探討產(chǎn)婦子宮平滑肌組織中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及CX43表達(dá)與產(chǎn)后出血的相關(guān)性

魏海云　黃素然　蔡鵬宇

【摘要】 目的 探討產(chǎn)婦子宮平滑肌組織中絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及連接蛋白43（CX43）表達(dá)與產(chǎn)后出血的相關(guān)性。方法 30例行剖宮產(chǎn)產(chǎn)后宮縮乏力出血的產(chǎn)婦作為實(shí)驗(yàn)組， 30例行剖宮產(chǎn)無(wú)產(chǎn)后出血的產(chǎn)婦作為對(duì)照組。利用等長(zhǎng)張力測(cè)定的方式對(duì)產(chǎn)婦離體子宮下段平滑肌收縮功能以及縮宮素誘導(dǎo)的收縮潛能進(jìn)行檢測(cè)；利用熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)對(duì)產(chǎn)婦子宮下段平滑肌組織中的CX43 mRNA表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)；利用蛋白免疫印跡技術(shù)對(duì)產(chǎn)婦子宮下段平滑肌組織中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）、p38磷酸化蛋白、c-Jun氨基端激酶1/2（JNK1/2）以及CX43蛋白水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)婦離體子宮平滑肌自發(fā)性收縮活動(dòng)力以及收縮頻率均低于對(duì)照組（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組收縮幅度低于對(duì)照組， 但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在使用縮宮劑之后， 實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)婦離體子宮平滑肌的收縮活動(dòng)力、收縮幅度、收縮頻率以及收縮潛能均低于對(duì)照組（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組CX43 mRNA（0.72±0.33）、p-ERK1/2（2.18±0.41）、p-p38（0.77±0.19）、p-JNK1/2（0.81±0.20）、CX43蛋白（0.08±0.02）均低于對(duì)照組（1.02±0.73）、（13.10±4.51）、（0.93±0.23）、（1.10±0.50）、（0.12±0.05）（P<0.05）。結(jié)論 子宮乏力性產(chǎn)后出血產(chǎn)婦離體子宮平滑肌收縮功能以及收縮潛能顯著衰退， 子宮平滑肌組織中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路水平及CX43表達(dá)水平顯著下降， 并且兩者之間關(guān)系密切， 宮縮乏力性產(chǎn)后出血很大程度上是由于提示MAPK信號(hào)通路活化受阻以及CX43表達(dá)下降造成的， MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及CX43表達(dá)相互調(diào)節(jié)以及共同作用之下產(chǎn)婦產(chǎn)后出血形成以及發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】 子宮平滑肌組織；絲裂原激活蛋白激酶信號(hào)；連接蛋白43；產(chǎn)后出血；相關(guān)性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.26.070

產(chǎn)后出血是導(dǎo)致產(chǎn)婦死亡的重要原因， 我國(guó)孕產(chǎn)婦死亡最主要的原因便是產(chǎn)后出血造成的；若不能及時(shí)進(jìn)行治療， 嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致不孕以及垂體功能衰弱。根據(jù)目前研究結(jié)果表明， 在子宮平滑肌收縮中， 子宮平滑肌組織中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的級(jí)聯(lián)磷酸化有著重要作用[1]。近年來(lái)研究表明妊娠子宮平滑肌組織中CX43表達(dá)多樣并且與產(chǎn)程調(diào)整以及分娩發(fā)動(dòng)關(guān)系密切， CX43蛋白有可能是激活MAPK之后的靶物質(zhì)， 在功能機(jī)制中它們之間可能相互輔助[2]。本次研究探討產(chǎn)婦子宮平滑肌組織中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及CX43表達(dá)與產(chǎn)后出血的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 本次研究以2015年1月～2016年1月在東莞常安醫(yī)院婦產(chǎn)科因胎位異常、胎兒窘迫、羊水過(guò)少、頭盆不稱、社會(huì)因素采取剖宮產(chǎn)術(shù)的未臨產(chǎn)、無(wú)胎膜早破的30例宮縮乏力性產(chǎn)后出血產(chǎn)婦作為實(shí)驗(yàn)組， 并且選擇同期進(jìn)行剖宮產(chǎn)無(wú)產(chǎn)后出血的產(chǎn)婦30例作為對(duì)照組。產(chǎn)后出血診斷標(biāo)準(zhǔn)：自胎兒娩出后24 h內(nèi)總失血量達(dá)1000 ml即診斷為產(chǎn)后出血。實(shí)驗(yàn)組平均年齡（28.73±2.94）歲， 平均孕周（39.31±1.47）周， 平均產(chǎn)次（0.80±0.54）次， 產(chǎn)前平均體質(zhì)量指數(shù)（27.92±3.80）kg/m2， 新生兒平均體重（3373.00±513.89）g；對(duì)照組平均年齡（27.76±3.24）歲， 平均孕周（39.71±0.97）周， 平均產(chǎn)次（0.69±0.64）次， 產(chǎn)前平均體質(zhì)量指數(shù)（25.62±3.05）kg/m2， 新生兒平均體重（3352.10±441.03）g。兩組研究對(duì)象均無(wú)高血壓、糖尿病、心臟病以及腎病等， 且無(wú)急慢性感染性疾病， 飲食和生活習(xí)慣無(wú)特殊， 無(wú)抽煙、飲酒。兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法

1. 2. 1 采集樣本 兩組產(chǎn)婦均在胎兒娩出后， 預(yù)防性采用縮宮劑之前， 避開(kāi)夾鉗位置， 橫行切取子宮下段切口處上方平滑肌組織約 15 mm×5 mm×5 mm ， 放已備好的 0℃ K-H液中， 將血跡洗盡， 并放入 0℃ K-H 液中保存并迅速帶回實(shí)驗(yàn)室。在<4 h測(cè)定子宮平滑肌肌條張力。再取1.0～2.0 g平滑肌組織， 利用0.9%氯化鈉液進(jìn)行清洗再利用2.0 ml凍存管進(jìn)行保存， 迅速將液氮放入進(jìn)行速凍， 接著將其保存于-70℃的冰箱中， 以此來(lái)檢測(cè)蛋白、提取總RNA以及檢測(cè)基因。

1. 2. 2 測(cè)定子宮平滑肌肌條張力 利用電極刺激肌條使其有活性， 再與10 g肌肉張力換能器進(jìn)行連接， 采取等長(zhǎng)張力測(cè)定方法， 利用RM6240生物信號(hào)收集系統(tǒng)將其規(guī)律收縮后的波形極進(jìn)行記錄， 持續(xù)20 min， 接著利用5×10-7 mol/L縮宮劑誘導(dǎo)肌條進(jìn)行收縮， 并做好記錄， 對(duì)其收縮活動(dòng)力、收縮幅度以及收縮頻率進(jìn)行計(jì)算。

1. 2. 3 測(cè)定子宮平滑肌組織中CX43 mRNA 利用TRIzol將子宮平滑肌組織中總RNA提取出來(lái)， 利用分光光度計(jì)來(lái)對(duì)它在260 nm以及280 nm位置的吸光度進(jìn)行測(cè)定， 并對(duì)總RNA的純度以及濃度進(jìn)行計(jì)算， 此外， 利用1%瓊脂糖凝膠電泳來(lái)對(duì)RNA的完整度進(jìn)行檢測(cè)。取2 ?g總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA， 利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀來(lái)對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。利用Primer5.0軟件對(duì)CX43以及β-action基因引物與探針進(jìn)行設(shè)計(jì)。

1. 2. 4 測(cè)定子宮平滑肌組織中p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白 采用免疫印跡法， 具體步驟是：利用RIPA[2]將100 mg冰凍組織中總蛋白提取取來(lái)， 勻漿， 4℃， 離心5 min 12000 g， 將清液取出并利用離心管分別裝入， 再用BCA試劑盒來(lái)對(duì)蛋白進(jìn)行定量， SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜， 免疫反應(yīng)， 化學(xué)發(fā)光， 顯影， 定影以及攝片。將IOD值利用凝膠定量分析軟件讀取出來(lái)， 目的蛋白表達(dá)相對(duì)量用蛋白IOD值/內(nèi)參的IOD值表示， 用p-ERK1與p-ERK2、p-JNK1與p-JNK2的表達(dá)的相對(duì)量之和表示p-ERK1/2、p-JNK1/2的表達(dá)相對(duì)量。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組產(chǎn)婦離體子宮下段平滑肌收縮功能以及縮宮素誘導(dǎo)的收縮潛能情況 實(shí)驗(yàn)組自發(fā)性收縮活動(dòng)力（58.28±29.29）g·次/h， 收縮幅度（4.51±1.80）g， 收縮頻率（12.00±5.95）次/h；

在縮宮劑誘導(dǎo)之后， 收縮活動(dòng)力（161.68±35.02）g·次/h， 收縮幅度（5.91±1.40）g， 收縮頻率（31.20±12.35）次/h， 收縮潛能177.37%。對(duì)照組自發(fā)性收縮活動(dòng)力（95.71±43.29）g·次/h，

收縮幅度（5.61±2.58）g， 收縮頻率（19.42±13.00）次/h；在縮宮劑誘導(dǎo)之后， 收縮活動(dòng)力（398.00±92.12）g·次/h， 收縮幅度

（8.18±2.18）g， 收縮頻率（50.45±15.05）次/h， 收縮潛能270.47%。實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)婦離體子宮平滑肌自發(fā)性收縮活動(dòng)力以及收縮頻率均低于對(duì)照組（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組收縮幅度低于對(duì)照組， 但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在使用縮宮劑之后， 實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)婦離體子宮平滑肌的收縮活動(dòng)力、收縮幅度、收縮頻率以及收縮潛能均低于對(duì)照組（P<0.05）。

2. 2 兩組產(chǎn)婦子宮下段平滑肌組織中CX43 mRNA表達(dá)、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白情況 實(shí)驗(yàn)組CX43 mRNA（0.72±0.33）， p-ERK1/2（2.18±0.41）， p-p38（0.77± 0.19）， p-JNK1/2（0.81±0.20）， CX43蛋白（0.08±0.02）；對(duì)照組CX43 mRNA（1.02±0.73）， p-ERK1/2（13.10±4.51）， p-p38（0.93± 0.23）， p-JNK1/2（1.10±0.50）， CX43蛋白（0.12±0.05）。實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)婦子宮平滑肌組織中CX43 mRNA表達(dá)、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白均低于對(duì)照組（P<0.05）。

3 討論

本次研究顯示， 實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)婦離體子宮平滑肌自發(fā)性收縮活動(dòng)力、收縮幅度以及收縮頻率均低于對(duì)照組。在使用縮宮劑之后， 兩組產(chǎn)婦離體子宮平滑肌的收縮活動(dòng)力、收縮幅度、收縮頻率以及收縮潛能均顯著上升， 但是實(shí)驗(yàn)組各項(xiàng)均低于對(duì)照組（P<0.05）。據(jù)相關(guān)研究表明， 適量的縮宮劑能夠增加子宮平滑肌收縮活動(dòng)力等[1]。本次研究表明兩組產(chǎn)婦子宮平滑肌中的CX43 mRNA和CX43蛋白表達(dá)水平與p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2表達(dá)量呈正比。

綜上所述， 子宮乏力性產(chǎn)后出血產(chǎn)婦離體子宮平滑肌收縮功能以及收縮潛能顯著衰退， 子宮平滑肌組織中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路水平及CX43表達(dá)水平顯著下降， 并且兩者之間關(guān)系密切， 宮縮乏力性產(chǎn)后出血很大程度上是由于提示MAPK信號(hào)通路活化受阻以及CX43表達(dá)下降造成的MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及CX43表達(dá)相互調(diào)節(jié)以及共同作用之下產(chǎn)婦產(chǎn)后出血形成以及發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃科華.產(chǎn)婦子宮平滑肌組織中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及CX43表達(dá)與產(chǎn)后出血關(guān)系的研究. 福建醫(yī)科大學(xué)， 2011.

[2] 顏建英， 黃科華， 劉青閩， 等.產(chǎn)婦子宮平滑肌組織中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及CX43表達(dá)與產(chǎn)后出血關(guān)系的研究//第72屆國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟常務(wù)理事會(huì)暨婦產(chǎn)科醫(yī)師論壇論文集， 2012： 274-283.

[收稿日期：2016-07-08]