羅潤波,王剛,云旦平措,益西旺扎,索朗斯珠
(西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院,西藏林芝860000)
西藏林芝地區(qū)豬瘟流行的抗原及免疫抗體檢測
羅潤波,王剛,云旦平措,益西旺扎,索朗斯珠
(西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院,西藏林芝860000)
豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)感染引起的豬的急性、熱性、高度致死性傳染病,是嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為A類16種傳染病之一,我國亦將其列為一類傳染病,是發(fā)生最多、危害最大、流行最廣的動物傳染病之一。
按照農(nóng)業(yè)部國家動物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃和省屬要求,豬瘟免疫抗體檢測采用正向間接血凝試驗(yàn)(IHA)或者酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)2種方法[1-3],其中,ELISA應(yīng)用最廣。針對我國目前豬瘟的流行現(xiàn)狀及特點(diǎn)做好免疫監(jiān)測,保持豬群處于較高的群體免疫水平,堅(jiān)決淘汰CSFV隱性感染種豬,是豬場有效防控豬瘟的重要手段[4-7]。為了解林芝地區(qū)豬場豬群的豬瘟病毒感染情況和疫苗免疫狀況,筆者分別采用PCR技術(shù)和ELISA方法對豬場300頭份豬的組織樣品和800頭份血清樣品進(jìn)行了豬瘟病毒和豬瘟抗體的檢測,現(xiàn)報(bào)道如下。
1.1試驗(yàn)材料血清:隨機(jī)采集西藏林芝地區(qū)米林縣、墨脫縣、朗縣、察隅縣、工布江達(dá)縣5個(gè)縣的豬場和散養(yǎng)豬血清800頭份。
組織:隨機(jī)采集西藏林芝地區(qū)米林縣、墨脫縣、朗縣、察隅縣、工布江達(dá)縣5個(gè)縣的豬場和散養(yǎng)豬組織300頭份。
1.2試劑豬瘟病毒抗體(IgG)診斷試劑盒和豬瘟病毒抗原(CSFV-Ag)檢測試劑盒,購自深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司,批號:20140601。
1.3主要儀器隔水式恒溫培養(yǎng)箱,購自上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司,型號為為GNP-9050;酶標(biāo)分析儀,購自深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司,型號為RT6100;高速離心機(jī)centrifuge5804由德國
Eppendorf生產(chǎn);PCR儀my cycleTM、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)均由美國Bio-Rad生產(chǎn);移液器由德國Eppendorf生產(chǎn)。均由西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院高原動物疫病檢測中心實(shí)驗(yàn)室提供。
1.4方法
1.4.1ELISA法檢測豬瘟抗體對采集的全血樣本分離血清后,按照ELISA試劑盒診斷說明書中的方法規(guī)范操作。
1.4.2PCR法檢測豬瘟對采集的組織病料進(jìn)行處理后,按照豬瘟病毒抗原(CSFV Ag)定量檢測試劑盒說明書的要求規(guī)范操作。
1.5判定標(biāo)準(zhǔn)
1.5.1ELISA法判定標(biāo)準(zhǔn)臨界值=0.4,在酶標(biāo)儀上測各孔的OD值,試驗(yàn)成立的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.7,陰性對照孔的平均OD值必須<0.1;樣品OD值≥0.4判斷為陽性;樣品OD值<0.35時(shí)判斷為陰性;0.35到0.4之間為可疑。
1.5.2PCR法判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行PCR檢測,電泳檢測結(jié)果在271 bp處出現(xiàn)條帶判斷為陽性,反之判斷為陰性。
2.1豬瘟ELISA抗體檢測結(jié)果西藏林芝地區(qū)豬場和散養(yǎng)豬隨機(jī)采集的800份血清中CSF抗體陽性率達(dá)86%,其中米林縣陽性率為76%,墨脫縣陽性率為97%,朗縣陽性率88%,察隅縣陽性率為78%,工布江達(dá)縣為91%。結(jié)果表明,林芝地區(qū)5個(gè)縣抗體水平較高,免疫效果較好。
2.2豬瘟PCR檢測結(jié)果從林芝地區(qū)5個(gè)縣中隨機(jī)采集300份組織病料,按照說明書要求處理后進(jìn)行豬瘟病毒PCR檢測,300份樣品中只有2份樣品在271 bp處出現(xiàn)條帶(見圖1)。
3.1本次試驗(yàn)應(yīng)用ELISA法對西藏林芝地區(qū)米林、工布江達(dá)等5個(gè)縣的800頭份豬進(jìn)行了豬瘟抗體檢測,結(jié)果顯示,林芝地區(qū)豬場和散養(yǎng)豬中CSFV血清抗體陽性率達(dá)86%,其中米林縣為76%,墨脫縣為97%,朗縣為88%,察隅縣為78%,工布江達(dá)縣為91%。說明豬群抗體水平較高,免疫效果好,免疫工作做得較好。
圖1豬瘟PCR電泳圖
3.2利用PCR技術(shù)對西藏林芝地區(qū)米林、工布江達(dá)等5個(gè)縣的300頭份豬進(jìn)行了豬瘟病毒檢測,結(jié)果顯示,林芝地區(qū)豬場和散養(yǎng)豬中豬瘟抗原陽性率達(dá)0.7%,說明西藏林芝地區(qū)豬群中有少許豬瘟病例,存在暴發(fā)和擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn),要引起高度重視,加強(qiáng)日常檢疫與預(yù)防工作十分必要。
3.3定期開展免疫監(jiān)測,評價(jià)豬瘟免疫效果,建立適合本場的免疫程序,抗體不合格及時(shí)補(bǔ)免。淘汰帶毒種豬,培育健康的無豬瘟帶毒豬的種豬和后備種豬群。
3.4堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出、減少應(yīng)激;加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,改善生態(tài)環(huán)境,搞好綜合防疫,提高豬群的抵抗力。
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S858.28
B
0529-6005(2016)08-0054-02
2015-05-26
西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院“動物醫(yī)學(xué)學(xué)科建設(shè)”項(xiàng)目、“預(yù)防獸醫(yī)重點(diǎn)建設(shè)”項(xiàng)目
羅潤波(1991-),男,碩士生,從事動物疫病防治方面的研究工作,E-mail:626652016@qq.com
索朗斯珠,E-mail:xzslsz@163.com