普洱茶茶褐素的分離研究

王天祿,杜麗平,劉　艷,馬立娟,肖冬光

(天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院,天津 300457)

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普洱茶茶褐素的分離研究

王天祿,杜麗平*,劉艷,馬立娟,肖冬光

(天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院,天津 300457)

為了了解普洱茶茶褐素的組成,對(duì)從普洱茶中提取的茶褐素進(jìn)行了分離。通過(guò)比較不同樹(shù)脂對(duì)茶褐素的吸附與解吸能力,選擇AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)普洱茶茶褐素進(jìn)行分離,得到TBsP1和TBsP2兩個(gè)組分;進(jìn)一步利用DEAE-52纖維素柱對(duì)TBsP1組分進(jìn)行分離,得到6個(gè)組分;對(duì)茶褐素組分TBsP1、TBsP2以及TBsP1分離得到的6個(gè)組分的總糖、總酚和蛋白質(zhì)的含量進(jìn)行了分析,并進(jìn)一步對(duì)各組分的單糖組成進(jìn)行了分析。結(jié)果表明:不同組分的茶褐素其總糖、總酚和蛋白質(zhì)的含量有一定的區(qū)別,TBsP1分離得到的4個(gè)主要組分單糖組成相似,含量不同,與從普洱茶生產(chǎn)原料曬青毛茶中提取的水溶性色素的單糖組成和含量有較大的差異。

普洱茶,茶褐素,AB-8大孔樹(shù)脂,DEAE-52,單糖組成

普洱茶是我國(guó)特有的,采用云南大葉種曬青毛茶經(jīng)渥堆發(fā)酵制成,渥堆發(fā)酵過(guò)程中,茶多酚在微生物作用及濕熱作用下被氧化成茶黃素、茶紅素,茶黃素和茶紅素進(jìn)一步氧化聚合[1],并結(jié)合多糖、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)[2]等化合物形成茶褐素。茶褐素能溶于水而不溶于乙酸乙酯和正丁醇,是一類十分復(fù)雜的化合物,具有抗癌[3]、減肥降脂[4]、抗疲勞[5]等活性功能,化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)有待探明。

目前關(guān)于茶黃素的研究最為深入,已制備得到多種茶黃素單體[6],茶紅素的研究也取得一定進(jìn)展[7],茶褐素則由于其組成、結(jié)構(gòu)復(fù)雜,極性很大,分離純化的難度高,其研究進(jìn)展緩慢。譚超[8]等利用原子力顯微鏡對(duì)不同分子量的茶褐素進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)不同分子量的茶褐素粒子形貌并不均一。楊大鵬[9]利用硅膠層析對(duì)茶褐素進(jìn)行分離,發(fā)現(xiàn)茶褐素為多羥基物質(zhì),含有烷基、羧基及苯環(huán),主要的糖單位為葡萄糖。楊新河[10]等利用sephadex-LH20對(duì)茶褐素進(jìn)行分級(jí),得到六個(gè)級(jí)分,這些級(jí)分由兒茶素以外的多酚、蛋白質(zhì)及多糖組成,但是各組分中總酚、總糖和蛋白質(zhì)含量不同。

本研究從普洱茶中提取茶褐素,采用大孔樹(shù)脂將茶褐素分離成兩個(gè)不同極性的組分,再通過(guò)DEAE-52陰離子交換樹(shù)脂對(duì)極性較高,酚類含量低的組分按離子強(qiáng)度的差異進(jìn)行分離,以期獲得數(shù)種不同性質(zhì)的茶褐素部分,進(jìn)一步對(duì)各部分的總糖、總酚和蛋白質(zhì)的含量以及單糖糖組成進(jìn)行研究,為研究茶褐素類物質(zhì)組成、結(jié)構(gòu)、功能提供參考。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

普洱茶天士力機(jī)采茶葉生產(chǎn);陽(yáng)離子交換樹(shù)脂001X7、D72、D61、D151,陰離子交換樹(shù)脂D280、D201、D301T,大孔吸附樹(shù)脂AB-8、D4006、NKA-9、D3520南開(kāi)大學(xué)化工廠;DEAE-52陰離子交換樹(shù)脂北京華邁科生物技術(shù)有限公司;1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)上海思域化工;三氟乙酸、乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁醇、無(wú)水乙醇、硫酸、碳酸氫鈉、氯化鈉天津市光復(fù)科技有限公司，分析純;重蒸酚索萊寶;考馬斯亮藍(lán)G250、福林酚北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀日本東京理化;UV5200紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上海元析;Agilent 100高效液相色譜儀美國(guó)Agilent。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1茶褐素的制備[9]普洱茶粉碎后,用95%乙醇浸提,每次8 h,浸提三次,至浸提液基本無(wú)色,除去醇溶性物質(zhì);剩余的茶粉用60 ℃熱水,按1∶20(w/v)的加水比浸提三次,合并三次浸提的茶湯,濾紙抽濾除去懸浮顆粒,60 ℃旋蒸濃縮,至濃縮液體積為濃縮前的1/10,依次用乙酸乙酯、二氯甲烷和正丁醇按1∶1(v/v)的比例對(duì)濃縮液進(jìn)行萃取,每種有機(jī)溶劑萃取三次,得到剩余水層,60 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑,凍干得到茶褐素粉末,復(fù)溶后4 ℃保存,備用。

1.2.2茶褐素化學(xué)成分測(cè)定總酚測(cè)定用福林酚法[11];總糖測(cè)定采用苯酚硫酸法[12];蛋白質(zhì)的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法[13]。

1.2.3樹(shù)脂的選擇通過(guò)比較11種大孔樹(shù)脂對(duì)茶褐素的吸附和解吸情況,選擇合適的樹(shù)脂用于茶褐素的分離。

1.2.3.1樹(shù)脂的吸附率分別準(zhǔn)確稱取2.0 g經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的各型號(hào)樹(shù)脂,置于50 mL廣口試劑瓶中,精確加入10 mL濃度為2 mg/mL的茶褐素溶液,以100 r/min速度于25 ℃恒溫?fù)u床振蕩至吸附飽和后過(guò)濾,測(cè)定濾液中總酚、總糖的濃度,按式(1)計(jì)算樹(shù)脂的吸附率。

吸附率(%)=[(C0-Ce)/C0]×100

式(1)

式中:C0為吸附前茶褐素溶液中總酚(或總糖)濃度(mg/mL);Ce為吸附后茶褐素溶液中總酚(或總糖)濃度(mg/mL)。

1.2.3.2樹(shù)脂的解吸率用50%(v/v)乙醇溶液對(duì)吸附飽和的樹(shù)脂,于25 ℃下進(jìn)行解吸,達(dá)到平衡后過(guò)濾,測(cè)定解吸液中總酚、總糖的濃度,按式(2)計(jì)算解吸率。

解吸率(%)=[Cr×Vr/(C0-Ce)×V0]×100

式(2)

式中:Cr為解吸液中的總酚(或總糖)濃度(mg/mL);Vr為解吸液的體積(mL);C0、Ce見(jiàn)式(1);V0為茶褐素溶液的體積(mL)。

1.2.4AB-8樹(shù)脂的靜態(tài)吸附研究

1.2.4.1靜態(tài)吸附曲線準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的AB-8樹(shù)脂2.0 g分別置于18個(gè)30 mL廣口試劑瓶中,分別精確加入10 mL總酚濃度約0.4 mg/mL的茶褐素溶液,于25 ℃下進(jìn)行靜態(tài)吸附,于30 min、1、2、4、6和8 h取一組(3瓶),過(guò)濾后測(cè)定溶液中總酚和總糖濃度,按公式(1)計(jì)算不同時(shí)間的吸附率。

1.2.4.2飽和吸附實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的AB-8樹(shù)脂2.0 g置于30 mL廣口試劑瓶中,分別精確加入10 mL總酚濃度為1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0 mg/mL的茶褐素溶液,25 ℃靜態(tài)吸附8 h,測(cè)定溶液中茶褐素溶液的總酚濃度,按公式(3)計(jì)算樹(shù)脂的吸附量。

Q=(C0-Ce)×V0/W

式(3)

式中:Q為吸附量(mg/g);W為濕樹(shù)脂質(zhì)量(g);C0、Ce見(jiàn)式(1);V0為茶褐素溶液的體積(mL)。

1.2.4.3pH對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附的影響準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的AB-8樹(shù)脂2.0 g,用1 mol/L HCl溶液和1 mol/L NaOH溶液將總酚濃度0.4 mg/mL的茶褐素溶液的pH調(diào)為2.0、4.0、6.0、8.0和10.0,于25 ℃進(jìn)行靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn),吸附飽和后,測(cè)定茶褐素溶液中總酚、總糖的濃度,并按式(1)計(jì)算樹(shù)脂的吸附率。

1.2.4.4乙醇濃度對(duì)AB-8樹(shù)脂解吸的影響配制濃度(v/v)為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%的乙醇水溶液,分別對(duì)茶褐素飽和吸附的AB-8樹(shù)脂25 ℃下進(jìn)行解吸,測(cè)定解吸液中的總酚濃度,并按式(2)計(jì)算解吸率。

1.2.5AB-8樹(shù)脂的動(dòng)態(tài)吸附研究動(dòng)態(tài)吸附在裝有AB-8樹(shù)脂的玻璃層析柱(1.6 cm×5 cm)中進(jìn)行,樹(shù)脂體積約為10 mL(相當(dāng)于6 g樹(shù)脂)。

1.2.5.1上樣濃度對(duì)AB-8樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附的影響準(zhǔn)備總酚濃度分別為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg/mL的茶褐素溶液,用1 mol/L HCl溶液調(diào)pH至4.0,準(zhǔn)確取50 mL于25 ℃恒溫上樣,流速1 BV/h,上樣結(jié)束后用50 mL、pH4.0的去離子水沖樹(shù)脂柱,合并兩側(cè)的流出液,測(cè)定流出液中總酚和總糖的濃度,按式(1)計(jì)算吸附率。

1.2.5.2上樣流速對(duì)AB-8樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附的影響準(zhǔn)確取50 mL總酚濃度為4.0 mg/mL的茶褐素溶液,用1 mol/L HCl溶液調(diào)pH至4.0,以流速為1、2、3、4、5、6 BV/h,25 ℃恒溫分別上樣,上樣結(jié)束后用等體積pH4.0的去離子水沖洗層析柱,收集流出液,并按式(1)計(jì)算其吸附率。

1.2.5.3上樣次數(shù)對(duì)茶褐素吸附的影響將上樣與沖洗的流出液合并,濃縮至約50 mL,測(cè)定濃縮流出液中的總酚和總糖濃度,重復(fù)上樣操作四次,計(jì)算每一次的吸附率。

1.2.5.4AB-8樹(shù)脂分離組分TBsP1與TBsP2AB-8樹(shù)脂通過(guò)重復(fù)上樣和洗脫收集未被吸附的組分TBsP1和被AB-8樹(shù)脂吸附后洗脫的組分TBsP2。

1.2.6DEAE-52陰離子交換樹(shù)脂對(duì)TBsP1組分進(jìn)行分離

1.2.6.1DEAE-52線性洗脫準(zhǔn)確稱取50.0 mg TBsP1溶解在1 mL去離子水中,在規(guī)格為1.6 cm×10 cm的DEAE-52層析柱中上樣,用1 mol/L NaCl溶液,于25 ℃進(jìn)行線性梯度洗脫,流速3 BV/h,每5 mL收集一管洗脫液,用苯酚硫酸法測(cè)定490 nm下的吸光值,繪制線性洗脫曲線,確定梯度洗脫濃度。

1.2.6.2DEAE-52梯度洗脫準(zhǔn)確稱取200.0 mg TBsP1溶于5 mL去離子水,上樣,用線性梯度洗脫中確定的NaCl濃度溶液于25 ℃洗脫,洗脫流速3 BV/h,最后用0.5 mol/L NaOH溶液對(duì)層析柱上的殘留物進(jìn)行洗脫,用苯酚硫酸法測(cè)定490 nm下的吸光值,繪制洗脫曲線。收集各個(gè)洗脫組分，透析除鹽，凍干得到TBsP1的各分離組分。

1.2.7茶褐素的主要組分的單糖組成

1.2.7.1樣品處理根據(jù)Yuan等的方法對(duì)茶褐素主要組分的單糖組成進(jìn)行分析[14]。準(zhǔn)確稱取5.0 mg樣品溶于4 mL濃度為2 mol/L三氟乙酸中,充入氮?dú)夥夤?110 ℃水解4 h,加入4 mL甲醇后用氮?dú)獯蹈?重復(fù)3次,去除三氟乙酸;加入1 mL去離子水復(fù)溶,離心取上清,之后進(jìn)行PMP衍生操作,得待檢測(cè)樣品。

1.2.7.2色譜條件色譜柱Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6 mm× 250 mm i.d.,5 μm;流動(dòng)相:0.1 mol/L磷酸鹽(pH6.7)緩沖液-乙腈(83∶17);柱溫:30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm;流速:1 mL/min;進(jìn)樣體積20 μL。

1.3數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)中每個(gè)處理重復(fù)三次,Origin 8.1軟件作圖。

2　結(jié)果與分析

2.1樹(shù)脂的篩選

為了考察不同型號(hào)樹(shù)脂對(duì)茶褐素中酚類物質(zhì)和糖類物質(zhì)的吸附能力,按照1.2.3對(duì)11種型號(hào)的樹(shù)脂進(jìn)行比較,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1,由圖可知,11種樹(shù)脂對(duì)茶褐素的酚類和糖類的吸附能力明顯不同,001X7、D61、D72、D151和D4006樹(shù)脂對(duì)茶褐素的吸附能力較弱,其他類型的樹(shù)脂對(duì)茶褐素有較好的吸附,D301T對(duì)糖類和酚類的吸附能力都強(qiáng),達(dá)不到將糖類和酚類分離的效果,D201和D280對(duì)茶褐素總酚和總糖吸附很強(qiáng),解吸附發(fā)現(xiàn):即使用2%(w/v)的NaOH溶液也難以解吸,說(shuō)明其與茶褐素結(jié)合強(qiáng)度高,造成了死吸附,不適合對(duì)茶褐素進(jìn)行分離。所以選擇NKA-9、D3520和AB-8樹(shù)脂進(jìn)一步研究其解吸能力，結(jié)果如表1所示。

圖1　不同型號(hào)樹(shù)脂對(duì)茶褐素中總糖和總酚的吸附率Fig.1　Adsorption rate of different resins for total sugarand total phenol from puerh tea theabrownins

樹(shù)脂型號(hào)總酚解吸率(%)總糖解吸率(%)AB-890.5980.09D352081.8188.27NKA-977.0973.47

由表1可知,AB-8樹(shù)脂吸附茶褐素總酚的解吸率高達(dá)90%以上,是三種樹(shù)脂中解吸率最高的,而且對(duì)總糖的解吸率比較高,故選擇AB-8樹(shù)脂進(jìn)行茶褐素的分離。

2.2AB-8樹(shù)脂對(duì)茶褐素的分離研究

2.2.1AB-8樹(shù)脂的靜態(tài)吸附與解析

2.2.1.1AB-8樹(shù)脂的茶褐素吸靜態(tài)附曲線由圖2可知,AB-8樹(shù)脂在吸附30 min時(shí),總酚的吸附率就達(dá)62.95%,總糖吸附率達(dá)到19.34%,吸附1 h,總酚的吸附率達(dá)到了70.80%,總糖吸附率為30.97%,隨后吸附率變化不大。

圖2　AB-8樹(shù)脂靜態(tài)吸附曲線Fig.2　Static adsorption curve of AB-8 resin

2.2.1.2茶褐素總酚濃度對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附的影響由圖3可知,當(dāng)茶褐素中總酚濃度小于10 mg/mL時(shí),AB-8樹(shù)脂的吸附量和濃度呈正比關(guān)系,當(dāng)總酚濃度超過(guò)10 mg/mL時(shí),AB-8樹(shù)脂對(duì)茶褐素中總酚的吸附量增加不大,AB-8樹(shù)脂對(duì)茶褐素中總酚的吸附量約為55 mg/g。

圖3　茶褐素總酚濃度對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附的影響Fig.3　Effect of polyphenol concentration on adsorptioncapacity of AB-8 resin

2.2.1.3pH對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附茶褐素的影響由圖4可知,pH對(duì)AB-8樹(shù)脂的吸附性能有一定的影響。粗提茶褐素溶液的pH大約為6.2～6.8,pH的變化會(huì)影響茶褐素中的酚羥基的解離,AB-8樹(shù)脂在pH為4.0時(shí)對(duì)總酚的吸附量達(dá)到最大,AB-8樹(shù)脂對(duì)總糖的吸附率隨著pH的上升而下降。pH過(guò)低或者過(guò)高都會(huì)影響氫鍵的形成,選擇pH4.0作為AB-8樹(shù)脂的最佳吸附pH。

圖4　pH對(duì)AB-8樹(shù)脂吸附率的影響Fig.4　Effect of pH on adsorption rates of AB-8 resin

2.2.1.4乙醇濃度對(duì)AB-8樹(shù)脂的茶褐素解吸影響由圖5可以看出,隨著乙醇濃度的提高茶褐素的解吸率逐漸上升,當(dāng)乙醇濃度為60%時(shí)總酚的解吸率達(dá)91.64%,總糖的解吸率也達(dá)到了91.41%。當(dāng)乙醇濃度達(dá)到70%時(shí),總酚的解吸率開(kāi)始降低,總糖的解吸率基本不變。推測(cè)茶褐素的極性較強(qiáng),當(dāng)乙醇濃度過(guò)高時(shí)可能會(huì)導(dǎo)致部分茶褐素的析出,從而使得解吸率下降。

圖5　乙醇濃度對(duì)解吸率的影響Fig.5　Effect of ethanol concentration on desorption rates of AB-8 resin

2.2.2AB-8樹(shù)脂的動(dòng)態(tài)吸附

2.2.2.1上樣濃度對(duì)AB-8樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附的影響由圖6可知,當(dāng)總酚濃度在小于4 mg/mL,總酚吸附率均在67%左右,當(dāng)濃度高于4 mg/mL時(shí)吸附率迅速下降?？赡苁怯捎跐舛冗^(guò)高會(huì)導(dǎo)致溶液中的茶褐素?zé)o法與樹(shù)脂充分接觸,達(dá)不到理想的吸附效果。

圖6　茶褐素濃度對(duì)吸附率的影響Fig.6　Effect of theabrwonin concentration on dynamic rates of AB-8 resin

2.2.2.2上樣流速對(duì)AB-8樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附的影響由圖7可知,當(dāng)上樣流速小于4 BV/h時(shí),吸附率都維持在65%,而流速高于4 BV/h時(shí),吸附率大幅度降低。可能由于流速過(guò)高導(dǎo)致茶褐素與樹(shù)脂的接觸時(shí)間不夠,從而降低了吸附率。

圖7　上樣流速對(duì)吸附率的影響Fig.7　Effect of flow rates on dynamicadsorption rates of AB-8 resin

2.2.2.3重復(fù)上樣次數(shù)對(duì)吸附率的影響通過(guò)重復(fù)上樣和洗脫收集到未被吸附的組分TBsP1和被AB-8樹(shù)脂吸附后洗脫的組分TBsP2,由圖8可知,重復(fù)上樣3次和4次,AB-8樹(shù)脂對(duì)茶褐素中總酚和總糖的吸附率基本相同,選擇重復(fù)上樣3次。茶褐素經(jīng)分離得到TBsP1和TBsP2,兩個(gè)組分的總糖、總酚和蛋白質(zhì)含量如表2所示。

圖8　重復(fù)上樣次數(shù)對(duì)吸附率的影響Fig.8　Effect of sample-loading times on dynamic adsorption rates of AB-8 resin

組分總糖含量(%)總酚含量(%)蛋白質(zhì)含量(%)TBs23.6925.539.53TBsP127.1817.104.44TBsP219.3328.9612.55

由表2可知,TBsP1組分中糖含量最高,達(dá)到27.18%,蛋白含量?jī)H為4.44%,TBsP2中酚含量最高,為28.96%。選擇DEAE-52陰離子交換樹(shù)脂對(duì)TBsP1進(jìn)一步分離,并對(duì)其單糖組成進(jìn)行研究。

2.3DEAE-52陰離子交換樹(shù)脂分離TBsP1

按照1.2.6方法,繪制線性洗脫曲線如圖4a,確定洗脫用NaCl的濃度。根據(jù)圖9a中的出峰狀況,選擇去離子水、0.06、0.13、0.17、0.5 mol/L的NaCl進(jìn)行洗脫,對(duì)未被洗脫的部分用0.5 mol/L的NaOH進(jìn)行洗脫。

表4　茶褐素的主要分離組分的單糖組成

圖9　DEAE-52樹(shù)脂洗脫曲線Fig.9　DEAE-52 chromatography eluting curve注:a為DEAE-52樹(shù)脂線性洗脫曲線,b為DEAE-52樹(shù)脂梯度洗脫曲線。

由圖9b可知,經(jīng)DEAE-52陰離子交換樹(shù)脂梯度洗脫峰較為對(duì)稱,可以認(rèn)為各個(gè)茶褐素組分得到較好分離且組分性質(zhì)較為單一,收集各個(gè)茶褐素組分,旋蒸濃縮,蒸餾水透析除去NaCl,凍干得到各個(gè)組分。按洗脫順序?qū)⒏鹘M分分別命名為TBsP1A、TBsP1B、TBsP1C、TBsP1D、TBsP1E、TBsP1F。各組分的得率分別為27.40%、9.56%、4.40%、3.08%、9.36%、19.76%。其總糖、總酚和蛋白質(zhì)的含量如表3。

表3　DEAE-52陰離子交換柱分離的

由表3可知,經(jīng)DEAE-52陰離子交換樹(shù)脂梯度洗脫得到的各個(gè)茶褐素組分的總糖,總酚以及蛋白含量均有區(qū)別。TBsP1A的總糖含量最高,為44.80%,總酚含量為2.60%;TBsP1B、TBsP1C、TBsP1D、TBsP1E中總糖和總酚的含量相近,TBsP1E中含有2.58%的蛋白質(zhì);TBsP1F中總酚含量要高于其他組分,蛋白質(zhì)的含量也較高。

2.4茶褐素的主要分離組分的單糖分析

按照1.2.7用高效液相色譜對(duì)茶褐素分離所得單糖組分分析結(jié)果如表4所示。普洱茶生產(chǎn)原料曬青毛茶中提取的色素中Glc含量最高,摩爾百分比為57.77%,其次為Ara,摩爾百分比為18.28%。曬青毛茶經(jīng)微生物作用后,茶褐素分離所得組分中單糖組成差異較大,其中Gal、Man、Rham、兩種酸性多糖有所增加,Glc的含量明顯變少。普洱茶茶褐素的不同分離組分的單糖摩爾百分比有差異,茶褐素的兩個(gè)粗分離組分中TBsP1中的GalA比例高于TBsP2,Glc比例低于TBsP2。TBsP1分離所得的幾個(gè)主要組分中,單糖的種類相似,摩爾百分比有區(qū)別,其主要單糖為GalA、Gal和Ara，另外兩個(gè)組分TBsP1C、TBsP1D量太少，未進(jìn)行單糖組分分析。

3　結(jié)論

本文通過(guò)利用AB-8樹(shù)脂將茶褐素分離成兩種不同的極性的組分,兩個(gè)組分總糖、總酚、蛋白質(zhì)含量不同,TBsP1中多糖含量較高,TBsP2中總酚含量最高。兩組分的單糖組成上也有區(qū)別,尤其是GalA和Glc的摩爾百分比差異較大。TBs-P1組分經(jīng)DEAE-52分離后得到六種不同性質(zhì)的組分,各個(gè)組分總糖、總酚和蛋白質(zhì)含量均有區(qū)別,說(shuō)明經(jīng)過(guò)AB-8樹(shù)脂和DEAE-52樹(shù)脂分步層析分離,可以將不同性質(zhì)的茶褐素組分進(jìn)行分離。不同組分中多糖、多酚和蛋白質(zhì)的結(jié)合程度也有所不同。茶褐素的主要分離組分單糖組成相似,各種單糖的摩爾百分比有差別,但與曬青毛茶相比差異較大,說(shuō)明普洱茶發(fā)酵過(guò)程中,原料的糖類物質(zhì)經(jīng)微生物作用發(fā)生變化,并與多酚和蛋白質(zhì)結(jié)合形成了茶褐素。有關(guān)普洱茶發(fā)酵過(guò)程中茶褐素形成方式、單糖組成的變化,各組分的結(jié)構(gòu)特定、生理活性等還有待研究。

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Study on fractionation of theabrownins in Puerh tea

WANG Tian-lu,DU Li-ping*,LIU Yan,MA Li-juan,XIAO Dong-guang

(College of Biotechnology,Tianjin University of Science & Technology,Tianjin 300457,China)

In this paper,the adsorption and desorption properties of different macroporous resins for Puerh tea theabrownins was investigated,and AB-8 macroporous resins was selected for fraction. Two fractions,TBsP1 and TBsP2 were obtained from the separation of Puerh tea theabrownins by AB-8 macroporous resin. With using DEAE-52 cellulose chromatography for grading TBsP1,six theabrownins fractions were obtained. The monosaccharide compositions of TBsP1,TBsP2 and four major fractions of TBsP1 were analysised. The fractions of theabrownins were different in the contents of total sugar,total phenol and protein. The monosaccharides compositions of four major fractions were similar,and different in contents. Comparing with the water soluble pigments extracting from Puerh crude tea,the compositions and content of monosaccharides were significantly different.

Puerh tea;theabrownins;AB-8 macroporous resin;DEAE-52;monosaccharide composition

2015-12-29

王天祿(1990-)，男，碩士研究生，研究方向：生物分離及現(xiàn)代釀造技術(shù)，E-mail：wangtianlu1990@126.com。

杜麗平(1967-)，女，博士，副教授，主要從事發(fā)酵工藝及分離分析方面的研究，E-mail：dlp123@tust.edu.cn。

教育部“長(zhǎng)江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃”項(xiàng)目(IRT1166)。

TS272.2

A

1002-0306(2016)16-0136-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.16.019