芳香新塔花茶對小鼠鎮(zhèn)靜催眠、生長發(fā)育及免疫器官指數(shù)的影響研究

沙愛龍，孟慶艷，郝海燕

(1 西南醫(yī)科大學(xué) 生理學(xué)教研室，瀘州 646000；2 塔里木盆地生物資源保護利用兵團重點實驗室，阿拉爾 843300；3 西南醫(yī)科大學(xué) 藥物與功能性食品研究中心，瀘州 646000)

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芳香新塔花茶對小鼠鎮(zhèn)靜催眠、生長發(fā)育及免疫器官指數(shù)的影響研究

沙愛龍1，孟慶艷2，郝海燕3

(1 西南醫(yī)科大學(xué) 生理學(xué)教研室，瀘州 646000；2 塔里木盆地生物資源保護利用兵團重點實驗室，阿拉爾 843300；3 西南醫(yī)科大學(xué) 藥物與功能性食品研究中心，瀘州 646000)

目的：研究芳香新塔花茶對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠、生長發(fā)育及免疫器官指數(shù)的影響. 方法：用不同劑量的芳香新塔花茶灌胃，用自發(fā)活動記錄法記錄60 min內(nèi)小鼠自發(fā)活動次數(shù)，利用閾劑量戊巴比妥鈉睡眠實驗法和閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實驗，觀察芳香新塔花茶鎮(zhèn)靜催眠作用. 用稱重法，觀察法及計量法研究芳香新塔花茶對小鼠生長發(fā)育及免疫器官指數(shù)的影響. 結(jié)果：芳香新塔花茶低、中、高劑量組對小鼠走動次數(shù)、舉雙前肢數(shù)、入睡時間、體重，免疫器官指數(shù)作用差異顯著(p<0.05)或差異極顯著(p<0.01)，且呈劑量依賴效應(yīng)；給藥組小鼠的生長發(fā)育狀況更加良好. 結(jié)論：芳香新塔花茶具有顯著的鎮(zhèn)靜催眠、促進生長發(fā)育及免疫增強作用.

芳香新塔花茶；鎮(zhèn)靜催眠；免疫器官指數(shù)；生長發(fā)育

當今社會中，失眠、免疫力低下的患者呈上升趨勢，普通的藥物治療往往因為口感等原因，治療體驗效果不佳. 開發(fā)一種具有鎮(zhèn)靜催眠、增強免疫力作用的保健茶是一個不錯的思路.

新疆特色藥用植物芳香新塔花(ZiziphoraclinopodioidesLam.)，是維吾爾族和哈薩克族常用藥材,又名小葉薄荷或唇香草，屬唇形科(Labiatate)新塔花屬，一般分布于我國新疆天山、阿爾泰山、準噶爾西部山地、帕米爾高原和昆侖山的山地草原及礫石質(zhì)坡地 ，中亞、蒙古、前蘇聯(lián)、伊朗及西亞至巴爾干半島也有分布[1]. 在新疆維吾爾醫(yī)藥中稱為續(xù)則或蘇則，具有疏散風熱、清利頭目、寧心安神、利水清熱、壯骨強身、清胃消食之功效，主治感冒發(fā)熱、目赤腫痛、頭痛咽痛、心悸失眠等癥[2]. 維吾爾族民間用其全草煎湯內(nèi)服或煎茶飲，可緩解胸悶、頭暈等癥狀，臨床用于治療冠心病、高血壓及調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)功能等疾病[3]. 近年來國內(nèi)外已有關(guān)于芳香新塔花藥理學(xué)方面的研究報道[4,5]. 筆者發(fā)現(xiàn)芳香新塔花具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用且無明顯毒副作用,其對小鼠離體十二指腸平滑肌收縮具有抑制作用[6,7]. 目前，關(guān)于芳香新塔花鎮(zhèn)靜催眠作用、免疫作用的研究尚未見報道，本實驗擬將芳香新塔花制備成口感好、茶香味純正的保健茶，觀察對小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用、免疫器官指數(shù)及生長發(fā)育的影響，為進一步拓展芳香新塔花臨床新用途奠定基礎(chǔ).

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1實驗動物

96只昆明種小鼠，雌雄各半，體重26～29 g，許可證號SCXK(新)2003-0001，由塔里木大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院動物實驗站提供.

1.1.2藥品與儀器

芳香新塔花(ZiziphoraclinopodioidesLam.)葉，2012年7月采于新疆伊犁州鞏留野核桃溝，經(jīng)鑒定為唇形科新塔花屬植物的干燥葉片. 紅茶為市售紅茶，蜂蜜為市售棗花蜂蜜. 戊巴比妥鈉(佛山市化工實驗廠)，地西泮(北京益民藥業(yè)有限公司)，蔗糖、檸檬酸為國產(chǎn)分析純. 精密電子天平(上海精科天平)，電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司).

1.2實驗方法

1.2.1芳香新塔花茶的制備

芳香新塔花葉片在70℃條件下烘干，然后研磨成粉，過80 目篩，低溫干燥儲存?zhèn)溆? 稱取葉片粉末，在100℃下，按照液料比(液為蒸餾水)85∶1，浸提27.5 min，獲得浸提液(濃度為0.86～1.28 g 生藥/100 mL). 然后按照浸提液6.5 g/L、蔗糖74 g/L、檸檬酸0.65 g/L、魔芋精粉0.66 g/L 和蜂蜜4.4 g/L 比例制成芳香新塔花茶. 將保健茶濃縮至含芳香新塔花濃度為2 g/kg 高劑量芳香新塔花茶(含生藥0.1 g/mL). 后稀釋兩次，各稀釋一倍，得1 g/kg 中劑量(含生藥0.05 g/mL)和0.5 g/kg 低劑量(含生藥0.025 g/mL)芳香新塔花茶，裝入磨口瓶中，均放入冰箱中冷藏備用.

1.2.2芳香新塔花茶對小鼠自發(fā)活動率的影響

將小鼠隨機分為正常對照組、陽性對照組(地西泮，5 mg/kg)、低劑量組(0.5 g/kg)、中劑量組(1 g/kg)、高劑量組(2 g/kg)，共5組，每組12只. 給藥前稱量小鼠體重并觀察小鼠在5 min內(nèi)的走動次數(shù)及舉雙前肢次數(shù). 各組小鼠連續(xù)灌胃(0.20 mL/10 g)15 d，1次/d，其中正常對照組給等體積生理鹽水，陽性對照組給予地西泮. 于末次給藥前8 h禁食不禁水. 準確記錄末次給藥后15，30，45，60 min時的5 min內(nèi)小鼠走動次數(shù)和舉雙前肢次數(shù).

1.2.3芳香新塔花茶對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡的影響

分組、灌胃同1.2.2. 末次給藥30 min后，小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉30 mg/kg(按每10 g體重注射0.3%戊巴比妥鈉0.10 mL. 戊巴比妥鈉閾下催眠量，即90%小鼠不入睡的戊巴比妥鈉最大劑量，由預(yù)試驗確定，觀察并記錄入睡動物數(shù)(注射后15 min內(nèi)小鼠翻正反射消失達1 min以上者記為入睡)，計算各組入睡率.

1.2.4芳香新塔花茶對閾劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡時間和睡眠時間的影響

分組、灌胃同1.2.2. 末次給藥30 min后，小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉閾劑量45 mg/kg(按每10 g體重注射0.3%戊巴比妥鈉0.15 mL)，記錄睡眠出現(xiàn)(翻正反射消失)和消失的時間，計算睡眠潛伏期(睡眠出現(xiàn)時間-記錄開始時間)，睡眠持續(xù)時間(睡眠消失時間-睡眠出現(xiàn)時間).

1.2.5芳香新塔花茶對小鼠生長發(fā)育與體重的影響

分組、灌胃同1.2.2. 比較觀察各組小鼠毛色光澤，手握小鼠背部感受肌肉張力. 于末次給藥后稱量小鼠體重.

1.2.6芳香新塔花茶對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

各組末次給藥后，第2 日處死小鼠. 取脾臟、胸腺、肝臟，剔除黏附組織并用濾紙吸干臟器血污后稱量，計算脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、肝臟指數(shù).

脾臟指數(shù)(mg/g)=脾臟重量(mg)/體重(g)，

胸腺指數(shù)(mg/g)=胸腺重量(mg)/體重(g)，

肝臟指數(shù)(mg/g)=肝臟重量(mg)/體重(g).

1.2.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有實驗結(jié)果的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示，所有數(shù)據(jù)分析在SPSS 13.0軟件上進行.

2　結(jié)果

2.1芳香新塔花茶對小鼠走動次數(shù)作用的影響

對照組和實驗組小鼠走動次數(shù)見表1. 與正常對照組比較，芳香新塔花茶低、中、高劑量組和地西泮組對小鼠走動次數(shù)均有抑制作用，且隨劑量的增高小鼠走動次數(shù)減少，表明不同劑量的芳香新塔花茶均能減少小鼠走動次數(shù)，隨著劑量的升高，芳香新塔花茶抑制作用顯著(p<0.01).

表1　芳香新塔花茶對小鼠走動次數(shù)作用的影響

2.2芳香新塔花茶對小鼠舉雙前肢的影響

對照組和藥物組小鼠舉雙前肢次數(shù)見表2. 與正常對照組比較，地西泮組和芳香新塔花茶低、中、高劑量組對小鼠舉雙前肢數(shù)均有抑制作用，且隨劑量的增高小鼠舉雙前肢次數(shù)減少，表明不同劑量的芳香新塔花茶均能減少小鼠舉雙前肢數(shù)，隨著劑量的升高，芳香新塔花茶有極顯著的抑制作用(p<0.01).

表2　芳香新塔花茶對小鼠舉雙前肢次數(shù)作用的影響

2.3對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率的影響

對照組和藥物組對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率的影響見表3. 與正常對照組比較，給藥組能增加小鼠入睡只數(shù)，且隨劑量升高入睡只數(shù)明顯增加.

表3　芳香新塔花茶對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率的影響

2.4對閾劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠潛伏時間、持續(xù)時間的影響

對照組和藥物組對閾劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠潛伏時間、持續(xù)時間作用的影響見表4. 與正常對照組比較，芳香新塔花茶低、中、高劑量組和地西泮組小鼠睡眠潛伏時間縮短、睡眠持續(xù)時間延長；隨芳香新塔花茶劑量的增大睡眠潛伏期顯著減少(p<0.05或p<0.01)，且顯著延長小鼠睡眠持續(xù)時間(p<0.05或p<0.01).

表4　芳香新塔花茶對閾劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠潛伏時間、持續(xù)時間作用的影響

2.5芳香新塔花茶對小鼠體重、外觀及毛色作用的影響

對照組和藥物組對小鼠體重的影響見表5. 與正常對照組比較，芳香新塔花茶低、中、高劑量組對小鼠均有增重作用，且呈劑量依賴效應(yīng)，中、高劑量組差異顯著(p<0.05，p<0.01)，給藥組小鼠的生長發(fā)育狀況更加良好，肌肉收縮更有力，外觀毛色較對照組更有光澤.

表5　芳香新塔花茶對小鼠體重的影響

2.6芳香新塔花茶對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

對照組和藥物組對小鼠免疫器官指數(shù)的影響見表6. 與正常對照組比較，芳香新塔花茶低、中、高劑量組免疫器官指數(shù)均增大(p<0.05或p<0.01)，且具劑量依賴效應(yīng)，說明芳香新塔花茶能增強小鼠的免疫器官指數(shù).

表6　芳香新塔花茶對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

3　討論

常用西藥類鎮(zhèn)靜催眠藥物在治療失眠的同時會產(chǎn)生一定的依賴性[8]，而一些中藥鎮(zhèn)靜催眠藥物有效且不產(chǎn)生依賴性. 自發(fā)活動實驗是評價中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮狀態(tài)的一項重要指標，動物的自發(fā)活動情況反映其中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能狀態(tài)，興奮時活動次數(shù)增加，抑制時活動次數(shù)減少. 本實驗結(jié)果表明，芳香新塔花茶高、中劑量組小鼠自發(fā)活動次數(shù)明顯低于正常對照組(p<0.05或0.01)；同時，與對照組比較，高劑量的芳香新塔花茶可使小鼠走動次數(shù)、舉雙前肢數(shù)明顯減少(p<0.05或0.01)，表明芳香新塔花茶對小鼠自發(fā)活動有抑制作用. 戊巴比妥類藥物是典型的中樞性抑制藥，凡是對中樞神經(jīng)有抑制作用的藥物，一般都能增強其中樞抑制作用. 本實驗研究表明，與正常對照組比較，高低劑量芳香新塔花茶與閾下劑量戊巴比妥鈉合用分別可以使小鼠睡眠潛伏時期縮短(p<0.05或0.01)和睡眠持續(xù)時間(p<0.05或0.01)延長且增加小鼠入睡只數(shù)，從而認為芳香新塔花茶有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用.

胸腺和脾臟是動物體內(nèi)主要的免疫器官，肝臟是動物機體重要的代謝器官，同時也是動物的免疫器官之一. 胸腺、脾臟、肝臟等免疫器官的重量變化，是反映動物體免疫功能的重要指標[5]. 本實驗結(jié)果表明，給予不同濃度的芳香新塔花茶，小鼠的體重、免疫器官指數(shù)有明顯的變化，且隨著濃度的升高體重有明顯的增加(p<0.05或0.01)，免疫器官指數(shù)也明顯增大(p<0.05或0.01).

結(jié)果預(yù)示芳香新塔花茶具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠、增強免疫力的作用，經(jīng)常飲用具有很好的保健作用，其鎮(zhèn)靜催眠作用、免疫增強作用機理有待于進一步研究.

[1] 米吉提·胡達爾拜地，潘曉玲．新疆植物志·第4卷[M]．烏魯木齊：新疆科學(xué)技術(shù)出版社，2004：327．

[2] 李彥華，汪常偉，江華，等．唇香草聰耳片治療突發(fā)性耳聾30例療效分析[J]．地方病通報，2006，21(3)：84-85．

[3] 楊偉俊，哈木拉提，孫玉華，等．芳香新塔花對大鼠急性心肌缺血和乳鼠心肌細胞的保護作用[J]．現(xiàn)代藥物與臨床，2010(3)：194-198．

[4] Belyaev N F, Demeubaeva A M. Chromatographic study of the composition of the essential oil ofZiziphoraclinopodioides, a vicarious form of Origanum vulgare [J]. Chemistry of Natural Compounds, 1999, 35(1): 52-54.

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[6] 沙愛龍，陳紅玲，孟慶艷．維藥芳香新塔花水提物的抗炎鎮(zhèn)痛作用及其急性毒性[J]．中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18(4)：202-204．

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[8] 孫翠婷．失眠的危害及預(yù)防措施[J]．健康大視野·醫(yī)學(xué)分冊，2007，17(5)：29-30．

Effects of theZiziphoraclinopodioidesLam Tea on Sedative-hypnotic,Immune Organ Index, Growth and Development of Mice

ShaAilong1,MengQingyan2,HaoHaiyan3

(1 Department of Physiology, Southwest Medical University, Luzhou, 646000, China; 2 Key Laboratory of Biological Resource Protection and Utilization of Tarim Basin, Xinjiang Production & Construction Group, Alar, 843300, China; 3 Drug Discovery Research Center, Southwest Medical University, Luzhou, 646000, China)

Objective: To study the effects of different doses of the tea fromZiziphoraclinopodioidesLam on sedative-hypnotic, immune function, growth and development of mice. Methods: Compared with the physiological saline groups, the effects of theZiziphoraclinopodioidesLam tea on spontaneous activity of mice，dormancy-number and dormancy-time of mice induced by pentobarbital sodium were observed，and the spleen index, thymus index, liver index, growth and development with three doses ofZiziphoraclinopodioidesLam tea were determined. Results: Compared with the physiological saline groups, the three doses of theZiziphoraclinopodioidesLam tea could inhibit the spontaneous activity，increase dormancy-number and dormancy-time of mice induced by pentobarbital sodium, and it could also obviously increase the spleen index, thymus index, liver index and strengthen the growth and development of mice. Conclusions: TheZiziphoraclinopodioidesLam tea has obviously sedative and hypnotic effects in mice and there is a synergistic effect between them and pentobarbital sodium, and the tea could also obviously strengthen the immune function, growth and development of mice.

ZiziphoraclinopodioidesLam tea; sedative-hypnotic; immune organ index; growth and development

2016-06-11

沙愛龍(1981-)，男，副教授，博士，研究方向：免疫藥理學(xué)，E-mail: lyshaailong@163.com

國家自然科學(xué)基金資助項目(31360635)；西南醫(yī)科大學(xué)人才引進科研啟動金(2014YJRC04)；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團青年科技創(chuàng)新資金專項(2012CB028)

R285.5; R967

A

1672-4321(2016)03-0057-05