HBV相關(guān)肝硬化結(jié)節(jié)癌變的MR增強(qiáng)特征與GPC-3、CD34表達(dá)的對(duì)應(yīng)性研究

張　琦　李宏軍　李云芳　張巖巖　袁星星　?！§o

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院放射科，北京 100069)

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· 臨床研究 ·

HBV相關(guān)肝硬化結(jié)節(jié)癌變的MR增強(qiáng)特征與GPC-3、CD34表達(dá)的對(duì)應(yīng)性研究

張琦李宏軍*李云芳張巖巖袁星星常靜

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院放射科，北京 100069)

目的探索乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)相關(guān)肝硬化結(jié)節(jié)癌變磁共振(magnetic resonance， MR)動(dòng)態(tài)增強(qiáng)特征與免疫組織化學(xué)標(biāo)志物磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC-3)及CD34表達(dá)量之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。方法收集44個(gè)乙型肝炎(以下簡稱乙肝)肝硬化患者中經(jīng)病理證實(shí)的47個(gè)肝硬化結(jié)節(jié)納入本研究，術(shù)前均行MR掃描，用軟件將動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描序列自動(dòng)生成時(shí)間-信號(hào)曲線，術(shù)后常規(guī)病理及免疫組織化學(xué)染色，觀察GPC-3和CD34表達(dá)。結(jié)果1) 在47個(gè)結(jié)節(jié)中，GPC-3在早期肝癌(early hepatocellular carcinoma, eHCC)，高級(jí)不典型增生結(jié)節(jié)(high grade dysplastic nodule，HGDN)，低級(jí)不典型增生結(jié)節(jié)(low grade dysplastic nodule，LGDN)各組中的陽性率分別為78.9%、26.1%、0%，CD34強(qiáng)陽性表達(dá)在eHCC、HGDN及LGDN中分別為78.9%、56.5%、0%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2)eHCC、HGDN、LGDN的MR動(dòng)態(tài)灌注時(shí)間-信號(hào)曲線特點(diǎn)分別傾向?yàn)槎干?、緩升型、平行型。GPC-3陽性的結(jié)節(jié)和陰性的結(jié)節(jié)兩者之間時(shí)間信號(hào)曲線差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CD34強(qiáng)陽性、弱陽性、陰性的eHCC之間時(shí)間-信號(hào)曲線差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論1)MR時(shí)間-信號(hào)曲線特點(diǎn)對(duì)eHCC及HGDN的鑒別診斷有一定的價(jià)值。2)GPC-3表達(dá)陽性具有提示結(jié)節(jié)良惡性的診斷價(jià)值，同時(shí)MR時(shí)間-信號(hào)曲線表現(xiàn)為陡升型。3)CD34表達(dá)量與MR增強(qiáng)時(shí)間-信號(hào)曲線呈正相關(guān)。

肝硬化；不典型增生結(jié)節(jié)；早期肝癌；磁共振成像；GPC-3；CD34

全球慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus， HBV)攜帶者約4億，亞太地區(qū)是全球HBV的高發(fā)區(qū)，在我國感染HBV的人群中有10%～20%五年內(nèi)將發(fā)展成肝硬化[1]，90%的原發(fā)性肝癌發(fā)生在肝炎、肝硬化的基礎(chǔ)上。肝癌是臨床常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病較為隱匿，診斷時(shí)常常已是中晚期，失去了最佳的治療時(shí)期，即使尚可手術(shù)切除，其5年生存率也不足10%[2]。隨著影像學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，越來越多的不典型增生結(jié)節(jié)及早期肝癌被監(jiān)測到，進(jìn)而行穿刺檢查和病理診斷，使肝癌的早期診斷和早期治療成為可能。從再生結(jié)節(jié)(regenerative nodular，RN)到不典型增生結(jié)節(jié)(dysplastic nodule，DN)、再到早期肝癌(early hepatocellular carcinoma, eHCC)，門靜脈供血逐漸減少，動(dòng)脈供血逐漸增加，磁共振(magnetic resonance, MR)的多期動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描能較直觀地顯示這一血供變化特點(diǎn)。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3，GPC-3)通過糖基磷脂酰肌醇錨定于細(xì)胞膜上，高表達(dá)于胎肝和肝癌組織，而正常肝組織無表達(dá)，被認(rèn)為是HCC診斷及靶向治療最有前景的生物標(biāo)志之一[3]。CD34主要位于肝竇內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞，其表達(dá)程度在一定程度上可反映肝病嚴(yán)重程度，并可作為微血管標(biāo)志，反映肝竇毛細(xì)血管化。本研究旨在觀察肝硬化結(jié)節(jié)多步演變的磁共振(magnetic resonance， MR)動(dòng)態(tài)增強(qiáng)特征與免疫組織化學(xué)標(biāo)志物GPC-3和CD34的表達(dá)量之間的關(guān)系，尋求更多生物指標(biāo)來提高肝癌的早期無創(chuàng)診斷符合率。

1　材料與方法

1.1臨床資料

本研究選取2012年10月至2014年12月期間至首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院擬診為乙型肝炎(以下簡稱乙肝)肝硬化及肝癌的患者120例，MR定期隨訪監(jiān)測至病灶經(jīng)手術(shù)切除、細(xì)針穿刺或者肝移植手術(shù)取得病理診斷結(jié)果。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)病理診斷不明確或者有爭議者，共4例。2)合并酒精性肝病及自身免疫肝病等彌漫性肝病的患者，共23例。3)病灶為進(jìn)展性肝癌或者肝癌直徑大于3 cm，共37例。4)病理證實(shí)為非HCC患者，共12例。最終44例患者共47個(gè)結(jié)節(jié)納入本研究，其中男33例，女11例，平均年齡57歲。其中15例肝移植離體標(biāo)本，另14例手術(shù)切除標(biāo)本，15例穿刺活檢標(biāo)本，經(jīng)病理證實(shí)為低級(jí)不典型增生結(jié)節(jié)(low grade dysplastic nodule，LGDN)、高級(jí)不典型增生結(jié)節(jié)(high grade dysplastic nodule，HGDN)或eHCC，共肝硬化結(jié)節(jié)47個(gè)，其中eHCC 19個(gè)，HGDN 23個(gè)，LGDN 5個(gè)(包含一個(gè)RN)。HE染色和免疫組織化學(xué)標(biāo)本均經(jīng)過甲醛固定包埋。

1.2病理檢查方法

肝臟穿刺或手術(shù)切除標(biāo)本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE染色、免疫組織化學(xué)(GPC-3、CD34、CD68、GPC-3、Ki67、P53、CK19)及網(wǎng)織紅細(xì)胞染色。由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生分別重新閱片，參照肝細(xì)胞腫瘤國際共識(shí)小組(International Consensus Group for Hepatocellular Neoplasia，ICGHN)2008年對(duì)肝硬化結(jié)節(jié)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3免疫組織化學(xué)染色

GPC-3和CD34抗體均采購自北京中杉生物技術(shù)開發(fā)有限公司。GPC-3：病灶切片中GPC-3染色占腫瘤細(xì)胞的0%～5%為陰性，6%～50%為局灶陽性，大于50%為彌漫陽性。CD34:彌漫性表達(dá)為強(qiáng)陽性，局灶性表達(dá)為弱陽性，僅匯管區(qū)或病灶周圍表達(dá)為陰性。

1.4MR設(shè)備及技術(shù)參數(shù)

MR掃描采用德國西門子公司的 Magnetom Trio a Tim System 3.0T超導(dǎo)型磁共振掃描儀，使用8通道體部相控陣線圈，檢查前禁食、水4～6 h，并進(jìn)行屏氣訓(xùn)練。行常規(guī)T2WI、T1WI同反相位平掃、DWI、三期動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描。增強(qiáng)掃描對(duì)比劑使用釓鋇葡胺(Gd-BOPTA)注射液(商品名：莫迪司，上海博萊科信誼藥業(yè)有限責(zé)任公司)。MR動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描：采用VIBE T1WI，TR 3.5 ms，TE 1.25 ms，激勵(lì)角 9°，層厚3～ 3.5 mm，層間距0.6～0.7 mm， FOV 380 mm× 285 mm，矩陣 320× 256。每次掃描時(shí)間為18～25 s (平均22.5 s)。分別于注藥前、注藥開始后17～ 19 s、35～40 s、 60～80 s、 180 s進(jìn)行預(yù)掃、動(dòng)脈早期、動(dòng)脈晚期 (門靜脈早期 )、門靜脈(晚)期、平衡期掃描。對(duì)比劑的用藥劑量 0.1 mmol/kg，注藥流率2 mL/s。所有序列掃描均從頭側(cè)至足側(cè)、背側(cè)至腹側(cè)掃描全部肝臟，掃描范圍一般為肝上緣至肝下緣，具體根據(jù)提示的病變部位進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，使病灶包入掃描范圍。

病灶位置選取紅色進(jìn)行標(biāo)記，遠(yuǎn)隔病灶的正常肝實(shí)質(zhì)選取綠色進(jìn)行標(biāo)記，腹主動(dòng)脈選取黃色進(jìn)行標(biāo)記，軟件自動(dòng)生成時(shí)間-信號(hào)強(qiáng)度曲線。

由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的高年資影像科醫(yī)生分別閱片，當(dāng)意見不一致時(shí)，進(jìn)行討論，以確定最終結(jié)果。47個(gè)病灶的分組情況詳見表1。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS16.0 for Windows進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。分類資料采用頻數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。等級(jí)資料采用頻數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)方法(Kruskal-Wallis方法或Mann-Whitney方法)。采用靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值描述抗體的診斷價(jià)值。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　47個(gè)病灶依據(jù)免疫組化表達(dá)情況的分組

2　結(jié)果

2.1病灶一般情況

乙肝肝硬化患者44例，經(jīng)MR檢測并且病理確診的結(jié)節(jié)共47個(gè)，其中eHCC 19個(gè)，HGDN 23個(gè)，LGDN 5個(gè)(其中包含一個(gè)RN，統(tǒng)計(jì)時(shí)歸到了LGDN組)，平均直徑約15 mm，最小約4 mm，最大約23 mm。72%的病灶位于肝右葉，病灶均為圓形或類圓形。

2.2病灶的時(shí)間-信號(hào)曲線特點(diǎn)及GPC-3和CD34的表達(dá)情況

LGDN組(圖1A-F)的時(shí)間-信號(hào)曲線與周圍肝實(shí)質(zhì)的相似，呈“平行型”，平均達(dá)峰時(shí)間為(3.150.26)min(圖1C)，GPC-3和CD34全部表達(dá)為陰性(如圖1E、F)。

HGDN組(圖2A-I)的時(shí)間-信號(hào)曲線在動(dòng)脈期、門脈期有14例稍高于周圍肝實(shí)質(zhì)，呈“緩升型”(圖2F)，3例含癌變病灶的HGDN，癌變部分的強(qiáng)化也可明顯高于周圍肝實(shí)質(zhì)，呈“陡升型”，另外6例未見明顯強(qiáng)化，呈“平行型”，平均達(dá)峰時(shí)間為(2.300.31)min。23個(gè)HGDN中6個(gè) GPC-3表達(dá)為局灶陽性(圖2H)，17個(gè)為GPC-3陰性；13個(gè)表達(dá)為CD34強(qiáng)陽性，4個(gè)表達(dá)為CD34弱陽性(圖2I)，6個(gè)為CD34陰性。

eHCC組(圖3A-I)的時(shí)間-信號(hào)曲線12例明顯強(qiáng)化，高于周圍肝實(shí)質(zhì)，呈“陡升型”(圖3F)，5例呈“緩升型”，2例呈“平行型”，平均達(dá)峰時(shí)間為(1.570.29)min。19個(gè)eHCC中，10個(gè)表達(dá)為GPC-3陽性(圖3H)，5個(gè)為局灶陽性，4個(gè)為陰性；15個(gè)表達(dá)為CD34強(qiáng)陽性(圖3I)，2個(gè)表達(dá)為弱陽性，2個(gè)為陰性。

圖1　LGDN的MR增強(qiáng)特征和GPC-3、CD34的對(duì)照

The nodule is LGDN (A-F):the nodule (14mm) shows hypointense on T2-weighted images (A,white arrow),and the ROI(region of interest )of the lesion has been marked in red,the ROI of the hepatic parenchyma was marked in green,and the ROI of abdominal aorta is marked in yellow(B),the time-signal of the lesion does not show arterial enhancement, which is defined as parallel type(C).Histology(D-F): the nodule shows a slight increase in cellularity with moderate cytologic atypia, indicating a low grade dysplastic nodule(D;HE staining, 10×),GPC-3 and CD34 show negative expression(E,F;Immunohistochemistry staining, 10×). LGDN:low grade dysplastic nodule; MR:magnetic resonance；GPC-3：glypican-3.

圖2　HGDN的MR增強(qiáng)特征和GPC-3、CD34的對(duì)照

The nodule is HGDN (A-I):the nodule (15mm) shows slightly hyperintense on T2-weighted images (A, white arrow), a slight arterial enhancement (B), and isointense on delayed phase (C) slightly hyperintense on DWI(D). The marking method is the same as the Fig.1B(E),the time-signal of the lesion shows a slight arterial enhancement, which is defined as slow rise type(F).Histology(G-I): the lesion shows an evident increase in cellularity with marked cytologic atypia and glandular formation, suggesting a high-grade dysplastic nodule (G；HE staining, 10×),GPC-3 and CD34 show weak positive expression(H,I;Immunohistochemistry staining, 10×). HGDN:high grade dysplastic nodule; MR:magnetic resonance；GPC-3：glypican-3.

eHCC、HGDN、LGDN各組間曲線形態(tài)，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)，見表2。GPC-3的表達(dá)在各組中的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)，詳見表3。CD34的表達(dá)在各組中的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)，詳見表4。

2.3GPC-3和CD34在鑒別eHCC與DN時(shí)的診斷價(jià)值比較

表5為GPC-3和CD34分別以及二者共同在eHCC及癌前病變DN的鑒別診斷價(jià)值。雖然兩者聯(lián)合的特異度(82.1%)比起單個(gè)標(biāo)志物有所提高，GPC-3為66.7%，CD34為53.5%，但是靈敏度及陽性預(yù)測值(positive predictive value,PPV)及陰性預(yù)測值(negative predictive value,NPP)都未見明顯提高。

表2　eHCC、HGDN及LGDN各組時(shí)間-信號(hào)曲線特點(diǎn)比較

表3　eHCC、HGDN及LGDN各組中GPC-3的表達(dá)比較

表4　eHCC，HGDN及LGDN各組中CD34的表達(dá)比較

圖3　eHCC的MR增強(qiáng)特征和GPC-3、CD34的對(duì)照

The nodule was early well-differentiated HCC (A-I):the nodule (11mm) shows slightly hyperintense on T2-weighted images (A, white arrow), a slight arterial enhancement (B), isointense on delayed phase (C) and slightly hyperintense on DWI(D). The marking method is as same as the Fig.1B(E),the time-signal of the lesion shows a slight arterial enhancement, which is defined as rapid rise type(F).Histology(G-I): the nodule shows HCC transformation, with prevalence of an acinar pseudoglandular pattern (G;HE staining 10×),GPC-3 and CD34 show strong positive expression(H,I;Immunohistochemistry staining, 10×). GPC-3：glypican-3;eHCC:early hepatocellular carcinoma;MR:magnetic resonance.

表5　GPC-3和CD34在鑒別eHCC與DN時(shí)的比較

2.4各組病灶的時(shí)間-信號(hào)曲線形態(tài)及與GPC-3和CD34之間的相關(guān)性

依據(jù)GPC-3表達(dá)情況分組的病灶之間的時(shí)間-信號(hào)曲線特點(diǎn)比較見表6。GroupA1(GPC-3陽性的eHCC)和GroupA2(GPC-3陰性的eHCC)兩者之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，GroupB1(GPC-3陽性的HGDN)和GroupB2(GPC-3陰性的HGDN)兩者之間比較差異不明顯(P=0.036)。然而把本組中所有GPC-3陽性的結(jié)節(jié)歸為一組即Group(A1+B1)，GPC-3陰性的結(jié)節(jié)為一組即Group(A2+B2+E)，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。

用CD34分組的病灶之間的曲線形態(tài)比較見表7。GroupC1(CD34強(qiáng)陽性的eHCC)，GroupC2(CD34弱陽性的eHCC),GroupC3(CD34陰性的eHCC)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005)。按照相同方式分組的HGDN，即GroupD1、D2、D3之間差異同樣也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。

表6　以GPC-3表達(dá)情況分組的各組病灶時(shí)間-信號(hào)曲線特點(diǎn)的比較

表7　以CD34表達(dá)情況分組的各組病灶時(shí)間-信號(hào)曲線特點(diǎn)的比較

3　討論

3.1CD34在肝硬化結(jié)節(jié)多步癌變中的表達(dá)

RN和周圍正常肝實(shí)質(zhì)血供相似，由門靜脈(75%～80%)和肝動(dòng)脈(20%～25%)雙重供血，從LGDN到HGDN到早期肝癌，門靜脈和肝動(dòng)脈供血都逐漸減少，同時(shí)腫瘤異形動(dòng)脈供血增多，形成典型HCC后幾乎全部由腫瘤異形動(dòng)脈供血[4]。CD34為跨膜磷酸糖蛋白，唾液酸表面分子家族成員之一，是肝癌組織中新生血竇內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物，反映肝竇的毛細(xì)血管化。腫瘤組織中的新生微血管呈CD34陽性表達(dá)，HCC組織CD34染色顯示其具有微血管豐富的特點(diǎn)。Nakamura[5]等報(bào)道肝竇毛細(xì)血管化過程開始于肝癌發(fā)生的早期，并且隨著腫瘤發(fā)生階段的進(jìn)展，肝竇毛細(xì)血管化程度不斷增強(qiáng)。在HCC中，CD34一般呈彌漫表達(dá)，DN中常常是局灶分布，但是在一些HGDN中也可呈彌漫分布，毛細(xì)血管化常在異形小動(dòng)脈旁被發(fā)現(xiàn)，而在肝硬化組織中，僅在匯管區(qū)周圍分布[6]。在Enan 等報(bào)道[7]中，CD34在HCC中的強(qiáng)陽性表達(dá)率可達(dá)到95%，在良性結(jié)節(jié)及肝臟局灶性結(jié)節(jié)增生(focal nodular hyperplasia,FNH)及癌旁組織中表達(dá)均為陰性或散在灶性。Saad等[8]發(fā)現(xiàn)，在良性增生或者不典型增生結(jié)節(jié)病灶中，CD34 染色在匯管區(qū)或者病灶邊緣表達(dá)，本組研究中也有類似發(fā)現(xiàn)，但是在HGDN的癌變區(qū)，血竇也常常表現(xiàn)為彌漫血管化，CD34呈強(qiáng)陽性表現(xiàn)。在本研究中，CD34在eHCC、HGDN、LGDN各組間的表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究發(fā)現(xiàn)盡管CD34的特異性有限，但是仍然可以反映肝硬化結(jié)節(jié)的嚴(yán)重程度，可以聯(lián)合其他標(biāo)志物作為鑒別HCC與其他肝結(jié)節(jié)性病變的較為有用的指標(biāo)。

3.2GPC-3在肝硬化結(jié)節(jié)多步癌變中的表達(dá)

GPC-3是一種癌胚蛋白，可參與肝癌細(xì)胞的增生、分化、黏附、遷移等過程。有研究[9]結(jié)果顯示，從不典型增生結(jié)節(jié)多步演變到肝癌的過程中,GPC-3的表達(dá)明顯增強(qiáng),而且研究顯示不管陽性細(xì)胞所占的百分比如何，肝硬化組織中的小灶病變中一旦出現(xiàn)GPC-3陽性則強(qiáng)烈提示為肝癌。在本組研究中，GPC-3的表達(dá)也呈現(xiàn)了這一趨勢(shì)，所有的LGDN的GPC-3表達(dá)陰性，該結(jié)果與Libbrecht[10]等研究者之前的報(bào)道一致，說明LGDN和RN有著基本相似的病理基礎(chǔ)，尚未發(fā)現(xiàn)有明顯異型性。HGDN中GPC-3表達(dá)陽性率為26.1%和以往的一些報(bào)道(6%～22%)[11-12]存在差異，在Yamauchi等[13]的報(bào)道中，HGDN中GPC-3的陽性率甚至可高達(dá)75%，他認(rèn)為考慮到基于病理形態(tài)學(xué)上早期高分化HCC和HGDN差異性較小，以及其他取材和人為判斷因素存在差異都將會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本研究入組HGDN中GPC-3染色基本呈局灶性，少于腫瘤細(xì)胞的50%，若GPC-3彌漫表達(dá)時(shí)診斷則更傾向于早期高分化HCC。在杜經(jīng)麗等[14]的研究報(bào)道中，GPC-3在進(jìn)展期HCC中的陽性表達(dá)率為92%，在高分化HCC中為66．7%，提示GPC-3在HCC中的表達(dá)與分化有關(guān)，分化越差，陽性表達(dá)率越高，Yao等[15]的研究也表明GPC-3對(duì)高分化HCC有很好的鑒別作用。在本研究中，GPC-3在19例早期高分化HCC中有15例呈局灶或彌散的胞質(zhì)染色，陽性表達(dá)率為78.9%，高于HGDN及LGDN,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示GPC-3免疫組織化學(xué)染色對(duì)于形態(tài)學(xué)難以鑒別的高分化HCC和不典型增生結(jié)節(jié)及良性結(jié)節(jié)的組織病理診斷有提示意義，可以作為肝癌早期診斷及高分化的標(biāo)志物。

3.3GPC-3與CD34聯(lián)合研究

目前研究將GPC-3和CD34聯(lián)合起來對(duì)肝硬化結(jié)節(jié)及肝癌進(jìn)行早期診斷研究，暢俊平等[16]發(fā)現(xiàn)肝癌組織中GPC-3陽性強(qiáng)度與CD34的密度一致，GPC-3高表達(dá)的病例，CD34的毛細(xì)血管密度也高，Enan等[7]將GPC-3和CD34聯(lián)合研究后發(fā)現(xiàn)，幾乎所有GPC-3表達(dá)陽性的HCC同時(shí)CD34也表現(xiàn)為彌漫陽性，并且在鑒別HCC和DN上，雖然敏感度降低(82%)，但是特異度和陽性正確率都接近100%，比單用GPC-3或CD34時(shí)提高顯著。本組研究與之前的報(bào)道[7，16]存在差異，但是在eHCC中，GPC-3的陽性表達(dá)和CD34的強(qiáng)陽性分布一致，比起單一指標(biāo)，僅特異度顯著提高為82.1%(GPC-3為66.7%，CD34為53.5%)，其余并未有明顯變化甚至有所降低，這可能與選取入組的HCC標(biāo)本的差異有關(guān)。

3.4各組病灶的時(shí)間-信號(hào)曲線形態(tài)及與GPC-3和CD34之間的相關(guān)性

MR聯(lián)合肝特異性造影劑進(jìn)行的三期動(dòng)態(tài)掃描可以較為敏感地觀察肝硬化結(jié)節(jié)的血供變化。中低分化HCC會(huì)呈現(xiàn)出典型的“快進(jìn)快出”表現(xiàn)，而早期高分化HCC和部分HGDN的血供沒有完全動(dòng)脈異形化，增強(qiáng)表現(xiàn)有較多重疊，動(dòng)脈期可表現(xiàn)出輕度強(qiáng)化，門脈期或延遲期呈等或者低信號(hào)，而LGDN及RN因血供與周圍肝實(shí)質(zhì)相似一般不會(huì)有動(dòng)脈期增強(qiáng)的表現(xiàn)[17]。本組實(shí)驗(yàn)用時(shí)間-信號(hào)強(qiáng)度曲線來描述不典型結(jié)節(jié)在動(dòng)脈期灌注特點(diǎn)，可表現(xiàn)為3種形式，即動(dòng)脈期明顯增強(qiáng)時(shí)曲線呈“陡升型”(病灶感興趣區(qū)強(qiáng)化程度明顯大于肝實(shí)質(zhì)且達(dá)峰時(shí)間短)，輕度強(qiáng)化時(shí)呈“緩升型”(病灶感興趣區(qū)強(qiáng)化程度稍高于肝實(shí)質(zhì))，不強(qiáng)化時(shí)呈“平行型”(病灶感興趣區(qū)強(qiáng)化程度及達(dá)峰時(shí)間和周圍肝實(shí)質(zhì)相似)，研究入組中eHCC、HGDN、LGDN中陡升型所占百分比分別為63.2%、13%、0，緩升型各組所占比例分別為26.3%、60.9%、0，平行型為0、0、100%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

eHCC中GPC-3陽性的病灶和陰性病灶之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，HGDN中差異不顯著， eHCC和HGDN之間的GPC-3陽性和陰性表達(dá)與MR掃描動(dòng)脈期的灌注差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示動(dòng)脈期結(jié)節(jié)明顯異常強(qiáng)化則考慮偏向惡性，時(shí)間-信號(hào)曲線表現(xiàn)為陡升型。CD34是新生內(nèi)皮血管標(biāo)志物，本組研究中發(fā)現(xiàn)其表達(dá)特點(diǎn)和動(dòng)脈期強(qiáng)化相一致，即CD34彌漫表達(dá)時(shí)對(duì)應(yīng)MR表現(xiàn)則傾向于明顯異常強(qiáng)化，CD34呈局灶性表達(dá)的則MR表現(xiàn)大多呈輕度異常強(qiáng)化，CD34陰性表達(dá)的則MR表現(xiàn)基本上沒有異常強(qiáng)化，分別對(duì)應(yīng)于時(shí)間-信號(hào)強(qiáng)度曲線上的陡升型、緩升型及平行型，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究的不足之處為：①入組病例較少，尤其是在LGDN階段入組病例少，可能導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)偏倚，需進(jìn)一步加大樣本量來求證。②入組結(jié)節(jié)平均直徑較小，穿刺難度大，盡管是多點(diǎn)穿刺，假陽性率較高，病灶切除以及肝移植的病理結(jié)果較為準(zhǔn)確，應(yīng)盡量選取非穿刺的病理標(biāo)本。③本實(shí)驗(yàn)為回顧性研究，入組的患者可能存在選擇性偏差。④由于HGDN和早期高分化HCC在病理診斷上會(huì)存在模糊點(diǎn)及重疊表現(xiàn)，因此也有可能造成偏差。⑤在繪制時(shí)間-信號(hào)強(qiáng)度曲線時(shí)感興趣區(qū)的選擇也不可避免存在主觀傾向。

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編輯陳瑞芳

， E-mail：lihongjun00113@126.com

MR enhancement features of multistep hepatocarcinogenesis in HBV-related cirrhotic livers：correlation with GPC-3 and CD34

Zhang Qi, Li Hongjun*, Li Yunfang, Zhang Yanyan, Yuan Xingxing, Chang Jing

(DepartmentofRadiology,BeijingYouanHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China)

ObjectiveTo study the correlation between MR(magnetic resonance) enhancement features and GPC-3 (glypican-3) and CD34 expression in hepatic B Virus (HBV)-related liver cirrhosis nodules. MethodsThis retrospective study collected 47 pathology proven nodules in 44 HBV-related liver cirrhosis patients, who underwent MRI and made the time-signal curve of dynamic enhancement, and we also evaluated the immunohistochemical biomarkers levels of GPC-3 and CD34. Results1) In the 47 nodules, GPC-3 positive rate in early hepatocellular carcinoma (eHCC), high grade dysplastic nodule (HGDN), low grade dysplastic nodule(LGDN) were 78.9%, 26.1% and 0%, respectively (P=0.000), CD34 positive rates were respectively 78.9%， 56.5%, 0%, and the difference was statistically significant (P=0.005). 2) The MR time-signal features at different stage of nodules, GPC-3 positive and negative nodules, CD34 strongly positive and weakly positive and negative nodules, were statistically significant(P<0.05). Conclusion1) MR time-signal curve has a certain differential diagnostic value for early stage of HCC. 2) GPC-3 is a highly specific biomarker for the malignance, while MR time-signal curve inclined to show rapid rise type. 3) CD34 expression was positively correlated with MR time-signal curve.

liver cirrhosis; dysplastic nodules; early hepatocellular carcinoma; magnetic resonance imaging; GPC-3; CD34

北京市醫(yī)院管理局重點(diǎn)醫(yī)學(xué)專業(yè)發(fā)展計(jì)劃(ZYLX201511)。This study was supported by Beijing Municipal Administration of Hostpitals Clinical Development of Special Funding (ZYLX201511).

時(shí)間：2016-10-1610∶55

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.R.20161016.1055.014.html

10.3969/j.issn.1006-7795.2016.05.022]

R 445.2；R 575.2

2016-06-10)