不同產(chǎn)地雞眼草總黃酮含量及動態(tài)變化研究

吳瑞云，黃麗丹，蔣　婷，梁宇萍，吳美琳，劉　虹，陳龍清

(1華中農(nóng)業(yè)大學 園藝林學學院，園藝植物生物學教育部重點實驗室，武漢 430070；2中南民族大學 生命科學學院，南方少數(shù)民族地區(qū)生物資源保護與綜合利用工程中心，武漢 430074)

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不同產(chǎn)地雞眼草總黃酮含量及動態(tài)變化研究

吳瑞云1,2，黃麗丹2，蔣婷2，梁宇萍2，吳美琳2，劉虹2，陳龍清1,*

(1華中農(nóng)業(yè)大學 園藝林學學院，園藝植物生物學教育部重點實驗室，武漢 430070；2中南民族大學 生命科學學院，南方少數(shù)民族地區(qū)生物資源保護與綜合利用工程中心，武漢 430074)

目的：對雞眼草種質(zhì)資源進行了總黃酮含量的測定和評價，并探討了雞眼草中總黃酮的動態(tài)變化規(guī)律. 方法：超聲波輔助提取總黃酮，以三乙胺為介質(zhì)紫外分光光度法考察了雞眼草的總黃酮含量. 結果：不同產(chǎn)地雞眼草總黃酮含量差異極顯著，其中貴州凱里榕江雞眼草為最高，貴州余慶龍溪雞眼草含量最低；根、莖、葉的總黃酮含量差異極顯著，由高到低為葉>莖>根；雞眼草中總黃酮的積累高峰為6、7、8月；雞眼草干燥低溫中存放，總黃酮含量遠高于常溫保存. 結論：雞眼草葉片是合成和積累總黃酮的主要器官，夏季是采收雞眼草的最佳時期并適宜低溫干燥保存. 雞眼草總黃酮含量不僅與產(chǎn)地和采收時間有關，而且與生境也有關.

雞眼草；總黃酮含量；產(chǎn)地；動態(tài)變化

雞眼草為蝶形花科雞眼草屬雞眼草Kummerowiastriata(Thunb.) Schindl和長萼雞眼草Kummerowiastipulacea(Maxim.) Makino的干燥全草 ，分布很廣[1]. 民間應用歷史悠久. 可治療胃腸炎、痢疾、肝炎、夜盲癥，泌尿系統(tǒng)感染、跌打損傷、療瘡癤腫等. 雞眼草提取物具有多種生物活性，如抗炎、抗病毒、殺菌、抗腫瘤作用等[2]. 近年來，已從雞眼草中分離得到多種化合物，主要成分為黃酮類化合物，包括染料木素、槲皮素、山柰酚、 木犀草素、芹菜素及其葡萄糖苷等[3,4]. 王春景等對雞眼草抗氧化活性部位進行了篩選[5]，但是有關雞眼草不同產(chǎn)地、有效成分含量動態(tài)等均還未見報道. 本研究首次對雞眼草(Kummerowiastriata)不同產(chǎn)地、不同時間等的黃酮類化合物含量動態(tài)變化進行了分析，以期對雞眼草藥材的質(zhì)量評價、質(zhì)量控制和開發(fā)利用提供參考.

1　材料和方法

1.1材料和儀器

6月至11月(每月中旬)雞眼草采于中南民族大學南湖校區(qū)，用于分析總黃酮含量的時間動態(tài)變化；不同產(chǎn)地雞眼草于7、8月份野外采集，各采集30個樣，采集后自然陰干，密封保存. 經(jīng)中南民族大學藥學院萬定榮教授鑒定為蝶形花科雞眼草屬雞眼草Kummerowiastriata(Thunb.) Schindl.的干燥全草.

對照品：蘆丁(槲皮素-3-O-蕓香糖苷)標準品購于中國生物制品檢定所，批號：100080-200707，供UV法測定，含量為92.5%. 其余試劑均為分析純.

UV-2401分光光度計(日本島津公司)，UV-752 分光光度計(上海分析化學儀器公司).

1.2實驗方法

1.2.1樣品預處理

所采集雞眼草干品，研磨成粉末，過二號篩，充分混勻備用.

1.2.2標準溶液的制備

120℃下干燥至恒重的蘆丁標準品10 mg，加入30 mL 70%的乙醇至50 mL容量瓶中，置水浴上微熱溶解，放冷，加乙醇，搖勻配置成0.2 mg/mL蘆丁標準液.

1.2.3標準曲線的制備

蘆丁標準液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分置于25 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻. 不同梯度的蘆丁標準液各5 mL，加1%三乙胺溶液至10 mL，搖勻，靜置12 min后，以試劑空白作參比，在400 nm波長下測定吸光度. 經(jīng)回歸處理，求得回歸方程總黃酮濃度在1.0～25.0 μg/mL范圍內(nèi)，相應吸光度有良好線性關系，回歸方程為A=0.04258C-0.0138(r=0.9991).

1.2.4 雞眼草總黃酮提取

雞眼草粉末0.1 g，加入70%的乙醇10 mL，溫度75℃，超聲波功率500 W，提取45 min，放冷，稱重，用70%乙醇補足減失重量，搖勻，離心，取上清液[6].

1.2.5三乙胺法測定總黃酮含量

取供試品溶液0.5 mL，按文獻[6]方法測定總黃酮含量.

1.2.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSS20.0和Excel軟件進行總黃酮含量差異的方差分析[7].

2　結果與分析

2.1不同產(chǎn)地雞眼草的總黃酮含量比較

供試雞眼草樣品不同器官中總黃酮含量有明顯差異(p<0.01). 其中，葉中的質(zhì)量分數(shù)為2.895%～2.167%，莖中為1.182%～0.968%，根中為0.198%～0.173% (表1).

表1　不同產(chǎn)地雞眼草的總黃酮含量

其中以貴州凱里榕江所產(chǎn)雞眼草含量最高，葉可達2.895%，莖1.182%；以貴州余慶龍溪所產(chǎn)雞眼草含量最低，葉2.167%，莖0.968%；雞眼草總黃酮含量從高到低的變化順序是：1-貴州凱里榕江縣>2-湖南吉首市龍山>3-湖北恩施>4-湖北英山縣大別山>5-湖北武昌> 6-廣西河池市都安> 7-廣西桂林市恭城>8-安徽安慶市大觀>9-廣西崇左市龍州>10-貴州余慶縣龍溪 (表1). 方差分析表明不同產(chǎn)地、不同部位總黃酮含量的差異具有顯著性(p<0.01).可見總黃酮含量與供試樣品的產(chǎn)地和器官直接相關.

2.2不同采集期雞眼草的總黃酮含量比較

幼嫩期和花前期(6～8月)，雞眼草的總黃酮含量均較高；花期(9月)總黃酮含量有所下降；果期(10月)、果后期(11月)，雞眼草總黃酮含量均大幅度降低 (表2). 以上結果表明，總黃酮含量的差異與不同的采集時間直接相關. 根據(jù)雞眼草的生長規(guī)律及實驗結果，6、7、8月份含量較高，均可以采集入藥. 方差分析表明不同采集期間總黃酮含量的差異達極顯著水平(p<0.01). 以上結果說明總黃酮含量與供試樣品的不同采集期直接相關.

表2　不同采集期雞眼草總黃酮含量

2.3存儲條件、時間不同對雞眼草不同部位總黃酮含量的影響

將7月份采集于湖北武昌的雞眼草的葉、莖、根研磨成粗粉，每間隔3個月測定總黃酮含量，連續(xù)12個月；并測定2年前雞眼草樣品，結果表明，在干燥低溫(4℃)下存放，總黃酮含量均遠高于常溫自然存放(表3).

表3　不同存儲條件、不同存儲時間及不同部位的總黃酮得率

3　討論

雞眼草在我國分布廣泛，本研究中，不同產(chǎn)地的雞眼草總黃酮含量差異極為顯著(p<0.01).除了貴州余慶縣龍溪鎮(zhèn)的雞眼草之外，其他來自貴州榕江縣、湖南龍山縣、湖北(恩施市、英山縣大別山及武漢市武昌區(qū))的雞眼草的總黃酮含量均比來自廣西(都安縣、恭城縣、龍州縣)、安徽安慶市的樣品高，地理因素可能是影響種質(zhì)資源的關鍵因素. 不同產(chǎn)地雞眼草根、莖、葉的總黃酮含量測定結果均表明，葉>莖>根，差異極顯著(p<0.01)，這表明總黃酮在不同器官中的積累量有顯著差異.

采于貴州省余慶縣龍溪鎮(zhèn)雞眼草總黃酮含量顯著低于貴州省凱里榕江雞眼草(p<0.01). 這可能與產(chǎn)地的氣候因素等有關. 貴州省凱里市榕江縣平陽鄉(xiāng)位于國家級雷公山自然保護區(qū)南麓，屬亞熱帶季風性濕潤氣候. 而同在貴州省、緯度接近的余慶縣屬亞熱帶溫潤季風氣候；四季分明. 采于余慶縣的雞眼草藥材較干燥、木質(zhì)化程度較高可能受盛夏伏旱影響較大. 藥用植物有效成分的積累受諸多因素的影響，植物的生境除氣候因素之外，土質(zhì)條件等可能對植物次生代謝成分的積累均有重大影響. 其生境如何具體影響雞眼草的有效成分有待于進一步深入研究.

雞眼草黃酮含量動態(tài)變化結果表明，雞眼草在干燥低溫(4℃)下存放，總黃酮含量均高于常溫自然存放的含量；產(chǎn)地在武漢的不同生長發(fā)育時期雞眼草的總黃酮含量各不相同，幼嫩期>花前期>初花期>盛花期>果期>果后期，因此盛花期以前總黃酮含量較高，雞眼草均可以采集入藥. 本研究在確定雞眼草最佳采收期與產(chǎn)地上初步取得一定結果，但影響植物用藥的安全與療效的因素很多，比如季節(jié)、氣候、海拔等，還需要進行更全面深入的研究.參考文獻

[1]江蘇新醫(yī)學院. 中藥大辭典(上冊)[M]. 上海：上海人民出版社，1977：1215.

[2]《全國中草藥匯編》編寫組. 全國中草藥匯編(上冊)[M].2版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：443.

[3]唐人九. 人字草黃酮類化學成分研究[J]. 華西藥學雜志. 1996，11(1)：5-10.

[4]李勝華. 雞眼草中黃酮類化學成分研究[J]. 中國藥學雜志.2014，49(10)：817-820.

[5]王春景，胡小梅，張 鼎，等. 雞眼草抗氧化活性部位的篩選及其黃酮和總酚含量[J]. 中藥材，2014，37(5)：868-871.

[6]池玉梅，居羚，鄧海山，等. 分光光度測定總黃酮法的適用性[J]. 分析化學, 2010，38：893-896.

[7]李云雁，胡傳榮. 試驗設計與數(shù)據(jù)處理[M]. 北京：化學工業(yè)出版社，2005：79.

Total Flavonoid Analysis and Flavonoid Accumulation Dynamics inKummerowiastriatafrom Different Areas

WuRuiyun1,2，HuangLidan2，JiangTing2，LiangYuping2，WuMeilin2，LiuHong2，ChenLongqing1

(1 Key Laboratory of Horticultural Plant Biology (Ministry of Education)，College of Horticulture & Forestry Sciences，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China；2 Engineering Research Centre for the Protection and Utilization of Bioresource in Ethnic Area of Southern China，College of Life Science， South-Central University for Nationalities，Wuhan 430074，China)

Objective: To determinate and analyze the total flavonoids ofKummerowiastriata. collected in different places，and to analyze the variety trends of total flavonoids inK.striata. Methods: Using spectrophotometry with the medium of triethylamine，the contents of total flavonoids were determined by ethanol solution extraction assisted with ultrasonic. Results: The contents of total flavonoids inK.striatafrom different producing areas were significantly different，which was the highest inK.striatafrom Rongjiang，Guizhou province，but theK.striatafrom Yuqing，the same province showed the lowest content. The total flavonoids among leaf blade, stem and root system were significantly different and the sequence from high to low was leaf blade>stem>root system. The peak time of total flavonoids accumulation was June, July and August. The total flavonoids ofK.striatastored in low-temperature and dry places were much higher than that in usual storage. Conclusions: Leaf was the main organ for the biosynthesis and accumulation of total flavonoids inK.striata. Summer was the best time to harvestK.striata,and it is suitable to store at low-temperature and dry places. The results suggest that contents of total flavonoids relate not only to collecting place and collecting time，but also to plant biotope.

Kummerowiastriata；total flavonoid content；producing area；variety trends

2016-5-24*通訊作者陳龍清，研究方向：園林植物物質(zhì)資源及其利用，E-mail:chenlq@mail.hzau.edu.cn

吳瑞云(1968-)，女，博士研究生，講師，研究方向：藥用植物資源學，E-mail:wurain2008@126.com

國家科學技術部科技基礎性工作專項重點項目(2014FY110100)；中南民族大學中央高?；究蒲袠I(yè)務費專項資金項目(ZZY10008)

Q949.95

A

1672-4321(2016)03-0051-04