霍山石斛與鐵皮石斛對(duì)比研究進(jìn)展△

羅宇琴，肖蘇萍，趙潤(rùn)懷*，王繼永，羅光明

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004；2.中國(guó)中藥公司，北京 100195)

·綜述·

霍山石斛與鐵皮石斛對(duì)比研究進(jìn)展△

羅宇琴1，2，肖蘇萍2，趙潤(rùn)懷2*，王繼永2，羅光明1

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004；2.中國(guó)中藥公司，北京 100195)

本文主要通過(guò)整理分析霍山石斛和鐵皮石斛的相關(guān)文獻(xiàn)，基于鑒別、含量測(cè)定、指紋圖譜、藥理作用、綜合開(kāi)發(fā)利用等研究進(jìn)展，概括霍山石斛和鐵皮石斛研究的異同，為霍山石斛進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究提供參考。

鐵皮石斛；霍山石斛；指紋圖譜；藥理作用；綜合開(kāi)發(fā)利用

霍山石斛(DendrobiumhuoshanenseTang et Cheng)與鐵皮石斛(DendrobiumofficinaleKimura et Migo)均屬蘭科石斛屬多年生草本植物。霍山地區(qū)主要產(chǎn)3種石斛，即霍山石斛、鐵皮石斛、銅皮石斛。霍山石斛又稱米斛，僅分布于大別山區(qū)的安徽霍山、金寨、岳西、舒城，湖北英山等縣[1]，10月至次年6月采收。目前市場(chǎng)上流通的霍山石斛干品僅楓斗，其主要用于保健食品[2]，尚無(wú)既定的藥典標(biāo)準(zhǔn)。現(xiàn)代藥理研究表明，霍山石斛具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化、抗腫瘤、抗白內(nèi)障等作用[3]。鐵皮石斛主要分布在安徽西南部、浙江東部、福建西部、廣西西北部、湖南、云南東南部等地[4]，主要生長(zhǎng)在巖石峭壁上，11月至次年3月采收，按規(guī)格不同可分為鐵皮楓斗、干條。目前主要用于保健品，如鐵皮石斛含片、鐵皮石斛速溶粉；也有中藥復(fù)方的研制，如復(fù)方鐵皮石斛降糖膠囊、鐵皮石斛靈芝膠囊、清脂降壓茶等。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》中主要以多糖和甘露糖為指標(biāo)對(duì)鐵皮石斛進(jìn)行質(zhì)量控制[5]?，F(xiàn)代藥理研究表明，鐵皮石斛具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、抗氧化、降血糖等作用[6]。因歷代對(duì)霍山石斛的濫采導(dǎo)致資源匱乏，市場(chǎng)上長(zhǎng)期只有其名，而不知其物，一些混亂品種應(yīng)運(yùn)而生[7]。因此，在很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)研究學(xué)者錯(cuò)誤地認(rèn)為，霍山石斛是已認(rèn)識(shí)的鐵皮石斛或銅皮石斛[8]。為進(jìn)一步了解霍山石斛與鐵皮石斛的異同，本文從鑒別、含量測(cè)定、指紋圖譜、藥理作用、綜合開(kāi)發(fā)利用等方面對(duì)兩者進(jìn)行概述，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用這兩種藥材提供重要參考。

1 鑒別

1.1 性狀鑒別

霍山石斛與鐵皮石斛因生長(zhǎng)習(xí)性存在一定的差異[5，9]，故在性狀表現(xiàn)上有所區(qū)別。楊善巖等[10]研究?jī)烧咝誀顓^(qū)別，具體表現(xiàn)在：霍山石斛的莖由下向上逐漸變細(xì)，而鐵皮石斛的莖為圓柱形；鐵皮石斛的葉鞘具紫斑；霍山石斛的花為淡黃綠色，唇瓣中部有黃色斑塊[11]，而鐵皮石斛的花為淡黃色。同時(shí)，丁小余等[12]對(duì)廣西、云南、貴州等省區(qū)6個(gè)鐵皮石斛居群的形態(tài)解剖結(jié)構(gòu)和花部特征進(jìn)行研究，根據(jù)性狀分將其分為F型和H型，F(xiàn)型適合于加工優(yōu)質(zhì)楓斗，而H型不適宜。由此，根據(jù)鐵皮石斛性狀的F型或H型進(jìn)一步說(shuō)明了鐵皮石斛藥材商品規(guī)格。

1.2 顯微鑒別

魏剛等[11]從橫切面形狀、角質(zhì)層、表皮細(xì)胞、薄壁細(xì)胞、維管束、內(nèi)含物等比較了鐵皮石斛和霍山石斛莖的顯微結(jié)構(gòu)?？梢钥闯鰞烧叩膮^(qū)別在于：霍山石斛呈類圓形，邊緣有不規(guī)則波狀，鐵皮石斛呈圓形，邊緣有不規(guī)則波狀，每2～3個(gè)波狀中夾有一個(gè)深波狀彎曲；鐵皮石斛外壁及側(cè)壁稍增厚，木化；霍山石斛基本薄壁細(xì)胞期間分散有很多大型粘液腔，粘液腔直徑可達(dá)640～800 μm；鐵皮石斛含草酸鈣針晶束的粘液細(xì)胞多見(jiàn)于近表皮處。

1.3 理化鑒別

目前，石斛屬理化鑒別主要集中在對(duì)其多糖和生物堿的定性鑒別。經(jīng)GC分析，霍山石斛粗多糖的單糖成分及其摩爾比為Ara∶Glu∶Gal=11∶176∶137；鐵皮石斛多糖的單糖成分及其摩爾比為Ara∶Man∶Glu∶Gal=22∶29∶272∶174。陳乃東等[14]采用改良碘化鉍鉀進(jìn)行薄層鑒別，霍山石斛組培植株、野生植株分別檢出2個(gè)和4個(gè)生物堿顯色斑。

1.4 分子鑒別

鄧輝等[15]通過(guò)重復(fù)序列聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ISSR-PCR)分子標(biāo)記方法分析霍山產(chǎn)3種藥用石斛，證明霍山石斛并非是一類鐵皮石斛，而應(yīng)是獨(dú)立的一個(gè)種。劉明珍等[16]用ISSR-PCR技術(shù)分析霍山產(chǎn)3種石斛及其他產(chǎn)地的幾種藥用石斛，發(fā)現(xiàn)霍山石斛及其相似種存在較大的、穩(wěn)定的差異。丁鴿等[17]研究表明，隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記(RAPD)方法可以作為鐵皮石斛野生居群遺傳多態(tài)性、居群親緣關(guān)系和分子鑒別研究的有效手段。樊洪泓等[18]發(fā)現(xiàn)，基于RAPD分子標(biāo)記的聚類結(jié)果表明，霍山石斛在分類地位上更接近于銅皮石斛，而與鐵皮石斛的親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)。而SRAP標(biāo)記的聚類結(jié)果表明，鐵皮石斛與霍山石斛具有較近的親緣關(guān)系。

2 含量測(cè)定

霍山石斛中包含多種化學(xué)成分，如多糖、生物堿、微量元素、氨基酸等。鐵皮石斛中化學(xué)成分包括多糖、生物堿、氨基酸、微量元素及鼓楂菲和毛蘭素兩種菲類化合物等。

2.1 多糖含量及其水解單糖摩爾比

霍山石斛中水溶性多糖的含量占多糖總量的90%以上[3]。郝杰[19]通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)分析霍山石斛發(fā)現(xiàn)，在不同多糖片段S1、S2、S3、S4和總多糖中葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖相對(duì)摩爾比分別是100∶21∶6.3∶16.7、100∶22.2∶5.6∶6.3、100∶21∶164∶12.2、100∶11.5∶59.8∶30.3、100∶31.7∶28.5∶17.9。查學(xué)強(qiáng)等[1]從霍山石斛水溶性多糖中分離出HPS-1B23，由葡萄糖、甘露糖和半乳糖按31∶10∶8的分子摩爾比組成。

鐵皮石斛的多糖含量在26.52%～46.78%，甘露糖含量為13.36%～25.25%[20]。龔慶芳等[21]得出鐵皮石斛多糖比例為27.3%，單糖組成摩爾比為D-甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=3.28∶31.83∶1.51∶1。賓宇波等[22]通過(guò)柱前衍生外標(biāo)法定量得知，D-甘露糖∶L(+)-鼠李糖∶D-葡萄糖=1.936∶0.856∶0.691。

2.2 生物堿

陳乃東等[14]發(fā)現(xiàn)，霍山石斛組培植株和野生植株生物堿總提物得率分別為(48±11)、(70±19) mg·g-1，總生物堿含量測(cè)定結(jié)果分別為(0.29±0.11)‰、(0.43±0.15)‰。

諸燕等[23]發(fā)現(xiàn)，人工栽培鐵皮石斛與市場(chǎng)購(gòu)買的鐵皮楓斗藥材總生物堿在0.019%～0.043%；浙江省11個(gè)鐵皮石斛種質(zhì)一年生、二年生、三年生樣品平均總生物堿分別為0.0253%、0.0270%、0.0326%；云南產(chǎn)一年生鐵皮石斛平均總生物堿為0.0343%。

2.3 微量元素

吳慶生等[24]比較霍山3種石斛的微量元素，其中Zn、Cu、Fe、Mn、Sr有較高含量，霍山石斛莖中Zn、Cu、Fe、Ni、Cr等元素比鐵皮石斛高，F(xiàn)e、Ni、Cr、Mn比銅皮石斛高。另外，對(duì)于根、莖、葉3個(gè)部位來(lái)說(shuō)，幾乎各種無(wú)機(jī)元素在莖中的含量都是最低的；Fe、Al、V、Cr、Zn、Ni、P在根中最高；B、Ca、Mg、K、Mn、Sr、Ba在葉內(nèi)最高。

諸燕等[25]發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛含有豐富的人體必需金屬元素，鉀、鈣、鎂、錳、鋅、鉻、銅平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1205.23、766.82、158.25、31.06、4.28、8.28、0.97 mg·kg-1。

2.4 氨基酸

霍山石斛含有蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸等多種氨基酸，不同部位氨基酸含量不一致，其中各種氨基酸及其總量均為葉比根含量高；隨著生長(zhǎng)年限的增長(zhǎng)，莖中各種氨基酸含量及其總量基本呈下降趨勢(shì)[26]。

鐵皮石斛中7種人體必需氨基酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.28～2.96 mg·g-1，其他9種基本氨基酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.53～4.20 mg·g-1[27]。

3 指紋圖譜分析

3.1 高效液相

魏剛等[28]以黃酮類成分指標(biāo)群建立霍山石斛(霍山米斛)HPLC特征圖譜分析方法，得出栽培品與野生品的圖譜區(qū)別。何鐵光等[29]研究建立的13批鐵皮石斛的指紋圖譜，以各共有峰相對(duì)面積不同進(jìn)行分類。付娟等[30]建立石斛類藥材的超高液相色譜(UPLC)指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛不含濱蒿內(nèi)酯、石斛酚、毛蘭素3種成分。

3.2 紅外光譜

李兆奎等[31]發(fā)現(xiàn)，不同種石斛的粉末紅外圖譜在1 700～1 200 cm-1和1 000～700 cm-1處特征性明顯。根據(jù)相關(guān)研究[19，32]對(duì)霍山石斛和鐵皮石斛的紅外光譜進(jìn)行解析，兩者指紋特征區(qū)主要在1 000～700 cm-1具有顯著差別。

4 藥理作用

石斛屬藥材其藥理作用主要表現(xiàn)為增強(qiáng)免疫力、抗氧化、抗腫瘤、抗白內(nèi)障、降血糖等，且其藥理活性物質(zhì)大多數(shù)為石斛多糖，少量為生物堿，僅鐵皮石斛的活性成分還包括聯(lián)芐類?；羯绞丸F皮石斛主要存在的異同見(jiàn)表1。

表1 霍山石斛與鐵皮石斛藥理活性對(duì)比表

5 綜合開(kāi)發(fā)利用

從各地銷售市場(chǎng)調(diào)研看，鐵皮石斛的銷售市場(chǎng)目前主要在浙江，其次是上海、北京等大都市，包括主產(chǎn)區(qū)云南在內(nèi)的大部分區(qū)域鐵皮石斛銷售還未形成市場(chǎng)[42]。目前市場(chǎng)銷售的一是干品，主要為鐵皮楓斗；二是由鐵皮石斛加工的保健品，主要有3種類型，即固體制劑、口服液和浸膏，固體制劑如鐵皮石斛顆粒劑，鐵皮石斛靈芝膠囊，鐵皮石斛含片等，口服液如鐵皮石斛復(fù)合口服制劑，浸膏如鐵皮石斛中藥醒酒膏；三是鮮品直接以茶的形式銷售，包括莖、花和葉，其中莖為最重要的銷售品?；羯绞男问脚c鐵皮石斛類似，也包括楓斗、保健品、鮮品3種，同時(shí)霍山石斛有一種以其他加工原料進(jìn)行發(fā)酵的霍山石斛醋，但兩者在中成藥方面的開(kāi)發(fā)還有待完善。

6 展望

長(zhǎng)期以來(lái)，由于霍山石斛與已熟知的鐵皮石斛或銅皮石斛易混淆，導(dǎo)致霍山石斛化學(xué)成分的研究尚不十分明確，因此亟需對(duì)霍山石斛化學(xué)成分及其提取分離工藝進(jìn)行研究。

對(duì)于霍山石斛的指紋圖譜研究主要集中在液相特征圖譜和紅外光譜，但未能得出特征峰所對(duì)應(yīng)的成分。對(duì)霍山石斛的薄層鑒別研究的文獻(xiàn)較少，2010版《中華人民共和國(guó)藥典》中對(duì)鐵皮石斛以總黃酮進(jìn)行鑒別，也有學(xué)者以多糖的水解產(chǎn)物進(jìn)行鑒別。這些方法均為霍山石斛的鑒別分析提供依據(jù)。

目前大部分研究表明，霍山石斛具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化、抗腫瘤、抗白內(nèi)障、降血糖等藥理作用，但其物質(zhì)基礎(chǔ)與藥理活性作用機(jī)制之間的關(guān)系尚不明確，有待進(jìn)一步深入研究。霍山石斛和鐵皮石斛的綜合利用主要集中于中藥保健品，其中成藥的研究較少，有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。

[1] X Q Zha，J PLuo，S T Jiang.Structure identification of a new immunostimulating polysaccharide from the stems of Dendrobium huoshanense[J].Carbohydrate Polymers，2007，69(1)：86-93.

[2] 周旋，周海燕，李向東，等.霍山石斛商品質(zhì)量研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2015，6(17)：533-539.

[3] 黃森.霍山石斛多糖提取分離以及抗腫瘤活性的研究[D].合肥：合肥工業(yè)大學(xué)，2007.

[4] 龔慶芳，周浩，王新桂，等.不同產(chǎn)地鐵皮石斛的品質(zhì)比較研究[J].北方園藝，2013(8)：162-165.

[5] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[6] 柴金珍，黃娟萍，劉靜，等.不同石斛的藥理作用研究現(xiàn)狀[J].中成藥，2013，35(12)：2725-2730.

[7] 王德群，彭華勝.霍山石斛的名實(shí)混亂與原植物[J].中國(guó)中藥雜志，2004，29(12)：80-81.

[8] 芮正祥，王若葵，武祖發(fā).安徽中藥志[M].合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，1997.

[9] 陳存武，戴軍，姚厚軍，等.霍山石斛資源與鑒定研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2013，37(3)：84-87.

[10] 楊善巖，王升貴，李海龍.石斛的分類鑒別研究現(xiàn)狀[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41(4)：1495-1497.

[11] 魏剛，順慶生，楊明志.石斛求真[M].四川：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2014.

[12] 丁小余，徐珞珊，王崢濤，等.鐵皮石斛居群差異的研究(Ⅰ)——植物體形態(tài)結(jié)構(gòu)的差異[J].中草藥，2001，32(9)：63-66

[13] 李秀芳.霍山石斛和四種藥典石斛多糖降血糖活性比較研究[D].合肥：合肥工業(yè)大學(xué)，2012.

[14] 陳乃東，高峰，林欣，等.不同種源霍山石斛生物堿比較研究[J].中藥材，2014，37(6)：953-956.

[15] 鄧輝，陳乃富，李耀亭，等.霍山產(chǎn)3種藥用石斛及其雜交優(yōu)勢(shì)種的ISSR-PCR分子標(biāo)記鑒別[J].種子，2009，28(2)：43-45.

[16] 劉明珍，陳乃富，劉秀珍，等.道地藥材霍山石斛及其相似種的分子鑒定[J].生物學(xué)雜志，2009，26(05)：34-36.

[17] 丁鴿，丁小余，沈潔，等.鐵皮石斛野生居群遺傳多樣性的RAPD分析與鑒別[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2005，40(11)：68-72.

[18] 樊洪泓，李廷春，邱婧，等.石斛屬幾種植物遺傳關(guān)系的SRAP和RAPD比較分析[J].中草藥，2010，41(4)：627-632.

[19] 郝杰.霍山石斛不同分子量多糖的抗氧化研究[D].合肥：合肥工業(yè)大學(xué)，2009.

[20] 王建方，袁玉鮮，王如偉，等.采收期內(nèi)鐵皮石斛多糖類成分含量比較[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2013，48(19)：1691-1692.

[21] 龔慶芳，周浩，王新桂，等.7種石斛多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定及單糖組成分析[J].食品科技，2013，38(3)：172-175.

[22] 賓宇波，王亞蕓，安欣，等.鐵皮石斛多糖分離純化及單糖組成測(cè)定[J].食品工業(yè)科技，2014，36(4)：122-125.

[23] 諸燕，張愛(ài)蓮，何伯偉，等.鐵皮石斛總生物堿含量變異規(guī)律[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35(18)：2388-2391.

[24] 吳慶生，楊道麒，于力文，等.中藥霍山石斛的微量元素分析及TE圖譜鑒定[J].微量元素與健康研究，1995，12(1)：31-32.

[25] 諸燕，苑鶴，李國(guó)棟.鐵皮石斛中11種金屬元素含量的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36(3)：356-359.

[26] 丁亞平，吳慶生，楊道麒，等.霍山石斛不同部位中必需微量元素與必需氨基酸的相關(guān)性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，1994，22(3)：265-267.

[27] 張愛(ài)蓮，魏濤，斯金平，等.鐵皮石斛中基本氨基酸含量變異規(guī)律[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36(19)：2632-2635.

[28] 魏剛，順慶生，戴亞峰，等.霍山石斛HPLC特征圖譜研究[J].中成藥，2014，36(12)：2642-2644.

[29] 何鐵光，盧聲仙，王愛(ài)勤，等.廣西鐵皮石斛HPLC指紋圖譜研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2012，24(3)：353-358.

[30] 付娟，杜靜，黃林芳.基于UPLC法的石斛類藥材快速鑒別[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，29(1)：47-51.

[31] 李兆奎，孫彩華，李美琴.鐵皮石斛與幾種常用混淆品的紅外光譜鑒別[J].海峽藥學(xué)，2005，17 (3)：91-93.

[32] 劉文杰.鐵皮石斛的紅外光譜定性定量研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

[33] 郝冉，王正明，查學(xué)強(qiáng)，等.霍山石斛多糖的腸黏膜免疫調(diào)節(jié)活性及在小腸中的吸收分布[J].食品科學(xué)，2014，35(9)：256-259.

[34] 黃民權(quán)，蔡體育，劉慶倫.鐵皮石斛多糖對(duì)小白鼠白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞移動(dòng)抑制因子的影響[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，1996，8(3)：39-40.

[35] 郝杰，查學(xué)強(qiáng)，鮑素華，等.霍山石斛不同分子量多糖體外抗氧化研究[J].食品科學(xué)，2009，30(15)：94-98.

[36] 查學(xué)強(qiáng)，王軍輝，潘利華，等.石斛多糖體外抗氧化活性的研究[J]. 食品科學(xué)，2007，10(28)：92-93.

[37] 鮑麗娟，王軍輝，羅建平.4種石斛水提物對(duì)人宮頸癌HeLaS3 細(xì)胞和肝癌 HepG2 細(xì)胞的抑制作用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(36)：15968-15970.

[38] 何苗.霍山石斛膠囊抗衰老及對(duì)DM大鼠降血糖作用的研究[D].合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[39] 吳昊姝，徐建華，陳立鉆，等. 鐵皮石斛降血糖作用及其機(jī)制的研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2004，29(2)：160-163.

[40] 李秀芳，鄧媛元，潘利華，等.霍山石斛多糖對(duì)糖尿病性白內(nèi)障大鼠眼球晶狀體組織抗氧化作用的研究[J].中成藥，2012，34(3)：418-421.

[41] Luo J P，Deng Y Y，Zha X Q. Mechanism of polysaccharides from Dendrobium huoshanense on streptozotocin-induced diabetic Cataract[J].Pharmaceutical Biology，2008，46(4)：243.

[42] 吳韻琴，斯金平.鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及可持續(xù)發(fā)展的探討[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35(15)：2032-2036.

ResearchProgressinComparativeStudyofDendrobiumhuoshanenseandD.officinale

LUOYuqin1，2，XIAOSuping2，ZHAORunhuai2*，WANGJiyong2，LUOGuangming1

(1.JiangxitraditionalChinesemedicaluniversityNanchang330004，China；2.ThetraditionalChinesemedicalcompanyofChina，Beijing100195，China)

By collecting and summarizing the related literature，the article reviews the research progress in comparative studies ofDendrobiumhuoshanense；D.officinalebased on the identification，content determination，fingerprint，pharmacological effects and comprehensive exploitation and utilization.

Dendrobiumhuoshanense；D.officinale；fingerprint；pharmacological effects；comprehensive development and utilization

2015-08-13)

江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心(2013)

*

趙潤(rùn)懷，研究員，研究方向：中藥資源與中藥材生產(chǎn)加工；Tel：(010)88468257，E-mail：zhaorunhuai@sina.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.029