骨癆敵薄膜衣片中4種藥材的薄層色譜法鑒別△

胡錦蘋，王小平*，白吉慶，王興海

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué) 制藥廠，陜西 咸陽 712038)

骨癆敵薄膜衣片中4種藥材的薄層色譜法鑒別△

胡錦蘋1，王小平1*，白吉慶1，王興海2

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué) 制藥廠，陜西 咸陽 712038)

目的建立骨癆敵薄膜衣片中三七、黃芪、骨碎補(bǔ)和沒藥的薄層鑒別方法。方法采用對(duì)照品、對(duì)照藥材雙對(duì)照鑒別三七，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨溶液(5→50)(4∶1∶5)上層溶液為展開劑，噴以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰，在可見光下檢視；采用對(duì)照藥材對(duì)照鑒別黃芪，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨溶液(5→50)(4∶1∶5)上層溶液為展開劑，取出，晾干，在紫外燈(254 nm)下檢視；采用柚皮苷為對(duì)照，鑒別骨碎補(bǔ)，以三氯甲烷-甲醇-水-冰乙酸(13∶4∶1∶1.5)為展開劑，噴以1 %三氯化鋁(AlCl3)溶液，在紫外燈(365 nm)下檢視；采用對(duì)照藥材對(duì)照鑒別沒藥，以環(huán)己烷-丙酮(9∶2)為展開劑，在紫外燈(365 nm)下檢視。結(jié)果4種藥材的TLC中，供試品色譜中，在與對(duì)照品或?qū)φ账幉纳V相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照均無干擾。結(jié)論所建立的4種藥材的TLC鑒別方法簡便可行、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于骨癆敵薄膜衣片中三七、黃芪、骨碎補(bǔ)和沒藥的薄層鑒別。

骨癆敵薄膜衣片；薄層色譜法；三七；黃芪；骨碎補(bǔ)；沒藥

骨癆敵注射液已收載于《部頒中藥·成方制劑》第二十冊(cè)，作為經(jīng)過中醫(yī)辯證組方的中藥復(fù)方制劑，其由三七、黃芪、骨碎補(bǔ)、乳香和沒藥組成，具有益氣養(yǎng)血、補(bǔ)腎壯骨、活血化瘀的功能，在骨關(guān)節(jié)結(jié)核、肺結(jié)核等各種結(jié)核病以及瘤型麻風(fēng)病的治療中不易產(chǎn)生耐藥性，且效果明顯[1]。骨癆敵薄膜衣片是在原骨癆敵注射液的基礎(chǔ)上改進(jìn)劑型而制成的制劑。骨癆敵注射液標(biāo)準(zhǔn)中鑒別項(xiàng)下僅有三七的鑒別，制樣過程較復(fù)雜、耗時(shí)，且該展開系統(tǒng)用于骨癆敵薄膜衣片中三七的鑒別，斑點(diǎn)分離度不好。本次研究重新建立了骨癆敵薄膜衣片中三七的薄層鑒別方法，增加了黃芪、骨碎補(bǔ)和沒藥的薄層鑒別方法，可為骨癆敵薄膜衣片的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BT125D型雙量程電子分析天平(德國賽多利斯)；KQ-300VDE型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；ZF-90多功能暗箱式紫外透射儀(上海寶山顧村電光儀器廠)。

1.2 試藥

三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七對(duì)照藥材、膜莢黃芪對(duì)照藥材、骨碎補(bǔ)對(duì)照藥材、乳香對(duì)照藥材、天然沒藥對(duì)照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為110745-201318，110704-201424，110703-201529，110754-201525，120941-201409，121462-201304，121169-201304，120970-201305，120967-201405)；硅膠G(化學(xué)純，青島海浪硅膠干燥劑廠)；羧甲基纖維素鈉(分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心)；其他試劑均為分析純(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)。

骨癆敵薄膜衣片(批號(hào)分別為150601，150603，150605)由陜西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 硅膠G薄層板的制備及預(yù)處理

將1份硅膠G加3份5‰的羧甲基纖維素鈉的水溶液，在研缽中用研杵沿一個(gè)方向研磨混合，調(diào)成均勻糊狀物，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地以直線移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(薄層厚度為0.2～0.3 mm)。取下涂好的玻板于室溫在水平臺(tái)上晾干，在110 ℃活化30 min，置干燥箱中備用。使用前在反射光和透射光下檢視，表面應(yīng)均勻、平整、光滑、無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染。

2.2 三七的TLC鑒別

取本品適量，研細(xì)，取5 g，加水10 mL，潤濕，加用水飽和的正丁醇20 mL，超聲30 min，取上清液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液[2]。另取三七對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對(duì)照品適量，分別加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為4、4、4、1 mg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨溶液(5→50)(4∶1∶5)上層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和層析缸中展開，取出，晾干，噴以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，見圖1。

注：1.三七對(duì)照藥材；2.人參皂苷Rb1對(duì)照品；3.人參皂苷Re對(duì)照品；4.人參皂苷Rg1對(duì)照品；5.三七皂苷R1對(duì)照品；6～8.供試品；9.陰性對(duì)照。圖1 三七TLC圖

2.3 黃芪的TLC鑒別

取黃芪對(duì)照藥材1 g，加水10 mL，潤濕，加用水飽和的正丁醇20 mL，超聲30 min，取上清液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，制成對(duì)照藥材溶液。同法制備陰性對(duì)照溶液。吸取2.2項(xiàng)下的供試品溶液[2]和上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨溶液(5→50)(4∶1∶5)上層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和層析缸中展開，取出，晾干，置紫外燈(254 nm)下，檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，見圖2。

注：1.黃芪對(duì)照藥材；2～4.供試品；5.陰性對(duì)照。圖2 黃芪TLC圖

2.4 骨碎補(bǔ)的TLC鑒別

取本品適量，研細(xì)，取5 g，加甲醇30 mL，超聲30 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取柚皮苷對(duì)照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.5 mg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水-冰乙酸(13∶4∶1∶1.5)為展開劑[3]，展開，取出，晾干，噴以1 %三氯化鋁溶液，置紫外燈(365 nm)下，檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，見圖3。

注：1.柚皮苷對(duì)照品；2～4.供試品；5.陰性對(duì)照。圖3 骨碎補(bǔ)TLC圖

2.5 沒藥的TLC鑒別

取本品適量，研細(xì)，取5 g，加70 %乙醇20 mL，回流提取1 h，過濾，濾液蒸干，另取沒藥對(duì)照藥材1 g，分別加石油醚20 mL，超聲30 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，分別作為供試品溶液和對(duì)照藥材溶液。按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(9∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下，檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，見圖4。

注：1.沒藥對(duì)照藥材；2～4.供試品；5.陰性對(duì)照。圖4 沒藥TLC圖

3 結(jié)論

本試驗(yàn)通過反復(fù)優(yōu)選提取方法和展開條件，建立的骨癆敵薄膜衣片中三七、黃芪、骨碎補(bǔ)和沒藥4種藥材的TLC鑒別方法簡便可行、快捷準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可作為骨癆敵薄膜衣片中三七、黃芪、骨碎補(bǔ)和沒藥的定性鑒別方法。

4 討論

薄層色譜法是中藥復(fù)方制劑定性鑒別的主要方法，具有專屬性強(qiáng)、易于操作等特點(diǎn)[4]，故骨癆敵薄膜衣片中4種藥材的定性鑒別均采用TLC法。

在三七的鑒別中，曾參考2015年版《中華人民共和國藥典》三七藥材鑒別項(xiàng)下的方法[5]，但該方法的制樣過程繁瑣、耗費(fèi)時(shí)間，因此本試驗(yàn)參照文獻(xiàn)[2]的方法，并在此基礎(chǔ)上對(duì)制樣方法進(jìn)行改進(jìn)，采用2.2項(xiàng)下的方法鑒別三七，在可見光下檢視，斑點(diǎn)清晰，無陰性干擾。

在黃芪的鑒別中，曾參考2015年版《中華人民共和國藥典》黃芪藥材鑒別項(xiàng)下的方法[5]，但該方法的制樣過程復(fù)雜，可操作性不強(qiáng)，因此本試驗(yàn)參照文獻(xiàn)[2]的方法，并在此基礎(chǔ)上對(duì)制樣方法進(jìn)行改進(jìn)，同時(shí)對(duì)是否噴顯色劑、檢視波長等進(jìn)行優(yōu)化，采用2.3項(xiàng)下方法鑒別黃芪，在紫外燈(254 nm)下檢視，斑點(diǎn)清晰，無陰性干擾。在骨碎補(bǔ)的鑒別中，參考文獻(xiàn)[3]中的方法，并在此基礎(chǔ)上對(duì)制樣方法進(jìn)行個(gè)改進(jìn)，簡化過程，節(jié)省時(shí)間，得到的斑點(diǎn)清楚，且無陰性干擾。

在骨碎補(bǔ)的鑒別中參考文獻(xiàn)[3]中的方法，并在此基礎(chǔ)上對(duì)制樣方法進(jìn)行改進(jìn)，簡化過程，節(jié)省時(shí)間，得到的班點(diǎn)清晰，且無陰性干擾。

在沒藥的鑒別中，參考文獻(xiàn)[5-6]的方法，并在此基礎(chǔ)上對(duì)其展開條件進(jìn)行優(yōu)化，以環(huán)己烷-丙酮(9∶2)為展開系統(tǒng)，得到的斑點(diǎn)清晰，且重復(fù)性好。

2015年版《中華人民共和國藥典》采用氣相色譜法對(duì)乳香進(jìn)行定性鑒別[5]，但該方法僅以α-蒎烯對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，有一定的局限性。而本文采用專屬性好、簡單方便的TLC法對(duì)其進(jìn)行鑒別。通過對(duì)制樣方法、展開條件等優(yōu)化，TLC展開效果仍不理想，在供試品色譜中，不能完全顯示出與對(duì)照藥材相應(yīng)位置上的斑點(diǎn)，這可能與制劑過程中乳香的處理有關(guān)，故乳香的薄層鑒別方法未納入正文。對(duì)于乳香的TLC鑒別方法有待進(jìn)一步探索。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部中藥成·方制劑：第二十冊(cè)[S].北京：中華人民共和國藥典委員會(huì):1998.

[2] 王術(shù)玲.人參、三七、黃芪的薄層色譜鑒別[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，4(2)：48-50.

[3] 王躍生，李計(jì)萍.骨碎補(bǔ)中柚皮甙的薄層定性定量方法的研究[J].中國中藥雜志，1998，23(11)：685-686.

[4] 許梅.薄層色譜法在中藥復(fù)方制劑中的應(yīng)用[N].中國中醫(yī)藥報(bào)，2015-3-26(6).

[5] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[6] 周本杰，張笑云，李梅，等.骨傷酒中沒藥及紅花的薄層色譜鑒別[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2000，11(9)：803-804.

StudyonTLCofFourKindsofChineseHerbsinGulaodiFilmcoatedTablet

HUJinping1，WANGXiaoping1*，BAIJiqing1，WANGXinghai2

(1.ShaanxiUniversityofChineseMedicine，Xianyang712046，China；2.ShaanxiUniversityofChineseMedicinepharmaceuticalfactory，Xianyang712038，China)

Objective：To establish a TLC method to identify Notoginseng Radix et rhizoma，Astragali Radix，Drynariae Rhizoma and Myrrha of Gulaodi filmcoated tablet.MethodsUsing the herb of Notoginseng Radix et rhizoma，ginsenoside Rb1，ginsenoside Re，ginsenoside Rg1，notoginsenoside R1as references，and the n-butyl alcohol-ethyl acetate-dilute ammonia solution(5→50)(4∶1∶5)upper solution as the developing solvent，the developed chromatograms were sprayed with 10 % sulfuric acid-ethanol solution，at 105 ℃ heating to spot to show a color clear.Notoginseng Radix et rhizome were visible in the chromatograms.Using the herb of Astragali Radix as reference，and the n-butyl alcohol-ethyl acetate-dilute ammonia solution(5→50)(4∶1∶5)upper solution as developing solvent，Astragali Radix was identified under UV(254 nm).Using the naringin as reference，and the chloroform-methanol-water-acetic acid(13∶4∶1∶1.5)as the developing solvent，the developed chromatogram was spraying with 1 % aluminium trichloride solution，Drynariae Rhizoma was visible under UV(365 nm.Using the herb ofMyrrhaas reference，and the cyclohexane-acetone(9∶2)as the developing solvent，Myrrhawas detected under UV.ResultsThe TLC spots of four kinds of Chinese herbs in samples were visible at the corresponding positions of reference substances or reference herbs without negative interference.ConclusionThe TLC methods of four kinds of Chinese herbs were simple，feasible，specific and reproducible，which can be used for the identification of Notoginseng Radix et rhizoma，Astragali Radix，Drynariae Rhizoma and Myrrha of Gulaodi filmcoated tablet.

Gulaodi filmcoated tablet；TLC；Notoginseng Radix et rhizoma；Astragali Radix；Drynariae Rhizoma；Myrrha

2015-12-22)

陜西省咸陽市科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2012K06-07)

*

王小平，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)及新藥開發(fā)研究；Tel：(029)38185165，E-mail：wangxiaoping323@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.8.024