HPLC-MS/MS法測定豬肉中克倫特羅和萊克多巴胺

孫清榮，李楠，郭禮強(qiáng)，王洪濤

（1.山東科技職業(yè)學(xué)院，山東濰坊261053；2.濰坊出入境檢驗檢疫局，山東濰坊261041）

HPLC-MS/MS法測定豬肉中克倫特羅和萊克多巴胺

孫清榮1，李楠1，郭禮強(qiáng)2，王洪濤2

（1.山東科技職業(yè)學(xué)院，山東濰坊261053；2.濰坊出入境檢驗檢疫局，山東濰坊261041）

研發(fā)聚合物整體柱微萃?。≒olymer monolith microextraction，PMME）柱，建立豬肉中克倫特羅和萊克多巴胺的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）檢測方法。樣品用乙酸銨緩沖液提取，通過聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯（p（MAA-co-EGDMA））柱進(jìn)行富集凈化，用甲醇洗脫，采用HPLC-MS/MS進(jìn)行測定，梯度洗脫，流動相為甲醇和含0.1%的甲酸水溶液；質(zhì)譜采集模式為電噴霧正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式。以克倫特羅-D9為內(nèi)標(biāo)，克倫特羅的的線性范圍為0.015μg/L～1.00 μg/L，相關(guān)系數(shù)（R2）大于0.99，定量限為0.05 μg/kg，3個不同水平的加標(biāo)平均回收率為88.9%～105.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。以萊克多巴胺-D3為內(nèi)標(biāo)，萊克多巴胺的的線性范圍為0.15 μg/L～10.0 μg/L，相關(guān)系數(shù)（R2）大于0.99，定量限為0.50 μg/kg，3個不同水平的加標(biāo)平均回收率為89.9%～105.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。該方法具有操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好，試劑用量少等特點，符合食品樣品中痕量污染物的檢測要求。

固相微萃?。籋PLC-MS/MS；豬肉；克倫特羅；萊克多巴胺

克倫特羅（Clenbuterol）和萊克多巴胺（Ractopamine）是一類人工合成的腎上腺素β2-受體選擇性激動劑。由于β2-受體激動劑過量添加可促進(jìn)動物（如豬、牛、羊等）生長，使體內(nèi)的脂肪分解代謝增強(qiáng)，顯著提高瘦肉率，所以自20世紀(jì)80年代以來，在利益的驅(qū)動下，β2-受體激動劑被非法地添加于飼料中。然而，β2-受體激動劑在動物體內(nèi)代謝慢，殘留時間長，被人食用可能導(dǎo)致心動過速、心率失常、肌肉疼痛、惡心和眩暈等癥狀的發(fā)生［1］，嚴(yán)重威脅了人類健康。從1998年至今，我國相繼發(fā)生至少19起較大規(guī)模的瘦肉精中毒事件［2］，涉及人員達(dá)4 000多人。2009年，日本通報從我國進(jìn)口豬、牛肉制品中檢出39批次“瘦肉精”殘留，涉及全國14家大型出口企業(yè)，不僅造成約2.5億美元經(jīng)濟(jì)損失，也對我國肉制品出口質(zhì)量安全聲譽(yù)造成不良形象［2］。因此，從根本上解決“瘦肉精”問題，需要政府部門、行業(yè)、企業(yè)、監(jiān)管部門等付出不懈努力。

目前，國家規(guī)定的瘦肉精有16種，克倫特羅和萊克多巴胺因為價格低廉、容易購買且見效快，是違法分子最常用的飼料添加劑。國內(nèi)外對克倫特羅和萊克多巴胺殘留的檢測方法主要有ELISA法［3-4］，HPLC法［5］、GC-MS法［6］、HPLC-MS/MS法［7-8］。其中，ELISA法存在假陽性情況［9-10］，HPLC法靈敏度較低，達(dá)不到獸藥殘留的檢測限，GC-MS法前處理較復(fù)雜，大大增加了結(jié)果的不確定度。而HPLC-MS/MS法具有靈敏度高、假陽性率低的特點，常用作篩選后陽性樣品的確證，是β2-受體激動劑殘留測定中最常用的定量和確證方法。

由于豬肉樣品基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng)，樣品的前處理是影響其分析結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素。1989年，Pawliszyn［11］等提出固相微萃取技術(shù)，該技術(shù)無需溶劑萃取，樣品消耗量少，操作簡便、快速、選擇性好、靈敏度高，集萃取、凈化、富集于一體，易于自動化處理。在此基礎(chǔ)之上，人們還發(fā)展了諸如薄膜微萃?。?2］、管內(nèi)固相微萃?。?3］、管外固相微萃?。?4］等在內(nèi)的SPME模式。在本文中，我們研發(fā)聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）［p（MAA-co-EGDMA）］整體柱材料為萃取介質(zhì)的聚合物整體柱微萃?。≒olymer monolith microextraction，PMME）技術(shù)，構(gòu)建了一種新型的固相微萃取模式。

我們研究小組首先將有機(jī)聚合物整體柱材料引進(jìn)In-tube SPME技術(shù)中，制備了p（MAA-co-EGDMA）毛細(xì)管整體柱［15］。該整體柱性質(zhì)穩(wěn)定，其疏水的主鏈和酸性的側(cè)鏈羧基官能團(tuán)使其對疏水的堿性化合物有較好的萃取效率，將此PMME技術(shù)應(yīng)用于β2-受體激動劑殘留的預(yù)處理，該法能較好地去除豬肉中的基質(zhì)干擾，再結(jié)合HPLC-MS/MS，建立了一種豬肉中β2-受體激動劑分析的新方法。試驗結(jié)果表明，該方法的克倫特羅檢測限低至0.05 μg/kg，萊克多巴胺檢測限低至0.5 μg/kg。這種方法具有重現(xiàn)性好、回收率高、樣品用量少等特點，適合于其定性、定量測定。

1　試驗部分

1.1儀器與試劑

100 μL移液器、5810型離心機(jī)：德國Eppendorf公司；Agilent1200-6430液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（配ESI源）：美國Agilent公司；0.01 mg電子天平、0.01 g電子天平：德國梅特勒公司；T25型均質(zhì)器、渦流混勻器：德國IKA公司；N-EVAP氮吹儀：美國organomation Associates公司；MCX柱：美國waters公司；PCX柱：天津Agela公司。

標(biāo)準(zhǔn)品克倫特羅和克倫特羅-D9（Clenbuterol-D9）：德國Dr.Ehrenstorfer公司；標(biāo)準(zhǔn)品萊克多巴胺和萊克多巴胺-D3：美國Sigma-Aldich公司；N，O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺：德國Macherey-Nagel公司；（100 mg，5 mL）C18固相萃取小柱：美國Agilent公司；乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）：瑞士Acros公司；甲基丙烯酸（MAA）、偶氮二異丁腈（AIBN）、十二醇、甲苯：上海醫(yī)藥集團(tuán)試劑公司；甲醇、乙酸乙酯、乙腈和甲酸均為色譜純：美國Biopure公司；試驗用水為超純水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1）稱取克倫特羅、克倫特羅-D9、萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg，加甲醇溶解并分別定容至100 mL，分別配成濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液；萊克多巴胺-D3用丙酮溶解配成濃度為100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4℃冰箱中放置，備用。

2）用移液器取1 mL克倫特羅儲備液用甲醇定容至100 mL，配成濃度為1 mg/L的中間儲備液；移取克倫特羅中間儲備液1 mL，萊克多巴胺儲備液0.1 mL，用甲醇定容至100 mL，混標(biāo)工作液中克倫特羅濃度為10 μg/L，萊克多巴胺濃度為100 μg/L；內(nèi)標(biāo)混標(biāo)配制同前，用甲醇定容100mL，克倫特羅-D9濃度為10μg/L、萊克多巴胺-D3濃度為100 μg/L。試驗中用甲醇稀釋成所需要的濃度。

1.3P（MAA-EGDMA）毛細(xì)管整體柱的制備

PMME毛細(xì)管整體微萃取柱（20 mm×0.53 mm，i. d.）的合成為Y.Fan等［21］的方法上做了一定的改進(jìn)：稱取甲基丙烯酸48 mg，乙二醇二甲基丙烯酸酯420 mg，甲苯110 mg，十二醇860 mg，AIBN 4.5 mg，混勻，超聲5 min。然后灌入內(nèi)壁經(jīng)（γ-甲基丙烯酰）丙基三甲氧基硅烷衍生后的毛細(xì)管中，兩端以硅橡膠封口，于烘箱中60℃反應(yīng)16 h后，用甲醇沖洗以除去致孔劑與未反應(yīng)單體。最后除去一次性醫(yī)用注射器（1 mL）針頭的鋼管部分，截取2 cm制備好的毛細(xì)管整體柱，用粘膠將其固定至原針頭的鋼管部位即可。

1.4萃取過程

1.4.1提取

精密稱?。?±0.01）g豬肉樣品于具塞離心管中，加入內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液100 μL，加入乙酸銨緩沖液10 mL，均質(zhì)1 min然后加入β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶30 μL，渦混，37℃溫育過夜。反應(yīng)完畢后10 000 r/min離心10 min，收集上清液入另一50 mL離心管中，加入10 mL正己烷，渦混1 min，10 000 r/min離心10 min。（如上清液混濁，可用濾紙過濾）

1.4.2P（MAA-EGDMA）毛細(xì)管整體柱凈化

1）活化：準(zhǔn)確吸取0.3 mL的活化溶液（依次為甲醇、0.02 mol/L磷酸鹽溶液（pH 7.0））于1 mL注射器中，套上萃取柱，裝至注射泵上，以0.15 mL/min的流速推動活化溶液通過萃取柱。

2）萃?。簩? mL的樣品溶液以0.5 mL/min的流速推過萃取柱。

3）清洗：吸取0.2 mL的0.02 mol/L磷酸鹽溶液（pH 7.0），以0.1 mL/min的流速推過萃取柱。

4）解吸：用干凈的空注射器推出萃取柱中殘余的溶液，然后準(zhǔn)確吸取0.4 mL的甲醇以0.1 mL/min的流速推過萃取柱，并在萃取柱出口端收集解吸液，以N2濃縮至干，0.2 mL流動相溶解上機(jī)檢測。

1.5儀器參數(shù)與測定條件

1.5.1液相色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（1.8 μm，3.0× 100 mm）；柱溫：40℃，流速：0.3 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL；流動相：A 0.1%甲酸水，B甲醇，梯度洗脫程序：0→4.0 min，由25%B→80%B；4.0→6.0 min，80%B；6.01 min，25%B，平衡2.5 min。

1.5.2質(zhì)譜條件

電離方式：ESI+；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；干燥氣溫度：350℃；干燥氣流速：8.5 L/min；噴霧針壓力：40 psi；電子倍增器電壓：4 000 V；碰撞氣：高純氮，99.999%，四種化合物質(zhì)譜參數(shù)見表1。

2　結(jié)果與討論

2.1單體選用原則和聚合條件的確定

甲基丙烯酸生產(chǎn)的聚合物有優(yōu)越的懸浮、流變和耐久特性，可以提高粘接強(qiáng)度及穩(wěn)定性，但易聚合成水溶性聚合物。乙二醇二甲基丙烯酸酯微溶于水，其參與共聚的聚合物，硬度增加，耐熱、耐候，耐溶劑和摩擦性提高。AIBN的特點是分解反應(yīng)比較平穩(wěn)，只產(chǎn)生1種自由基，基本上不發(fā)生誘導(dǎo)分解，其作為引發(fā)劑，把甲基丙烯酸與乙二醇二甲基丙烯酸酯聚合后，再將其接枝到丙基三甲氧基硅烷衍生后的毛細(xì)管中，得到的三元聚合物粘結(jié)力強(qiáng)、強(qiáng)度適中、彈性高、化學(xué)穩(wěn)定。由于聚合物的結(jié)構(gòu)特點，作為固相微萃取涂層，能夠?qū)Ψ枷慊衔?，羰基化合物等具有很好的溶解吸附作用。在制備的過程中，交聯(lián)劑及致孔劑的比例、致孔劑的組成、引發(fā)劑的用量等因素都會影響整體柱的孔結(jié)構(gòu)，通過優(yōu)化條件，制成了孔徑和柱壓力降都比較理想的整體柱。

表1　克倫特羅和萊克多巴胺的質(zhì)譜參數(shù)Table 1Mass soectrometric acquisition parameters of clenbuterol and ractopamine

2.2P（MAA-EGDMA）毛細(xì)管整體柱的優(yōu)化

2.2.1溶液pH值的優(yōu)化

樣品溶液pH值對克倫特羅和萊克多巴胺的存在狀態(tài)和穩(wěn)定性有一定的影響，萃取效率的影響見圖1。

圖1　不同pH值對克倫特羅和萊克多巴胺回收率的影響Fig.1The effect of pH on the recoveries of clenbuterol and ractopamine

當(dāng)pH值過高時，兩種化合物主要為離子狀態(tài)，極性變大，與聚合物之間的作用力減少，不利于吸附而降低吸附效率。相反，pH太低也不利于萊克多巴胺的衍生，也會影響整體柱的吸附。本文研究了pH 3～10時整體柱對化合物回收率的影響。在pH 5左右時回收率最高，分析p（MAA-co-EGDMA）整體柱上的羧基離解，而克倫特羅和萊克多巴胺質(zhì)子化，整體柱對其萃取過程中以離子交換作用為主。

2.2.2萃取容量的考察

添加克倫特羅和萊克多巴胺濃度為0.5、0.05 μg/L，逐漸增大樣品交換體積，得到分析物的交換體積與回收率的關(guān)系曲線見圖2。

圖2　不同萃取體積對克倫特羅和萊克多巴胺回收率的影響Fig.2The effect of different extraction volume on the recoveries of clenbuterol and ractopamine

如圖2所示，隨著萃取體積的增加，回收率也在不斷增大，當(dāng)萃取體積達(dá)到2 mL時，回收率基本達(dá)到平衡。本試驗選擇了2 mL作為實際樣品萃取體積。

2.3方法的評價

2.3.1洗脫溶解類型與體積的優(yōu)化

不同溶劑對目標(biāo)物的洗脫能力不同，本研究分別考察了0.4 mL的甲醇、乙腈、乙酸乙酯對目標(biāo)物的洗脫效果。研究發(fā)現(xiàn)，甲醇和乙腈的洗脫能力相差不多，均高于乙酸乙酯，因甲醇價廉低毒，選為洗脫溶劑。以不同體積的甲醇來考察洗脫體積對洗脫效率的影響，結(jié)果如圖3所示。

圖3　洗脫劑體積對克倫特羅和萊克多巴胺回收率的影響Fig.3Effect of eluent volume on the recoveries of clenbuterol and ractopamine

由圖3可知，隨著甲醇體積的增加，目標(biāo)物的回收率逐漸增加，當(dāng)甲醇用量為0.4 mL時達(dá)到最高，繼續(xù)增加甲醇體積無明顯變化，本文選擇0.4 mL甲醇洗脫。

2.3.2線性范圍與檢出線

配制標(biāo)準(zhǔn)曲線（其中克倫特羅為0.015、0.050、0.10、0.20、0.50、1.00 μg/L，萊克多巴胺為0.15、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/L）進(jìn)行測定，得到線性回歸方程（克倫特羅為Y=1.436 6X-0.248 7，相關(guān)系數(shù)r=0.999 1；萊克多巴胺為Y=4.706 1X-0.855 8，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7；其中X為目標(biāo)物的相對濃度，Y為相對響應(yīng)值）。在陰性豬肉中添加回收，按1.4節(jié)進(jìn)行樣品的前處理，以色譜峰的信噪比（S/N）的3倍和10倍分別計算檢測限和定量限，克倫特羅檢出線為0.015 μg/kg，定量線為0.05 μg/kg；萊克多巴胺檢出線為0.15 μg/kg，定量線為0.5 μg/kg。

2.3.3回收率與精密度

以陰性樣品為空白基質(zhì)，分別添加信噪比1、2、10倍3個濃度的混標(biāo)溶液，每個添加濃度水平進(jìn)行6次測定，連續(xù)3天重復(fù)操作，其日內(nèi)和日間的平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）見表2。

表2　陰性豬肉樣品中添加克倫特羅和萊克多巴胺的回收率和精密度Table 3Revoveries and ard deviations（RSDs）of clenbuterol and rectopamine in meat

2.4PMME整體柱和其它萃取柱的比較

陰性樣品添加回收，我們使用PMME整體柱，以本試驗優(yōu)化的方法處理樣品，和市場上Oasis MCX、Agela PCX小柱（提取方法參考文獻(xiàn)［16］）進(jìn)行比較。對比了3個濃度的添加回收（其中克倫特羅為0.05、0.10、0.50 μg/L，萊克多巴胺為0.5、1.0、5.0 μg/L），通過比較儀器檢測結(jié)果與回收率，發(fā)現(xiàn)Oasis MCX小柱凈化效果最好，但與另兩種小柱差距不明顯，見圖4、圖5，PMME整體柱和PCX小柱相差不大，但PMME整體柱有機(jī)溶劑用量少，操作更方便，快速。

2.5實際樣品分析

對市場上出售的15份豬肉樣品（各5份）進(jìn)行了分析檢測，其中有1份檢出克倫特羅，含量為0.07μg/kg，超過了歐盟和日本的出口標(biāo)準(zhǔn)（限值0.05 μg/kg），圖6為該陽性樣品的色譜圖。

圖4　不同提取柱對克倫特羅回收率的影響Fig.4Effects of different Extraction columns on the recoveries of clenbuterol

圖5　不同提取柱對萊克多巴胺回收率的影響Fig.5Effects of different Extraction columns on the recoveries of ractopamine

圖6　克倫特羅和萊克多巴胺的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（a）和一個陽性樣品（b）的HPLC-MS譜圖Fig.6HPLC-MS chromatograms of（a）a mixed solution and（b）a real sample containing a primary clenbuterol

3　結(jié)語

建立了基于聚合物微萃取柱測定豬肉中克倫特羅和萊克多巴胺的HPLC-MS/MS方法。試驗表明該方法具有檢測限低、重現(xiàn)性好、回收率高、樣品用量少等特點，已經(jīng)成功應(yīng)用于豬肉中克倫特羅和萊克多巴胺的檢測，為豬肉樣品中克倫特羅和萊克多巴胺的痕量檢測提供技術(shù)支持。

［1］Whaites L X，Murby E J.Determination of clenbuterol in bovine urine using gas chromatography-mass spectrometry following cleanup on an ion-exchange resin［J］.J Chromatogr B，1999，728（1）：67-73

［2］管恩平，夢廣校.豬體內(nèi)瘦肉精代謝分析與安全控制［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2013：2-3

［3］Boyd D，O’Keeffe M，Smyth M R.Matrix solid-phase dispersion as a multiresidue extraction technique for β-agonists in bovine liver tissue［J］.Anal，1994，119：1467-1470

［4］Haasnoot W，Stouten P，Lommen A，et al.Determination of fenoterol and ractopamine in urine by enzyme immunoassay［J］.Anal，1994，119：2675-2680

［5］Lin L A，Tomlinson J A，Satzger R D.Detection of clenbuterol in bovine retinal tissue by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection［J］.J Chromagr A，1997，762（1/2）：275-280

［6］Whaites L X，Murby E J.Determination of clenbuterol in bovine urine using gas chromatography-mass spectrometry following cleanup on an ion-exchange resin［J］.J Chromatogr B Biomed Sci Appl，1999，728（1）：67-73

［7］Wasch K D，Brabander H D，Courtheyn D.LC-MS-MS to detect and identify four beta-agonists and quantify clenbuterol in liver［J］. Anal，1998，123：2701-2705

［8］Hogendoorn E A，Zoonen P V，Polettini A，et al.Hyphenation of coupled-column liquid chromatography and thermospray tandem mass spectrometry for the rapid determination of beta 2-agonist residues in bovine urine using direct large-volume sample injection. Set-up of single-residue methods for clenbuterol and salbutamol［J］. J Mass Spectrom，1996，31（4）：418-426

［9］Hassnoot w，Stouten P，Schilt R，et al.A fast immunoassay for the screening of beta-agonists in hair［J］.Analyst，1998，123（12）：2707-2710

［10］Hahnau S，Jülicher B.Evaluation of commercially available ELISA test kits for the detection of clenbuterol and other beta 2-agonists［J］. Food Addit Contam，1996，13（3）：259-274

［11］Belardi R P，Pawliszyn J.The application of chemically modified fused silica fibers in extraction of organics from water matrix sam－ples and their raped transfer to capillary columns［J］.J Water Pollut Res，1989，24：179-191

［12］Norberg J，Thordarson E，Mathiasson L，et al.Microporous membrane liquid-liquid extraction coupled on-line with normal-phase liquid chromatography for the determination of cationic surfactants inriverandwastewater［J］.JChromatogrA，2000，869（1/2）：523-529

［13］Kataoka H，Lord H L，Pawliszyn J.Applications of solid-phase microextraction in food analysis［J］.J Chromatogr A，2000，880（1/2）：35-62

［14］Wang Y，O’Reilly J，Chen J，et al.Equilibrium in-fibre standardisation technique for solid-phase microextraction［J］.J Chromatogr A， 2005，1072（1）：13-17

［15］Fan Y，F(xiàn)eng Y Q，Da S L，et al.Poly（methacrylic acid-ethylene glycol dimethacrylate）monolithic capillary for in-tube solid phase microextraction coupled to high performance liquid chromatography and its application to determination of basic drugs in human serum［J］.Anal Chim Acta，2004，523（2）：251-258

［16］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.SN/T 1924-2011進(jìn)出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011：2-4

Determination of Clenbuterol and Ractopamine in Pork by High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

SUN Qing-rong1，LI Nan1，GUO Li-qiang2，WANG Hong-tao2
（1.Shandong Vocational College of Science and Technology，Weifang 261053，Shandong，China；2.Weifang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Weifang 261041，Shandong，China）

A method was established for the determination of clenbuterol and ractopamine in pork based on Polymer monolith microextraction coupled with high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（HPLC-MS/MS）.The samples was extracted by ammonium acetate buffer and further purified by an PMME，which was eluted by methanol.The target compounds were assayed by HPLC-MS/MS with gradient elution using methanol and 0.1%of formic acid aqueous solution as mobile phases.The mass spectrometric acquisitions were carried out by means of multiple reaction monitoring（MRM）in electrospray positive ionization mode.The clenbuterol linearities（R2＞0.99）were achieved over the range of 0.015 μg/L-1.00 μg/L based on the internal standard calibration of clenbuterol-D9，the quantification limits of the method were 0.05 μg/kg.The mean recoveries of the clenbuterol（spiked at three concentration levels）ranged from 88.9%to 105.0%，with the relative standard deviations（RSDs）no more than 10%.The ractopamine linearities（R2＞0.99）were achieved over the range of 0.15 μg/L-10.0 μg/L based on the internal standard calibration of ractopamine-D3，the quantification limits of the method were 0.50 μg/kg.The mean recoveries of the clenbuterol（spiked at three concentration levels）ranged from 89.9%to 105.0%，with the relative standard deviations（RSDs）no more than 10%.This proposed method is simple，sensitive，reproducible，and complied with the regulations for the determination of trace contaminants residues in pork matrices.

solid-phase microextraction；high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry；meat；clenbuterol；ractopamine

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.20.036

孫清榮（1970—），女（漢），副教授，碩士，研究方向：分析檢測。

2015-11-24