression levels of EMP1, EGF and NRG3 were detected by Real-time fluorescence quantitative PCR technology (qRT - PCR), immunohistochemistry,respectively.ResultsThe expression levels of EMP1, EGF, NRG3 mRNA in nasal polyps tissues were significantly lower than those in control group (P<0.05). The expression levels of EMP1, EGF,NRG3 mRNA in nasal polyps tissues with severe epithelial hyperplasia were significantly lower than those of nasal polyps tissues with mild or moderate epithelial hyperplasia (P<0.05). The expression levels of EMP1,EGF,NRG3 mRNA in nasal polyps tissues with squamous metaplasia were significantly lower than those of nasal polyps tissues without squamous metaplasia (P<0.05). After treatment, the expression levels of EMP1, EGF, NRG3 mRNA in nasal polyps tissues were significantly increased,as compared with those before treatment (P<0.05). Before treatment and after treatment,the expression levels of EMP1 were positively correlated to those of EGF,NRG3 mRNA (P<0.05),and the expression levels of EGF were positively correlated to those of NRG3 mRNA (P<0.05).ConclusionEMP1, EGF and NRG3 play an important role in the pathogenesis of nasal polyps and in the process of epithelial damage and repairing.Moreover glucocorticoid can increase the expression levels of EMPl, EGF and NRG3 in nasal polyps and may play a positive role in the process of epithelial damage and repairing.

nasal polyps;glucocorticoids;epithelial membrane protein 1; epidermal growth factor; neuromodulation protein 3

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.21.010

641400四川省簡陽市人民醫(yī)院耳鼻喉科

R 765.2

A

1002-7386(2016)21-3237-04

2016-04-17)