子癇前期患者外周血及胎盤組織中半乳糖凝集素1的表達(dá)及意義

胡麗芳，李嵐，黃文珍，劉彤

子癇前期患者外周血及胎盤組織中半乳糖凝集素1的表達(dá)及意義

胡麗芳，李嵐，黃文珍，劉彤

目的：探討子癇前期患者外周血及胎盤組織中半乳糖凝集素1（galectin-1，Gal-1）的表達(dá)及意義。方法：選取我院收治的早發(fā)型重度子癇前期患者53例為觀察組，同期入院體檢正常的孕婦53例為對照組。采用酶聯(lián)免疫法檢測血清Gal-1的濃度，經(jīng)免疫組織化學(xué)法檢測胎盤組織Gal-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果：觀察組和對照組外周血Gal-1濃度分別為（38.59±9.02）ng/L和（27.33±8.31）ng/L，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.684，P＜0.001）。觀察組胎盤組織Gal-1的表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=5.632，P＜0.001）。結(jié)論：Gal-1可能與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)病有關(guān)，或可成為有價值的預(yù)測子癇前期的生物標(biāo)記物。

先兆子癇；半乳糖凝集素1；血液化學(xué)分析；胎盤

子癇前期是歸屬于妊娠期高血壓疾病范疇的臨床常見的妊娠期并發(fā)癥。子癇前期患者臨床上主要表現(xiàn)出高血壓和蛋白尿等癥狀［1］。我國約5%～7%的妊娠期婦女會發(fā)生子癇前期，該病是引起圍生期母嬰死亡的重要危險因素［2］。臨床上以孕34周為分界點，將子癇前期劃分為早發(fā)型和晚發(fā)型。早發(fā)型子癇前期發(fā)病早、病情進(jìn)展迅速，易引起嚴(yán)重不良妊娠結(jié)局，已成為國內(nèi)外產(chǎn)科醫(yī)生面臨的棘手問題［3］。在胎盤組織中，半乳糖凝集素1（galectin-1，Gal-1）是第1個被發(fā)現(xiàn)的半乳糖凝集素家族成員，其與多種妊娠期疾病相關(guān)［4］。本研究通過分析53例早發(fā)型重度子癇前期患者外周血及胎盤組織中Gal-1水平的變化，探討子癇前期患者外周血及胎盤組織中Gal-1的表達(dá)及其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2014年1月—2015年1月在江漢大學(xué)第二附屬醫(yī)院（我院）就診的53例早發(fā)型重度子癇前期患者為觀察組，以及53例同期體檢正常的孕婦為對照組。觀察組患者年齡23～32歲；孕期22～32周。對照組孕婦年齡24～32歲，孕期22～33周。根據(jù)《婦產(chǎn)科（第8版）》對早期重度子癇前期的診斷為依據(jù)［5］：①處于妊娠期的第20～34周；②收縮壓≥160mmHg（1mmHg=0.133 kPa）或（和）舒張壓≥110mmHg；③24 h蛋白尿≥500mg；④肝腎功能異常［谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）升高，血清肌酐（SCr）＞106μmol/L］；⑥血小板下降；⑦出現(xiàn)頭痛以及上腹部不適等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴其他妊娠期并發(fā)癥；②既往高血壓或（和）糖尿病史；③多胎。2組孕婦的年齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、孕周、初潮時間、生育史、流產(chǎn)史、血樣采集和胎盤組織留取孕周等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。見表1。

1.2 標(biāo)本采集

1.2.1 血樣采集入院經(jīng)確診為早發(fā)型重度子癇前期后，即留取肘正中靜脈血4mL，4℃下離心后分離血清，-20℃冰柜保存待測。

表1 2組一般資料（±s）

表1 2組一般資料（±s）

注：生孕史，流產(chǎn)史用中位數(shù)（百分位數(shù)）［M（P25，P75）］表示。

胎盤組織留取孕周觀察組53 26.6±2.6 31.3±2.3 12.2±2.1 2（1，3）2（1，4）30.8±2.2 36.8±2.4對照組53 25.8±2.4 31.7±2.8 11.9±2.2 2（1，3）2（1，3）31.2±2.3 37.4±2.3 t或Z 1.646 0.804 0.718 3.147 2.519 0.915 1.314 P 0.103 0.423 0.474 0.637 0.684 0.362 0.192組別n年齡（歲）孕周初潮時間（歲）生育史（胎）流產(chǎn)史（次）血樣采集孕周

1.2.2 胎盤組織采集剖宮產(chǎn)胎盤娩出后，取近臍帶3 cm處胎盤組織1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗凈后，用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測外周血Gal-1濃度檢測操作步驟按照人Gal-1 ELISA試劑盒（Santa Cruz Bicycles公司，美國）說明進(jìn)行：①將Gal-1標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同系列濃度；②設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待檢樣品孔以及空白孔，各3個復(fù)孔；③除空白孔外，各孔加入相應(yīng)的樣品；④37℃孵育0.5 h后，洗滌5次，甩干；⑤除空白孔外，各孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記試劑；⑥重復(fù)步驟4；⑦各孔加入顯色劑，37℃避光15min；⑧加終止液；⑨450 nm處測各孔光密度（OD）值，空白調(diào)零。以標(biāo)準(zhǔn)的濃度為橫坐標(biāo)，縱坐標(biāo)為相應(yīng)的OD值，繪制“濃度-OD”曲線，然后計算出樣品的濃度。

1.4 免疫組化SP染色法檢測胎盤Gal-1蛋白表達(dá)檢測操作步驟按照人Gal-1免疫組化檢測試劑盒（Santa Cruz Bicycles公司，美國）的說明進(jìn)行：組織切片脫蠟；60℃烤箱烘烤2 h；經(jīng)二甲苯脫蠟和梯度乙醇水化；采用檸檬酸高壓抗原修復(fù)法修復(fù)；在37℃的3%的H2O2溶液中孵育10min；經(jīng)PBS洗滌后，加入一抗，4℃孵育24 h；經(jīng)PBS洗滌后，加入熒光標(biāo)記的二抗，37℃孵育0.5 h；加入顯色劑顯色；經(jīng)蘇木素復(fù)染，梯度乙醇水化，二甲苯透明；封片。染色度評分：強(qiáng)染色3分，中度染色2分，弱染色1分。陽性細(xì)胞比例評分，11%～50%比例2分，51%～75%比例3分，＞75%比例4分。綜合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行分析：2～3分弱陽性，4～5分中度陽性，6～7分強(qiáng)陽性。此外，無論染色的強(qiáng)度如何，只要細(xì)胞陽性比例＜10%，都認(rèn)為是陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法統(tǒng)計分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件。定量資料符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用M（P25，P75）表示，組間比較用軼和檢驗。等級資料比較采用秩和檢驗。陽性率比較用卡方檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組產(chǎn)婦外周血Gal-1濃度比較觀察組外周血Gal-1濃度為（38.59±9.02）ng/L，對照組為（27.33±8.31）ng/L，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t= 6.684，P＜0.001）。

2.2 2組胎盤組織Gal-1蛋白表達(dá)觀察組胎盤組織Gal-1的表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z= 5.632，P＜0.05），見表2。胎盤組織Gal-1呈棕黃色染色，見圖1（見封三）。

表2 2組胎盤組織Gal-1蛋白表達(dá)情況（例）

3 討論

現(xiàn)代生殖免疫學(xué)認(rèn)為，胚胎是攜帶父方抗原的同種異體物，母體通過多種途徑建立和維持母胎免疫耐受。妊娠期免疫耐受的失衡，釋放大量的炎性因子，血管內(nèi)皮功能損傷，增加胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生［6］。CD4+T細(xì)胞各亞型和相關(guān)細(xì)胞因子在母胎的雙向免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作用，在抗原刺激下，分化為輔助性T細(xì)胞1型（Th1）、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）4種亞型，共同維持機(jī)體免疫平衡。正常妊娠時，具有抗炎性和維持自身免疫耐受的Th2和Treg細(xì)胞數(shù)量上升，而促炎性Th1和Th17細(xì)胞數(shù)量下降［7］。母胎免疫耐受失衡，促進(jìn)炎性Th1和Th17細(xì)胞數(shù)量增加，而Th2和Th17細(xì)胞數(shù)量減少，Th1/Th2及Th17/Treg失衡，導(dǎo)致大量炎癥因子的釋放，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，全身小動脈痙攣，最終導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生［8］。

Gal是多功能細(xì)胞調(diào)控因子家族，具有相當(dāng)廣泛的生物活性，參與胚胎的發(fā)生，細(xì)胞的增殖和凋亡等［9］。Gal-1能夠抑制中性粒細(xì)胞滲出，繼而調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞的遷移；能夠抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾??；能夠降低宿主對同種異體物的免疫反應(yīng)，促進(jìn)免疫耐受［10-11］。Molvarec等［12］研究顯示，子癇前期孕婦外周血以及胎盤組織中Gal-1水平較正常妊娠孕婦明顯上升。Than等［13］發(fā)現(xiàn)，絨毛膜羊膜炎患者胎盤組織以及滋養(yǎng)細(xì)胞中Gal-1的水平明顯上升。Rabinovich等［14］研究證實，Gal-1能夠誘導(dǎo)活化的Th1和Th17細(xì)胞凋亡，或向Th2或Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)換，抑制促炎細(xì)胞因子釋放，從而增強(qiáng)免疫耐受。Gal-1可以通過調(diào)節(jié)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞上的人白細(xì)胞抗原G的表達(dá)，使絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞逃避自然殺傷（NK）細(xì)胞的攻擊，促進(jìn)免疫逃逸［15］。本研究分析了早發(fā)型重度子癇前期患者外周血以及胎盤組織中Gal-1的水平，發(fā)現(xiàn)患者外周血Gal-1水平高于正常孕婦，胎盤組織中Gal-1蛋白的表達(dá)也高于正常孕婦。提示早發(fā)型重度子癇前期患者免疫耐受失衡，并伴有Gal-1水平的上升，究其原因可能是因為患者Th1/Th2及Th17/ Treg失衡，反過來激活Gal-1，導(dǎo)致其表達(dá)水平上升，以維持正常妊娠。研究發(fā)現(xiàn)，Gal-1基因敲除小鼠流產(chǎn)率上升，給予Gal-1處理后，可以通過Gal-1誘導(dǎo)子宮免疫耐受性樹突細(xì)胞的擴(kuò)張和招募，繼而促進(jìn)Treg分化Th2和Treg，維持免疫耐受，降低其流產(chǎn)率［16］。因此可考慮將Gal-1作為“報警蛋白”，通過對Gal-1水平的檢測而對子癇前期患者的病情發(fā)展做出判斷。

綜上所述，早發(fā)型重度子癇前期患者血清和胎盤組織中Gal-1的水平升高，提示Gal-1可能與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)病有關(guān)，或可成為有價值的預(yù)測子癇前期的生物標(biāo)記物。

［1］邵曉曼.早發(fā)型重度子癇前期期待治療對妊娠結(jié)局的影響［J］.中國婦幼保健，2014，15（1）：34-35.

［2］呂涌婭.早發(fā)型重度子癇前期發(fā)病及母嬰結(jié)局的臨床分析［J］.實用婦產(chǎn)科雜志，2015，26（2）：146-148.

［3］劉偉武.早發(fā)型重度子癇前期不同孕齡與母嬰結(jié)局的關(guān)系研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2014，3（8）：932-934.

［4］Nio-Kobayashi J，Abidin HB，Brown JK，et al.The Expression and Cellular Localization of Galectin-1 and Galectin-3 in the Fallopian Tube Are Altered inWomenwith Tubal Ectopic Pregnancy［J］.Cells TissuesOrgans，2015，200（6）：424-434.

［5］康寧.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.8版．西安：第四軍醫(yī)大學(xué)出版社，2013.

［6］李大金.母-胎界面交互對話介導(dǎo)母-胎免疫耐受［J］.生殖醫(yī)學(xué)雜志，2014，23（3）：209-211.

［7］王艷，周小麗，楊青.T細(xì)胞亞群及其免疫分子介導(dǎo)的妊娠免疫耐受分析［J］.中外醫(yī)學(xué)研究，2014，9（24）：159-160.

［8］周小麗，王紹娟.T細(xì)胞亞群及其免疫分子介導(dǎo)的妊娠免疫耐受研究進(jìn)展［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2013，34（8）：1292-1294.

［9］呂圓，劉愛霞，朱依敏.半乳糖凝集素1與妊娠的相關(guān)性研究［J］.國際生殖健康/計劃生育雜志，2014，33（2）：120-123.

［10］梁磊，宋靜慧，陳秀娟.母胎界面半乳糖凝集素的表達(dá)及其在妊娠中的作用［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48（1）：58-60.

［11］董立園.半乳糖凝集素1，3在不明原因不孕癥子宮內(nèi)膜、正常子宮內(nèi)膜及早孕蛻膜中的表達(dá)及意義的研究［D］.石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2012.

［12］Molvarec A，Blois SM，Stenczer B，et al.Peripheral blood galectin-1-expressing T and natural killer cells in normal pregnancy and preeclampsia［J］.Clin Immunol，2011，139（1）：48-56.

［13］Than NG，Kim SS，Abbas A，et al.Chorioamnionitis and increased galectin-1 expression in PPROM--an anti-inflammatory response in the fetalmembranes？［J］.Am JReprod Immunol，2008，60（4）：298-311.

［14］Rabinovich GA，Sotomayor CE，Riera CM，et al.Evidence of a role for galectin-1 in acute inflammation［J］.Eur J Immunol，2010，30（5）：1331-1339.

［15］Tirado-González I，F(xiàn)reitag N，Barrientos G，et al.Galectin-1 influences trophoblast immune evasion and emerges as a predictive factor for the outcome of pregnancy［J］.Mol Hum Reprod，2013，19（1）：43-53.

［16］Blois SM，Ilarregui JM，Tometten M，etal.A pivotal role forgalectin-1 in fetomaternal tolerance［J］.NatMed，2007，13（12）：1450-1457.

The Expression of Galectin-1 in Peripheral Blood and Placental Tissue of Preeclampsia Patients and Its Significance

HU

Li-fang，LILan，HUANGWen-zhen，LIU Tong.Department of Obstetrics，The Second Affiliated Hospital of Jianghan University，Wuhan 430050，China

HU Li-fang，E-mail：changq888@126.com

Objective：To investigate the expression ofgalectin-1 in peripheralblood and placental tissue ofpreeclampsia patients and its significance.Methods：A total of53 cases of early onset severe preeclampsia and 53 cases of normal pregnant peoplewere selected as research objects.The concentration ofserum Gal-1 was detected by ELISA and the expression ofGal-1 protein in placenta tissuewas detected by immunohistochemistry.Results：The concentration of serum Gal-1 of the observation group and the control group were（38.59±9.02）ng/L and（27.33±8.31）ng/L，respectively.Therewas significant differences between the two groups（t=6.684，P＜0.001）.The expression ofGal-1 protein in observation group was significantly higher than that in the controlgroup（Z=5.632，P＜0.001）.Conclusions：Gal-1may be related to the early onset severe preeclampsia.It may be a valuablebiomarker forpredicting preeclampsia.

Pre-eclampsia；Galectin 1；Blood chemicalanalysis；Placenta（JInt Obstet Gynecol，2016，43：561-562，573，封三）

2016-04-15）

［本文編輯王琳］

武漢市衛(wèi)生和計劃生育委員會課題（WX15D29）

430050武漢，江漢大學(xué)第二附屬醫(yī)院產(chǎn)科

胡麗芳，E-mail：changq888@126.com