超聲波一步提取淡水魚氯霉素藥殘檢測(cè)的方法初探

摘 要：嘗試前處理采用超聲波一步提取淡水魚氯霉素藥物殘留并液相串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)的方法，相比于GB/T 20756-2006《可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》前處理步驟相對(duì)簡(jiǎn)單、快速，采用內(nèi)標(biāo)法定量，選用鰱魚為空白，添加0.1 μg/kg、0.3 μg/kg，回收率在 90%～120%，在0.1～2.0 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2>0.999，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）<9%，滿足GB/T 20756-2006和GB/T 27404-2008對(duì)準(zhǔn)確度和精密度的要求。通過計(jì)算得到理論方法檢出限（LOD）為0002 μg/kg，理論方法定量限（LOQ）為0.008 μg/kg。

關(guān)鍵詞：超聲波；氯霉素檢測(cè)；初探

氯霉素是一種廣譜抗生素，因其效高價(jià)廉，曾在水產(chǎn)養(yǎng)殖中廣范應(yīng)用。但氯霉素具有較強(qiáng)的毒副作用，帶來了水產(chǎn)品種氯霉素殘留的嚴(yán)重問題。氯霉素殘留可通過食物鏈傳給人類，對(duì)人類的健康造成巨大威脅[1]。目前檢測(cè)水產(chǎn)品種氯霉素的方法有很多種，其中液相串聯(lián)質(zhì)譜法以其前處理簡(jiǎn)單、分析快速準(zhǔn)確脫穎而出。本實(shí)驗(yàn)室采用《可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》進(jìn)行水產(chǎn)品氯霉素藥物殘留的檢測(cè)方法。本文在GB/T 20756-2006的基礎(chǔ)上嘗試將超聲波一步提取應(yīng)用到前處理當(dāng)中，在保證了檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度完全符合要求的基礎(chǔ)上，使整個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更加簡(jiǎn)單快速。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品德國Dr.E，純度≥98.5% Lot No.90424，氘代氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品德國Dr.E 100 μg/mL[1]。乙酸乙酯，F(xiàn)isher，色譜純；正己烷，沃凱，色譜純；屈臣氏蒸餾水。

1.2 主要儀器

IKA分析研磨機(jī)；數(shù)控超聲波清洗器KQ-500DE型； 湘儀離心機(jī)TDAA-WS； EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；日立高速冷凍離心機(jī) HITACHI CF16RXⅡ[1]；液相串聯(lián)質(zhì)譜儀Wters TQ-S；色譜柱 waters C18柱：50 mm×2.1 mm，1.7 μm。

1.3 試驗(yàn)部分

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 按照GB/T 20756-2006操作[2]。

1.3.2 樣品前處理 稱取5 g淡水魚肉糜樣品（IKA分析研磨機(jī)磨），精確至0.01 g。于50 mL具塞離心管中，加入75μL 氘代氯霉素使用液（20 ng/mL）、15 mL乙酸乙酯，上下振搖混勻1 min，放到數(shù)控超聲波清洗器中，超聲頻率40 KHz，超聲功率100%（500 W），超聲15 min，再上下振搖混勻1 min，4 000 r/min離心10 min，取出上清，注意不要吸到水相， 45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，5～10 mL正己烷渦旋混勻除脂，3 mL屈臣氏蒸餾水溶解，渦旋混勻，靜止分層，取下層水相到1.5 mL塑料離心管12 000 r/min 4 ℃冷凍離心，0.22 μm水相濾膜過濾，得到樣品用于Waters TQ-S液相串聯(lián)質(zhì)譜儀器測(cè)定[3]。

1.3.3 液質(zhì)聯(lián)用儀分析條件

1.3.3.1 色譜條件 50 mm×2.1 mm，1.7 μm C18柱；柱溫40 ℃；流速0.2 mL/ min；流動(dòng)相為A屈臣氏蒸餾水和B乙腈，采用梯度洗脫：0～2 min，A：B為70%：30%；2 min，A：B為30%：70% ；3 min，A：B為5%：95；4 min，A：B為70%：30%。

1.3.3.2 質(zhì)譜條件 質(zhì)譜分析條件見表1，氯霉素及氘代氯霉素的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)譜圖見圖1、圖2。

1.4 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度

配制0.0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ng/mL 6個(gè)不同質(zhì)量濃度的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，氘代氯霉素的質(zhì)量濃度為0.5 ng/mL，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積的比值（氯霉素峰面積/氘代氯霉素-D5面積）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。選取陰性鰱魚肉糜樣品，添加氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)，氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品添加水平為0.1 μg/kg、0.3 μg/kg，氘代氯霉素 0.3 μg/kg，每個(gè)添加水平3次平行。以公式3C/（S/N）計(jì)算理論方法檢出限（LOD），以公式10C/（S/N）計(jì)算理論方法檢量限（LOQ）[1]。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 檢測(cè)方法靈敏度

數(shù)據(jù)顯示CAP在0.1～2.0 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2>0.999。根據(jù)添加量為0.3 μg/kg的3個(gè)樣品152定量離子的最低信噪比和計(jì)算公式3C/（S/N），計(jì)算理論方法檢出限（LOD）為0.002 μg/kg，理論方法定量限為（LOQ）為0.008 μg/kg。

2.2 準(zhǔn)確度和精密度

添加量為0.1 μg/kg時(shí)回收率為102%～120%，RSD<9% ；添加量為0.3 μg/kg時(shí)回收率為90%～104%，RSD<6% 。

2.3 實(shí)際樣品的檢測(cè)

利用該方法對(duì)170個(gè)淡水魚樣品（鯉魚、鯽魚、虹鱒、黃顙魚、鰱魚）進(jìn)行檢測(cè)，檢出兩個(gè)陽性樣品，其中一個(gè)為超標(biāo)樣品。

3 討論

3.1 超聲波一步提取的初探

超聲波提取在檢測(cè)中應(yīng)用廣泛，在石油烴的提取和藥物殘留的提取中起到增大提取效率提高回收率的效果[4-8]。在采用GB/T 20756-2006進(jìn)行檢測(cè)的過程中，前處理步驟較繁瑣（超聲波提取是其中一步），無水硫酸鈉會(huì)使提取液鹽度升高從而影響液質(zhì)聯(lián)用儀的正常運(yùn)行，而且極有可能引入其他污染物質(zhì)而影響檢測(cè)結(jié)果，另外勻質(zhì)器極有可能引起交叉污染。目前我們?cè)跇悠诽幚頃r(shí)已經(jīng)把魚肉打成肉糜，因此大膽嘗試了超聲波提取代勻質(zhì)器一步提取氯霉素的方法，此方法使前處理變得簡(jiǎn)單又快速。

3.2 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度

經(jīng)過計(jì)算，超聲波一步提取淡水魚中氯霉素殘留的理論方法檢出限（LOD）為0.002 μg/kg，理論方法定量限為（LOQ）為0.008 μg/kg。添加量為0.1 μg/kg時(shí)回收率為102%～120%，RSD<9%；添加量為0.3 μg/kg時(shí)回收率為90%～104%，RSD<6% 。所有數(shù)據(jù)都滿足GB/T 20756-2006[2]以及GB/T 27404-2008[9]對(duì)準(zhǔn)確度和精密度的所有要求。

4 結(jié)語

本文總結(jié)了在檢測(cè)淡水魚氯霉素藥物殘留中采用超聲波一步提取的初步嘗試，實(shí)驗(yàn)以淡水魚（鰱魚）為例做靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度計(jì)算，滿足GB/T 20756-2006[2]以及GB/T 27404-2008[9]對(duì)回收率和精密度的所有要求。但僅僅用淡水魚是不夠的，還需要擴(kuò)大應(yīng)用范圍，作者還會(huì)繼續(xù)嘗試在河蟹、海參、海水養(yǎng)殖魚（大菱鲆）等水產(chǎn)品種類的應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 羅靳.魚配合飼料中氯霉素殘留量的檢測(cè)方法[J].河北漁業(yè)，2015（9）：43-45，73

[2] GB/T 20756-2006.可食性動(dòng)物肌肉、肝臟、和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007

[3] 薄爾琳，鄭懷東，劉學(xué)光.同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定海參中氯霉素[J].中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2013，3（4）：36—41

[4] 任松，陳衛(wèi)衛(wèi)，卜建平，等.超聲波提取在近海沉積物油類測(cè)定中的應(yīng)用[J].海洋環(huán)境科學(xué)，2005，24（1）：35-37

[5] 郭偉，張春暉，臧勇軍.LC-APCI-MS同時(shí)檢測(cè)豬肉中7種磺胺類藥物殘留[J].食品研究與開發(fā)，2006，27（10）：120-123

[6] 于維森，于紅衛(wèi)，郝文等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定常見食品中磺胺及喹諾酮[J].預(yù)防獸醫(yī)學(xué)論壇，2011，17（2）：102-105

[7] 羅曉燕，林玉娜，劉莉治.SPE-HPLC法同時(shí)測(cè)定水產(chǎn)品中四種抗生素殘留的研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，32（3）：198-220

[8] 羅曉燕，林玉娜，劉莉治.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定動(dòng)物組織中四種抗生素殘留量的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2004，14（4）：443-444

[9] GB/T 27404-2008.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008

（收稿日期：2016-05-31）