乳化異氟醚及異氟醚對犬血清中C反應(yīng)蛋白及總補體含量的影響

胡學(xué)遠，張帥，宋曼玉，羅欣然，張靚玉，范宏剛，張建濤，劉濤

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030）

乳化異氟醚及異氟醚對犬血清中C反應(yīng)蛋白及總補體含量的影響

胡學(xué)遠，張帥，宋曼玉，羅欣然，張靚玉，范宏剛，張建濤，劉濤

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030）

為了研究乳化異氟醚及異氟醚對犬血清中C反應(yīng)蛋白（CRP）及總補體（CH50）含量的影響，將40只犬隨機均分為乳化異氟醚復(fù)合制劑麻醉組（RYM組）、異氟醚麻醉組（YM組）、乳化異氟醚復(fù)合制劑麻醉+手術(shù)（RYMS）及異氟醚麻醉+手術(shù)（YMS）四組。RYM、YM兩組只進行麻醉不進行手術(shù)，RYMS、YMS兩組在實施麻醉的同時分別進行腸管吻合術(shù)，在麻醉前（T0）、手術(shù)完成即刻（T1，而RYM和YM組在麻醉后35～40 min進行采樣）、術(shù)后24 h（T2）、術(shù)后48 h（T3）、術(shù)后72 h（T4）等時間點，采血，測定血清中CRP及CH50含量。結(jié)果表明，乳化異氟醚復(fù)合麻醉及麻醉下手術(shù)對犬血清中CRP、CH50含量的影響，與異氟醚相似，兩者無明顯的差異。

乳化異氟醚；異氟醚；麻醉；CRP；CH50

手術(shù)創(chuàng)傷對動物機體產(chǎn)生不同程度的應(yīng)激反應(yīng)及對免疫系統(tǒng)的影響是獸醫(yī)外科學(xué)領(lǐng)域關(guān)注的熱點。任何手術(shù)操作都可產(chǎn)生不同程度的應(yīng)激反應(yīng)和免疫功能的抑制，術(shù)中麻醉深度不適宜，不但會影響到手術(shù)進程，還會增加手術(shù)并發(fā)癥和意外發(fā)生的風(fēng)險，良好的麻醉可有效地減輕術(shù)中手術(shù)傷害，降低圍術(shù)期應(yīng)激反應(yīng)，且對機體的免疫功能影響短暫、輕微。課題組前期通過組方試驗將乳化異氟醚、芬太尼和利多卡因等藥物進行復(fù)合，研制成乳化異氟醚復(fù)合制劑，并對其麻醉效果進行監(jiān)測［1-2］。本次將研究乳化異氟醚及異氟醚麻醉對經(jīng)歷腸管吻合術(shù)犬血清中CRP及CH50含量的影響。

1材料與方法

1.1試驗動物試驗犬40只，性別不限，體重9.2±1.4 kg，13.4±4.2月齡，購自哈爾濱青喜實驗動物養(yǎng)殖場，入動物舍之前進行檢疫和體檢。

1.2試驗藥品乳化異氟醚復(fù)合制劑（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)外科教研室研制，批號2015041）；異氟醚（河北九派制藥有限公司，批號150610）；丙泊酚（西安力邦制藥有限公司，批號20150602）；30%脂肪乳（西安力邦制藥有限公司，批號150311）；芬太尼原粉（購自國內(nèi)某軍事研究所），2%利多卡因（上海復(fù)星朝暉制藥有限公司，批號150221-

2）；犬CRP ELISA試劑盒（北方生物技術(shù)研究所，批號20130502）；犬CH50 ELISA試劑盒（上海邦奕生物科技有限公司，批號20150410）。

1.3試驗儀器Materx小動物專用呼吸麻醉機（美國Midmark有限公司）；MP30型呼吸循環(huán)監(jiān)護儀（芬蘭Philips公司）；Sigama-30K型高速冷凍臺式離心機（德國Sigma有限公司）；Poch酶標儀（美國Biotek公司）；GL800型旋渦振蕩器（江蘇海門麒麟醫(yī)用儀器廠）；常規(guī)手術(shù)器械和靜脈留置針等。

1.4動物分組及實施麻醉將40只犬隨機均分為乳化異氟醚復(fù)合制劑麻醉組（RYM組）、異氟醚麻醉組（YM組）、乳化異氟醚復(fù)合制劑麻醉+手術(shù)（RYMS）及異氟醚麻醉+手術(shù)（YMS）4組。RYM和YM組只進行麻醉不進行手術(shù)，RYMS和YMS組在實施麻醉的同時分別進行腸管吻合術(shù)。犬試驗前禁食12 h，禁水6 h。且犬在試驗前2 h，左側(cè)前肢臂頭靜脈安放靜脈留置針，并帶入手術(shù)處置室，由平時飼養(yǎng)人員陪伴，讓試驗動物熟悉環(huán)境。

麻醉：YM組：麻醉前肌肉注射硫酸阿托品注射液（0.02 mg/kg體重），15 min后靜脈勻速推注丙泊酚（4.6±1.8 mg/kg體重）進行麻醉誘導(dǎo)，以異氟醚進行維持麻醉。RYM組試驗前制備乳化異氟醚制劑［2］，向其內(nèi)加入芬太尼（0.8 μg/5 mL），利多卡因濃度（2.2 mg/5 mL），混勻研制成乳化異氟醚復(fù)合制劑。使用復(fù)合制劑對犬實施靜脈誘導(dǎo)麻醉，劑量為0.5 mL/kg體重，待犬進入麻醉狀態(tài)后，采用微量輸液泵勻速靜脈內(nèi)輸注的方式進行維持麻醉，劑量為5 mL/kg體重·h。

1.5手術(shù)模式建立待麻醉確實、良好后，對犬實施腸管吻合術(shù)，所有手術(shù)均由同一名實驗人員（執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師）完成，手術(shù)時間為35.8±4.6 min，術(shù)后常規(guī)消炎、鎮(zhèn)痛、外科護理。

1.6術(shù)中監(jiān)測及樣品檢測在術(shù)中監(jiān)測4組動物體溫、呼吸、心率及血壓等常規(guī)生理指標。在麻醉前（T0）、手術(shù)完成即刻（T1，而RYM和YM組在麻醉后35～40 min進行采樣）、術(shù)后24 h（T2）、術(shù)后48 h（T3）、術(shù)后72 h（T4）等時間點，臂頭靜脈采取血液2 mL，制血清，樣品保存于-80℃冰箱中，待檢。按試劑盒說明書對樣品進行前處理，用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA），檢測血清中CRP及CH50的含量。

2結(jié)果

分別比較RYM與YM及RYMS與YMS組動物體溫、呼吸、心率及血壓等常規(guī)生理指標變化情況。監(jiān)測結(jié)果表明，乳化異氟醚復(fù)合制劑麻醉及麻醉下手術(shù)過程中犬各項常規(guī)生理指標的變化輕微，除呼吸頻率和血氧飽和度在5～10 min時與異氟醚吸入麻醉比較有顯著差異（P＜0.05）外，其他時間點比較均無顯著差異（P＞0.05）。而在5～10 min RYM和RYMS組呼吸頻率和血氧飽和度變化幅度在生理耐受范圍內(nèi)，保持在10%～20%之間。

對血清中CRP含量檢測結(jié)果表明，同列數(shù)據(jù)比較，RYM和YM組在檢測過程中只在T1時間點有顯著性差異（P＜0.05）。RYMS和YMS組變化趨勢大體相近，均呈現(xiàn)先升高后下降趨勢，從T1到檢測結(jié)束，兩組數(shù)據(jù)與T0比較，差異顯著（P＜0.05）。同行數(shù)據(jù)比較，在T0時間點四組無顯著差異（P＞0.05），在T1-T4時間段RYMS與YMS組、RYM與YM組沒有顯著性差異（P＞0.05），但RYMS和YMS組分別與RYM、YM組比較，有差異顯著（P＜0.05）。具體結(jié)果見表1。

對血清中CH50含量檢測結(jié)果表明，同列數(shù)據(jù)比較，RYM和YM組在檢測過程中只在T1時間點有顯著性差異（P＜0.05）。RYMS和YMS組變化趨勢大體相近，均呈現(xiàn)先降低后恢復(fù)的趨勢，從T1到T3，兩組數(shù)據(jù)與T0比較，差異顯著（P＜0.05），到T4時間點時CH50恢復(fù)到麻醉前水平（P＞0.05）。同行數(shù)據(jù)比較，在T0、T1和T4時間點四組無顯著差異（P＞0.05），在T2-T3時間段RYMS與YMS組、RYM與YM組之間沒有顯著性差異（P＞0.05），但RYMS和YMS組分別與RYM、YM組比較，有差異顯著（P＜0.05）。具體結(jié)果見表2。

表1四組血清中CRP含量檢測結(jié)果（n=10，-X±SD，mg/L）

表2四組血清中CH50含量檢測結(jié)果（n=10，-X±SD，mg/L）

3討論

本研究在建立手術(shù)創(chuàng)傷模型方面選擇腸管吻合術(shù)，其為腹部外科手術(shù)中較為復(fù)雜的手術(shù)，術(shù)中創(chuàng)傷和術(shù)后疼痛較為明顯，可有效地激發(fā)應(yīng)激反應(yīng)，引起犬血清中CRP、CH50含量的改變（在本次試驗中也得到了驗證）。另外，采用該手術(shù)也可驗證乳化異氟醚復(fù)合制劑在小動物軟組織手術(shù)中的適用性。

體內(nèi)的CRP屬于急性時相反應(yīng)物質(zhì)（APR），是一種由肝臟合成的血漿蛋白，在正常狀態(tài)下其在體內(nèi)含量較低，當(dāng)動物機體受到傷害，即便是輕微的損傷也會引發(fā)血漿中CRP含量迅速升高。相關(guān)文獻研究表明，CRP含量與應(yīng)激反應(yīng)的程度成正比，是反映麻醉和手術(shù)應(yīng)激反應(yīng)的有效、可靠指標［3-4］。本次試驗結(jié)果顯示，乳化異氟醚復(fù)合麻醉與異氟醚吸入麻醉對CRP含量產(chǎn)生短時間的影響，在麻醉過程中可使其明顯升高，在麻醉后24 h，其含量恢復(fù)到麻醉前水平。在兩種麻醉方式下實施腸管吻合術(shù)，均可激發(fā)CRP顯著升高，其中在術(shù)后24 h升至最高，之后逐漸下降，在術(shù)后72 h時仍然顯著高于麻醉前水平。組間的比較表明兩種麻醉方式在同一時間點無明顯的差異，且在這兩種麻醉保障下進行的手術(shù)對CRP含量的影響也相似，無顯著性差異。

臨床麻醉及手術(shù)創(chuàng)傷均可造成動物的免疫功能抑制，多數(shù)學(xué)者認為這與麻醉及手術(shù)傷害引起的應(yīng)激反應(yīng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)改變有關(guān)。補體是一組存在于人和動物血清中的球蛋白，經(jīng)過活化后具有生物酶的活性，是免疫反應(yīng)過程中較為重要的效應(yīng)因子，在急性炎癥、組織損傷及麻醉過程中起著重要作用［5］。相關(guān)的研究表明，在臨床麻醉、手術(shù)創(chuàng)傷及術(shù)后疼痛之后補體有被激活的現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為產(chǎn)生補體激活產(chǎn)物及血清中補體的含量下降，其含量降低幅度與手術(shù)類型、創(chuàng)傷的程度成正比［6］。本次試驗結(jié)果顯示，乳化異氟醚復(fù)合麻醉與異氟醚吸入麻醉對CH50含量影響較為短暫且較為相似，在兩者的麻醉過程中可使CH50含量顯著下降，隨后逐漸上升，在麻醉后24 h恢復(fù)到麻醉前水平，之后一直保持在麻前水平。在這兩種麻醉保障下實施手術(shù)，均可引起CH50含量明顯降低，其中在術(shù)后48 h降至最低，之后逐漸恢復(fù)，在術(shù)后72 h時恢復(fù)至麻前水平。組間比較發(fā)現(xiàn)兩種麻醉方式在同一時間點無明顯的差異，乳化異氟醚復(fù)合麻醉對經(jīng)歷腸管吻合術(shù)犬血清中CH50含量的影響與異氟醚麻醉相似。

4結(jié)論

乳化異氟醚復(fù)合麻醉及麻醉下手術(shù)對犬血清中CRP、CH50含量的影響，與異氟醚相似，兩者無明顯的差異。

［1］馮秀晶，張建濤，姜勝，等.犬用乳化異氟醚復(fù)方麻醉劑的組方試驗［J］.中國獸醫(yī)雜志，2015，51（5）：65-67.

［2］李大鵬.乳化異氟醚復(fù)合制劑應(yīng)用于犬靜脈麻醉的效果觀察［D］.哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

［3］關(guān)開華，盧寒冬，梁安偉，等.不同麻醉方法及術(shù)后鎮(zhèn)痛對婦科手術(shù)患者C反應(yīng)蛋白及補體變化的影響［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，21（9）：89-91.

［4］李發(fā)明，陳紅，徐玉旭，等.深圳匯松寵物專用C反應(yīng)蛋白（CRP）在犬病臨床上的應(yīng)用探討［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2015，31（12）：58-60.

［5］唐協(xié)林，姚慶寧，夏祥國，等.補體C3、C4在家犬腦出血模型中的變化［J］.神經(jīng)損傷與功能重建，2014（3）：205-208.

［6］李鐵軍，蔡淑女，印春銘，等.不同濃度七氟烷聯(lián)合丙泊酚麻醉對小兒肌鈣蛋白I、C反應(yīng)蛋白以及補體變化的影響［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2015（5）：541-543.

S858.293+2

B

0529-6005（2016）08-0074-03

2016-03-25

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計劃項目（201510-224004）；黑龍江省博士后科研啟動金項目（LBH-Q14018）；東農(nóng)學(xué)者計劃“學(xué)術(shù)骨干”項目（518517）

胡學(xué)遠（1991-），男，碩士生，從事動物麻醉與鎮(zhèn)痛工作，E-mail：xueyuanhu@outlook.com

范宏剛，E-mail：fanhonggang2002@163.com