多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合前列腺特異性抗原檢測(cè)在前列腺癌診斷中的價(jià)值

翟玉普 閆成全

【摘要】目的：探討多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合前列腺特異性抗原檢測(cè)在前列腺癌診斷中的臨床價(jià)值。方法：選取我院2013年4月到2014年9月的400例血清標(biāo)本。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)所有患者的血清前列腺特異性抗原水平，檢測(cè)抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基?；o酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2的水平。對(duì)各個(gè)腫瘤標(biāo)志物在前列腺癌患者的血清特異性、敏感性、陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行計(jì)算。隨機(jī)選取抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基?；o酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因的陽(yáng)性表達(dá)血清，采用蛋白質(zhì)印跡方法驗(yàn)證。采用Luminex液相芯片法聯(lián)合前列腺特異性抗原檢測(cè)和抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基酰基輔酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因進(jìn)行檢測(cè)所有的血清標(biāo)本。結(jié)果：400例測(cè)試者的血清前列腺特異性抗原檢測(cè)水平：256例<4μg/L，91例4～10μg/L，53例>10μg/L。4種腫瘤標(biāo)志物在150例前列腺癌患者血清中表達(dá)陽(yáng)性，抗原家族成員1b為69例（46.0%）、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2 52例（34.7%）、α甲基?；o酶A消旋酶41例（27.3%）、蛋白激酶A錨定蛋白4 65例（43.3%）。4種標(biāo)志物聯(lián)合前列腺特異性抗原檢測(cè)的曲線下面積為0.878；單一前列腺特異性抗原檢測(cè)的敏感性為61.0%、特異性分別為45.1%，聯(lián)合檢測(cè)的敏感性為81.0%、特異性分別為83.1%。結(jié)論：相對(duì)于較為單一的前列腺特異性抗原檢測(cè)，抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基酰基輔酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2聯(lián)合前列腺特異性抗原檢測(cè)，可以顯著增強(qiáng)前列腺癌診斷的特異性和敏感性，聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值非常高，具有臨床價(jià)值意義，可以大力推廣。

【關(guān)鍵詞】腫瘤標(biāo)志物；前列腺特異性抗原；前列腺癌

Multiple tumor markers and prostate specific antigen detection in the diagnosis of prostate cancerZHAI Yupu1， YAN Chengquan2△. 1. Surgery Department， Fengnan District Traditional Chinese Medicine Hospital， Tangshan 063000， Hebei， China； 2. Urology Department， Tangshan Gongren Hospital， Tangshan 063000， Hebei， China

【Abstract】Objectives： To discuss the clinical value of joint prostate specific antigen detection and multiple tumor markers in the diagnosis of prostate cancer. Methods：400 cases of serum specimens in our hospital from April 2013 to September 2014 were chosen， and enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the serum prostate specific antigen levels， levels of four kinds of tumor markers i.e. antigen 1b， protein kinase A anchor protein 4， alpha methyl acyl coenzyme A racemase and synovial sarcoma breaking point x gene level 2. The specificity， sensitivity and positive expression rate of each tumor marker in the serum of patients with prostate cancer was calculated and the positive expressed serum was randomly chosen to validate through protein imprinting method. Luminex liquid chip method combined column gland specific antigen detection and members of the family of antigen 1 b， protein kinase A anchor protein 4， alpha methyl acyl coenzyme A racemase， synovial sarcoma breaking point x gene testing was adopted to test all serum samples. Results：In terms of serum prostate specific antigen levels： 256 cases < 4 mug/L， 91 cases between 4-10 mu g/L and 53 cases > 10 mu g/L. Four kinds of tumor markers had positively expression in serum of 150 patients， members of the family of antigen 1 b in 69 cases （46.0%）， synovial sarcoma breaking point x gene 2 in 52 cases （34.7%）， alpha methyl acyl coenzyme A racemase in 41 cases （27.3%） and protein kinase A anchor protein 4 in 65 cases （43.3%）. Area under the curve of four markers joint prostate specific antigen detection was 0.878. The sensitivity and specificity of single prostate specific antigen detection was 61.0% and 45.1%， while that of joint detection was 81.0% and 83.1% respectively. Conclusions： Relative to the prostate specific antigen detection， joint detection can significantly enhance the specificity and sensitivity of the diagnosis of prostate cancer， which should be promoted.

【Key words】Multiple tumor markers； Prostate specific antigen； Prostate cancer

【中圖分類號(hào)】R737.25【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

在現(xiàn)代臨床研究治療中，只是在前列腺癌患者血清中表達(dá)的腫瘤相關(guān)抗原就是前列腺癌相關(guān)抗原，前列腺癌相關(guān)抗原一般不在健康人群或者是良性前列腺疾病患者的血清中進(jìn)行表達(dá)[1]。權(quán)威資料顯示，美國(guó)學(xué)者采用美國(guó)人群血清得以篩選出食管鱗狀細(xì)胞癌抗原、X抗原家族成員1b、晶狀體上皮源性生長(zhǎng)因子、α甲基?；o酶A消旋酶、蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2等前列腺癌相關(guān)抗原在前列腺癌患者的血清中具有高表達(dá)，采用實(shí)驗(yàn)證明和單一的前列腺特異性抗原檢測(cè)相比較，前列腺特異性抗原檢測(cè)聯(lián)合以上食管鱗狀細(xì)胞癌抗原、X抗原家族成員1b、晶狀體上皮源性生長(zhǎng)因子、α甲基?；o酶A消旋酶、蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2等等前列腺癌相關(guān)抗原可以顯著增強(qiáng)美國(guó)人群前列腺癌檢測(cè)的特異性和敏感性[2-4]。我院依據(jù)國(guó)外的研究資料[5]結(jié)合前期的研究，在上述的6種前列腺癌相關(guān)抗原以及蛋白激酶A錨定蛋白4、高遷移率族蛋白B1、癌胚抗原等人群的血清表達(dá)的基礎(chǔ)之上，更加一步的篩選出抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基?；o酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2等4種腫瘤標(biāo)志物來(lái)作為前列腺癌相關(guān)抗原的新組合，探討抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基酰基輔酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2和前列腺特異性抗原檢測(cè)前列腺癌診斷特異性和敏感性等方面的臨床價(jià)值。

1對(duì)象和方法

1.1研究對(duì)象

選取我院2013年4月到2014年9月的400例血清標(biāo)本。本次實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)經(jīng)過(guò)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有人都已經(jīng)簽署知情同意書(shū)，通過(guò)肛門指診、影像學(xué)檢查（經(jīng)直腸超聲、CT、MRI）、血清學(xué)檢查（前列腺特異性抗原，PSA）和組織病理學(xué)檢查等方法，對(duì)400例血清標(biāo)本進(jìn)行診斷，根據(jù)分為三組，即前列腺癌組、前列腺增生組、健康組。其中，在我院接受治療的150例前列腺癌患者，年齡為45～83歲，平均年齡為（69±2.3）歲，本組患者都經(jīng)過(guò)前列腺穿刺活檢得以確診，并且沒(méi)有進(jìn)行手術(shù)治療。前列腺增生患者108例，年齡為55～87歲，平均年齡為（70±2.4）歲，本組患者都經(jīng)過(guò)臨床診斷得以確診，并且沒(méi)有進(jìn)行手術(shù)治療。健康男性患者142例，年齡為24～51歲，平均年齡為（39±1.6）歲，本組患者都經(jīng)過(guò)臨床診斷，沒(méi)有前列腺相關(guān)疾病且都沒(méi)有腫瘤。所有患者年齡和病程以及病理無(wú)明顯差異，不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），因此具有可比性。

1.2檢測(cè)儀器和試劑

抗原家族成員1b（FS-Kb-0312）、蛋白激酶A錨定蛋白4（Anti-AKAP6）、α甲基?；o酶A消旋酶（Ab-00754）、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2的試劑都購(gòu)買自美國(guó)三塔古馳公司，前列腺特異性抗原檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Anogen公司，Human prostate specific antigen， PSA ELISA Kit，96T/48T），少部分的Luminex液相芯片微球（中國(guó)無(wú)錫伊琳生物技術(shù)公司，Luminex 200），還有一部分的Luminex液相芯片微球以及Luminex液相芯片試劑盒（美國(guó)三塔古馳公司，Luminex 100）[6，7]。

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基酰基輔酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2和前列腺特異性抗原檢測(cè)400例血清標(biāo)本中的表達(dá)水平。以96孔板采用1：1000濃度包被抗體。進(jìn)行洗版后加入酶標(biāo)板穩(wěn)定液200μg，放置37℃溫度下60min。將孔內(nèi)的液體丟棄，每個(gè)孔內(nèi)注入1：5稀釋的血清樣本，放置37℃溫度下90min。洗板后加入羊抗兔lgG抗體，放置37℃溫度下60min。洗板后加入終止液和顯色液，最后于酶標(biāo)儀器上進(jìn)行讀數(shù)，以健康人群95%的數(shù)據(jù)來(lái)確定抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基?；o酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2的正常值的范圍，血清特異性、敏感性、陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行計(jì)算[8]。

隨機(jī)選取抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基?；o酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因的陽(yáng)性表達(dá)血清，采用蛋白質(zhì)印跡方法驗(yàn)證[9]。對(duì)陽(yáng)性血清標(biāo)本采用1：5的濃度進(jìn)行稀釋，采用電泳進(jìn)行分離和轉(zhuǎn)膜，羊抗兔lgG抗體進(jìn)行單克隆抗體孵育，對(duì)帶辣根的過(guò)氧化物酶的羊抗兔lgG抗體進(jìn)行再次孵育，采用陰性表達(dá)血清來(lái)作為參照[10，11]。采用Luminex液相芯片法聯(lián)合列腺特異性抗原檢測(cè)和抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基酰基輔酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2進(jìn)行檢測(cè)所有的血清標(biāo)本[11]。并對(duì)三組癌胚抗原（CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、細(xì)胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）水平進(jìn)行檢測(cè)和比較。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次研究的400例血清標(biāo)本的所有數(shù)據(jù)以及研究所得資料均采用SPSS18.0數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行處理分析，其中計(jì)量數(shù)據(jù)資料采用t進(jìn)行檢驗(yàn)，記錄方式為（±s），計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)資料采用卡方進(jìn)行檢驗(yàn)，若P<0.05，數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1400例測(cè)試者的血清前列腺特異性抗原檢測(cè)水平分析

經(jīng)過(guò)檢測(cè)，256例<4μg/L，91例處于4～10μg/L，53例>10μg/L。4種腫瘤標(biāo)志物在150例前列腺癌患者血清中表達(dá)陽(yáng)性，抗原家族成員1b為69例（46.0%）、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因2 52例（34.7%）、α甲基?；o酶A消旋酶41例（27.3%）、蛋白激酶A錨定蛋白4 65例（43.3%）。4種標(biāo)志物聯(lián)合前列腺特異性抗原檢測(cè)的曲線下面積為0.878；單一前列腺特異性抗原檢測(cè)的敏感性為61.0%、特異性分別為45.1%，聯(lián)合檢測(cè)的敏感性為81.0%、特異性分別為83.1%。

2.2三組患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較

經(jīng)過(guò)方差分析，前列腺癌組、前列腺增生組、健康組三組之間血清腫瘤標(biāo)志物水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

3討論

前列腺癌作為男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，在全球癌癥發(fā)病率中居第5位，根據(jù)WHO流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，前列腺癌在男性惡性腫瘤中占男性全部癌癥發(fā)病例數(shù)的14%，在世界范圍內(nèi)分布具有顯著性差異，其發(fā)病率高地區(qū)約為低發(fā)病地區(qū)的20倍。我國(guó)是前列腺癌的發(fā)病率和死亡率較低的國(guó)家之一，但前列腺癌在我國(guó)男性癌癥發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)，近十年來(lái)，我國(guó)年均增加12%左右患者，這種趨勢(shì)持續(xù)10年下去會(huì)超過(guò)膀胱癌發(fā)病率，成為嚴(yán)重影響我國(guó)男性泌尿系統(tǒng)的重要疾病，應(yīng)引起充分重視，提高治療療效。雖然我國(guó)現(xiàn)在前列腺癌發(fā)病率和西方歐美國(guó)家比起來(lái)尚具有一定差距，但應(yīng)在有效范圍內(nèi)引起足夠重視，盡量做到二級(jí)預(yù)防水平，即早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。臨床研究治療中，被大范圍接受的前列腺癌常規(guī)的檢測(cè)項(xiàng)目就是前列腺特異性抗原檢測(cè)[12]。對(duì)男性人群進(jìn)行前列腺特異性抗原檢測(cè)的目的是為了可以早發(fā)現(xiàn)患者是否為前列腺癌，增強(qiáng)前列腺癌的診斷率，達(dá)到降低病死率的作用[13]。前列腺相關(guān)抗原是當(dāng)下研究前列腺的重點(diǎn)項(xiàng)目[14]。和傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法對(duì)比，Luminex檢測(cè)技術(shù)敏感性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、具有重復(fù)性，并且檢測(cè)的血清也比較少[15]。

總的來(lái)說(shuō)，相對(duì)于較為單一的前列腺特異性抗原檢測(cè)，抗原家族成員1b、蛋白激酶A錨定蛋白4、α甲基?；o酶A消旋酶、滑膜肉瘤x斷裂點(diǎn)基因聯(lián)合前列腺特異性抗原檢測(cè)，可以顯著增強(qiáng)前列腺癌診斷的特異性和敏感性，聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值非常高，且同時(shí)檢測(cè)血清CEA、NSE、CYFRA21-1 具有較高的敏感性和特異性，具有臨床價(jià)值意義，可以大力推廣。

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