蒙藥額爾頓烏日勒對(duì)兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的血液流變學(xué)影響

白斯琴+烏仁圖雅+李常勝+吳薩日娜+蘇倫高娃

【摘 要】 目的：觀察兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷血液流變學(xué)變化及額爾頓烏日勒的保護(hù)作用。方法：將95只日本大耳白兔隨機(jī)分為正常組、模型組、額爾頓·烏日勒（又名珍寶丸）組和原花青素組（PC組），采用升高兔眼壓到50mmHg持續(xù)2h的方法制作視網(wǎng)膜缺血再灌注模型。除正常組外，每組分別在缺血再灌注1、6、12、24、48、72h后檢測(cè)視網(wǎng)膜組織中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性及血液流變學(xué)指標(biāo)。結(jié)果：除血漿黏度外，模型組與正常組比較，血液流變學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；珍寶丸組及PC組與模型組比較，血液流變學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），珍寶丸組與PC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SOD：模型組的24h、48h、72h與正常組比較視網(wǎng)膜組織中SOD活力均明顯下降，珍寶丸組及PC組的24 h、48h、72h視網(wǎng)膜組織中SOD活力均相應(yīng)的有所提高，且明顯高于同時(shí)間點(diǎn)模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。組內(nèi)24 h、48h、72h與1h、6h、12h比較，SOD活力均有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。MDA：模型組24 h、48h、72h與1h、6h、12h比較，珍寶丸組及PC組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：額爾頓烏日勒可改善視網(wǎng)膜的血流，防治視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷。

【關(guān)鍵詞】 額爾頓烏日勒；視網(wǎng)膜；缺血再灌注；血液流變學(xué)

【中圖分類號(hào)】R-332 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）12-0002-03

Abstract：Objective To explore the hemarheology changes in rabbits retinal ischemia- repercussion Injury and the protective effect of Eerdun wurile.Methods 95rabbits were randomized into a normal control group，a chemist- repercussion model group，a Eerdun wurile group（Zhen-Bao Pills group） and a Proanthocyanidins group（PC group）.A method of elevating intraocular pressure of rabbits up to 50mm Hg for 2 hours was employed to make a retinal ischemia- reperfusion model.Except normal control group，the tissue malondialdehyde（MDA） content，the activity of superoxide dismutase（SOD） and hemarheology indicators were detected in the rabbits of each group，after Ischemia-reperfusion 1，6，12，24，48，72hour. Results Except plasma viscosity，in comparison of the model group with the normal control group，the differences in hemarheology were significant statistically（P<0.05）.In comparison of theZhen-Bao Pills group，PC group with the model group，and Zhen-Bao Pills group with PC group， the differences in hemarheology were significant statistically（P<0.05）.SOD：Concerning to SOD activity，the differences were significant statistically in comparison of the 24h、48h and 72h of model group with the normal control group（P<0.05）.The SOD activity of retinal tissue were increased obviously in comparison of the 24h、48h and 72h of Zhen-Bao Pills group，PC group with same time-point subgroups of the model group.MDA：Concerning to MDA content，the differences were significant statistically in comparison of the24h、48h and 72h with the 1h、6h、12h of the model groups，and the Zhen-Bao and PC group with the model group（P<0.05）.Conclusion Eerdun wurile can prevent from and treat the retinal ischemia reperfusion injury.

Keywords：Eerdun wurile；Retinal；Ischemia-reperfusion；Hemarheology

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康成年無眼疾雄性日本大耳白兔95只，體重2.5～3.0kg，室溫環(huán)境飼養(yǎng)。隨機(jī)分為正常組（5只）、模型組（30只）、珍寶丸組（30只）、PC組（30只）。

1.2 主要儀器和試劑721分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠） ，JN-A型精密扭力天平（上海第二天平儀器廠）。丙二醛測(cè)試盒，超氧化物歧化酶測(cè)試盒（南建成生物工程研究所）。

1.3 給藥方法 于造模前7天按體重下胃管給藥，珍寶丸組灌入珍寶丸0.15g/kg，PC組灌入原花青素300mg/kg，1次/d。正常組及模型組給予等量生理鹽水。

1.4 動(dòng)物模型制備 采用前方灌注高眼壓致缺血的方法：將兔子稱體質(zhì)量，2%戊巴比妥鈉以劑量1 ml/kg，耳緣靜脈注射麻醉后，隨機(jī)選取每只兔的1只眼造模，復(fù)方托吡卡胺散瞳，滴鹽酸奧布卡因滴眼液眼表面麻醉，將連有生理鹽水灌注的7號(hào)頭皮針沿顳側(cè)角鞏膜緣斜面向上刺入兔眼前房，為了避免損傷晶狀體和虹膜，用膠布固定頭皮針于兔眼同側(cè)耳緣處。緩慢升高輸液瓶至兔眼實(shí)驗(yàn)眼垂直距離為90cm，此高度可在眼內(nèi)形成50mmHg的眼壓，使眼內(nèi)壓超過體循環(huán)收縮壓，從而阻斷視網(wǎng)膜血流，達(dá)到缺血的目的。當(dāng)球結(jié)膜及虹膜迅速變白時(shí)用直接檢眼鏡觀察視網(wǎng)膜蒼白，視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈的供血完全阻斷。實(shí)驗(yàn)過程中間斷點(diǎn)紅霉素眼膏以保持角膜濕潤并預(yù)防感染。持續(xù)2h后，逐漸降低輸液瓶高度至兔眼球水平使眼內(nèi)壓緩慢降低，以恢復(fù)視網(wǎng)膜血供，此時(shí)關(guān)閉輸液器并拔出前房灌注針頭，虹膜及球結(jié)膜顏色迅速恢復(fù)正常，眼底視網(wǎng)膜呈橘紅色，說明阻斷的血管重新開放，形成再灌注，即為IR模型建立成功。術(shù)畢結(jié)膜囊涂紅霉素眼膏，待清醒后回籠。

1.5 取材 造模后通血再灌注1h時(shí)間點(diǎn)從耳緣靜脈取血5ml進(jìn)行血流變檢查，分別再灌注1、6、12、24、48、72h后處死兔，立即摘取右眼剝離視網(wǎng)膜，取上清液做MDA、SOD吸光度值的測(cè)定。

1.6 觀察內(nèi)容

1.6.1 從各小組動(dòng)物耳緣靜脈抽取全血5ml，置于肝素鈉抗凝管，搖勻后置于北京塞科希德自動(dòng)血流變測(cè)試儀上立即檢測(cè)全血高切黏度、全血中切黏度、全血低切黏度、血漿黏度等指標(biāo)，其指標(biāo)由機(jī)載程序及特定公式導(dǎo)出；并將所檢測(cè)指標(biāo)的結(jié)果打印成表。

1.6.2 分別于再灌注1h、6h、12h、24h、48h、72h后立即空氣栓塞處死動(dòng)物，迅速摘除眼球，在冰環(huán)境中環(huán)角鞏膜緣切開，棄去角膜和晶狀體等，外翻眼球，解剖顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，以分析天平稱視網(wǎng)膜濕重，再用雙蒸水配成2%的濕重，勻漿。將勻漿液倒入試管中， 3000r/min離心15min，取出上清液，測(cè)定其MDA 含量和SOD的活性值。具體操作方法依照MDA和SOD 試劑盒說明書步驟進(jìn)行。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SSPS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物情況 實(shí)驗(yàn)過程中3只兔因腹瀉死亡，2只兔因胃腸脹氣死亡，2只兔不明原因死亡，尸檢發(fā)現(xiàn)肺臟充血，纖維化嚴(yán)重，考慮肺炎，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中共死亡7只兔，與實(shí)驗(yàn)藥物作用無關(guān)。

2.2 血液流變學(xué)的檢測(cè)結(jié)果 除血漿黏度外，模型組與正常組比較，血液流變學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；珍寶丸組及PC組與模型組比較，血液流變學(xué)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），珍寶丸組與PC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 視網(wǎng)膜組織中MDA含量及SOD活性的檢測(cè)結(jié)果 模型組的24h、48h、72h與正常組比較視網(wǎng)膜組織中SOD活力均明顯下降，珍寶丸組及PC組的24 h、48h、72h視網(wǎng)膜組織中SOD活力均相應(yīng)的有所提高，且明顯高于同時(shí)間點(diǎn)模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。MDA含量明顯低于模型組（P<0.05），見表3。組間內(nèi)24h、48h、72h 與1h、6h、12h比較，SOD活力均有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

血液流變學(xué)是一門研究物體流動(dòng)、變形的科學(xué)。血液流變學(xué)是生物流變學(xué)的重要分支，是研究有關(guān)血液的變形性與流動(dòng)性的科學(xué)。血液流變學(xué)包括兩部分內(nèi)容： 宏觀血液流變學(xué)和微觀血液流變學(xué)。前者包括血液黏度、血漿黏度、血沉、血液及管壁應(yīng)力分布； 后者包括紅細(xì)胞聚集性、紅細(xì)胞變形性，血小板聚集性、血小板黏附性等，故又稱為細(xì)胞流變學(xué)[1]。血液為非牛頓液體，即血粘度隨切變率而改變。切變率是指在層流的情況下，相鄰兩層血液流速的差和液層厚度的比值，血流快和血管管徑小時(shí)，切變率高；血流慢和血管管徑大時(shí)，切變率低。當(dāng)血粘度增加時(shí)，血管擴(kuò)張，維持正常的血容量。因此，如果外部壓力（如眼內(nèi)壓）阻止了血管擴(kuò)張或引起血管收縮，而自身血粘度又增高，此時(shí)血流量將減少，由此產(chǎn)生局部的血循環(huán)障礙，引起組織缺血、缺氧及功能代謝失調(diào)，成為組織（如視神經(jīng)）變性、萎縮等一系列病理變化的基礎(chǔ)[2]。

視網(wǎng)膜是代謝非常旺盛的組織，其耗氧及糖原分解能力超過全身其它任何組織，因此對(duì)缺血、缺氧極其敏感，當(dāng)眼壓升高超過視網(wǎng)膜和篩板的自身調(diào)節(jié)功能時(shí)， 即引起視網(wǎng)膜血液循環(huán)障礙、CRA血流改變，導(dǎo)致視網(wǎng)膜、篩板、視神經(jīng)供血不足，損害視神經(jīng)和視野。那么急性高眼壓對(duì)眼組織的損傷， 實(shí)質(zhì)是缺血-再灌注的問題[3-4]。視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后視網(wǎng)膜組織MDA含量明顯增高，SOD活性明顯降低[5]。MDA為機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，SOD、GSH是生物體內(nèi)主要的氧自由基清除劑，視網(wǎng)膜缺血時(shí)脂質(zhì)過氧化活躍，MDA生成增多，SOD則因消耗而減少[6-7]。

[JP+2]作為地域性知名藥種，在當(dāng)?shù)鼐哂小吧袼帯敝Q的傳統(tǒng)蒙藥額爾頓-烏日勒（珍寶丸）是治療白脈病（類似于腦出血、腦血栓、神經(jīng)損傷、神經(jīng)根炎等腦神經(jīng)系統(tǒng)疾?。⒑诿}?。愃朴诟哐獕?、高心病、冠心病等心血管疾病）和各種頑癥（疑難?。┑某Ｓ妹伤嶽8]。20世紀(jì)八、九十年代，學(xué)者們對(duì)額爾頓烏日勒進(jìn)行了初步的藥理學(xué)研究，認(rèn)為該藥具有擴(kuò)張毛細(xì)血管、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集和抗血栓作用，以及保護(hù)神經(jīng)損傷等作用，據(jù)研究報(bào)道，額爾敦烏日勒還對(duì)氧自由基有很強(qiáng)的清除和抑制作用[9-10]。

本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)蒙藥額爾頓-烏日勒改善CRA血流的功能，有效的提高兔眼視網(wǎng)膜組織中的SOD活性和降低MDA含量，對(duì)抗氧自由基介導(dǎo)的視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中具有保護(hù)作用。模型組（眼內(nèi)壓升高法）的切變率比正常組明顯增高，血粘度增高，此時(shí)血流量減少而引起眼組織缺血、缺氧及代謝功能失調(diào)至視神經(jīng)的變性、萎縮等病變損害視神經(jīng)和視野。而珍寶丸組的全血切變率值與模型組比較明顯降低，血粘度降低。從而為臨床防止視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷相關(guān)性眼病及改善視網(wǎng)膜中動(dòng)脈血流藥物的篩選提供實(shí)驗(yàn)性依據(jù)。

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（收稿日期：2016.04.14）